Aspergillus niger во отомикоза Кои се мажите во црно во отомикоза PDF Бесплатно преземање
Теза Aspergillus niger кај отомикоза Кои се мажите во црно кај отомикозата? поднесено од Марсел Шофер Мат. Бр .: 0412267 за да се добие академска диплома доктор на медицина (Dr.med.univ.) на Медицинскиот универзитет во Грац Испитувач: Асс-Проф. Прив.-Доз. Инг Маг.д-р Валтер Бузина, Универзитет за хигиена, микробиологија и медицина на животната средина Унив. Проф. Дорис Ланг-Лоидолт, Универзитетска клиника за ОРЛ Грац Грац, јули 2011 година
Декларација за чест Изјавувам за моја чест дека сам ја подготвив оваа научна работа и дека ги извршив активностите директно поврзани со неа. Јас исто така изјавувам дека не сум користел никакви помагала освен наведените. Ги запазив сите авторски и договорни права на користените извори на литература, ги користев само наведените извори и ги обележав пасусите земени буквално или во однос на содржината како таква од користените извори. Дадената поддршка за време на работниот процес, вклучително и значајни упатства за менторство, е специфицирана во целост. Оваа теза е доставена во печатена и електронска форма и сè уште не е доставена до друг орган за испитување. Грац, јули 2011 година (Марсел Шофер)
Благодарност Би сакал да им се заблагодарам на сите што ми помогнаа да ја завршам оваа работа: Институт за хигиена, микробиологија и медицина на животна средина и Универзитетски клиники за медицина на уво, нос и грло во Грац и Инсбрук за обезбедување на потребната опрема и материјали. Асс.-Проф. Прив.-Доз. Инг Маг.д-р Валтер Бузина и Унив.-Проф. Д-р Дорис Ланг-Лоидолт за научен надзор. Сите колеги, особено Бетина Хајлинг, за нивната практична поддршка. Волшебникот Питер Цауфер за корекција на ова дело. На мојот брат Патрик за графичка и техничка помош. Моите родители кои сакаат,убов, Вернер и Елфрид, за придружба и поддршка на пациентот во текот на студијата за човечка медицина и за можна важна и незаменлива фаза од животот. На мојот кум, д-р. Хелмут Шофер, без кого никогаш не би учел медицина.
Содржина 1. Вовед. 1 1.1 Историја. 1 1.2 Што се отомикози. 4 1.3 Анатомија и хистологија на надворешниот слушен канал. 6 1.4 Биологија на габите. 9 1.4.1 Класификација и номенклатура. 9 1.4.2 Систем D-H-S: класификација на медицински важни печурки. 11 1.4.3 Структура на клетката на печурката. 12 1.4.4 Физиологија. 14 1.4.5 Услови за живот и начин на живот на медицински важни габи. 15 1.4.6 Микоппатии. 17 1.5 Цел на работата. 18 2. Материјал и методи. 20 2.1 Работни чекори. 20 2.2 Примерни материјали. 20 2.3 Културни медиуми. 21 2.4 Молекуларна биолошка идентификација. 21 2.4.1 изолација на ДНК. 22 2.4.2 ПЦР. 22 2.4.3 Секвенционирање на ДНК. 25 2.4.4 Анализа на редослед и база на податоци. 26 3. Резултати. 27 3.1 Морфологија. 27 3.2 Молекуларни биолошки резултати. 31 3.2.1 изолација на ДНК и PCR. 32 3.2.2 Секвенционирање на ДНК. 33 3.3 Медицинска евиденција. 57 3.4 Статистичка проценка на демографските податоци за сите позитивни наоди на габи од увото (2006-2010). 63 4. Дискусија. 67 4.1 Биолошка дискусија. 67 4.2 Клиничка дискусија. 69 5. Резиме. 74 6. Апстракт. 76 7. Литература. 77 Додаток. 81
Кратенки A. d. Аква дестилата, дестилирана вода bp базен пар ddntp дидеоксинуклеотид трифосфат dntp деоксинуклеотид трифосфат ДНК деоксирибонуклеинска киселина, деоксирибонуклеинска киселина EDTA етилендиаминтетрацетна киселина Eppi 1,5 ml реакција сад EtBr етидиум бромична киселина ETS внатрешна транскрибирана реакција простор центрифугална сила RT собна температура од A. Aspergillus Taq Thermus aquaticus GG десен ушен канал. десно лево остави RNA рибонуклеинска киселина bt2a/b тубулин буквар о. B. без наоди sp./spp. Видови/неколку видови
Тимпанична мембрана (Membrana tympanica) Тимпаничната мембрана е жилеста кожа помеѓу надворешниот слушен канал и тимпаничната празнина со трислојна структура, таа е граница помеѓу надворешното и средното уво. Aspergillus niger кај отомикози 8
2. Материјал и методи 2.1 Работни чекори Организациска шема на чекорите за работа, за која подетално ќе се дискутира подолу: Апликација до етичкиот комитет со глас во додаток ЕНТ амбулантско одделение + размаски на надворешниот слушен канал со помош на брисеви Одгледување брисеви на бактериолошки и миколошки медиум Морфолошка идентификација Преголема вакцинација Молекуларна биолошка идентификација: Изолација на ДНК по 24 часа ITS-PCR ТБ-секвенционирачки тубулин за попрецизна диференцијација помеѓу два вида. 2.2 Материјал примерок Лицата со дијагностицирана инфекција на уво во амбулантски клиники на ЕНТ универзитетските клиники во Грац и Инсбрук беа подобни за студијата. Откако учесниците во студијата беа информирани и им беше дадена согласност, беа земени брисеви од надворешниот слушен канал со помош на брисеви (стерилни брисеви за транспорт од Копан). Aspergillus niger кај отомикози 20
користени печурки. Варијацијата на некодирачкиот регион ИТС се користи за разликување помеѓу родовите и популациите. За реакцијата на PCR, прво се подготвува главна мешавина во која се содржани сите компоненти (пар на буквар, четирите нуклеотиди, пуфер и ДНК полимераза), освен ДНК. 18,8 μl од ова се пипетираат во 0,2 ml синџири на реакциски садови и 1,2 μl ДНК се додаваат на секоја од нив. Позитивна и негативна контрола се вклучени со секоја серија. За прецизно разликување помеѓу Aspergillus tubingenisis и Aspergillus foetidus, генот тубулин беше засилен и секвенциониран со прајмерите bt2a и bt2b. Aspergillus niger кај отомикози 23
3. Резултати 3.1 Морфологија Културите прво беа подложени на макроскопска и микроскопска контрола (Слики 2-7). Ниту една диференцијација не можеше да се направи од наша страна. Aspergillus niger кај отомикози 27
Слика 2: Култура на Aspergillus foetidus на Sabouraud Слика 3: Aspergillus foetidus микроскопски Aspergillus niger кај отомикози 28
Слика 4: Култура на Aspergillus niger на Sabouraud Слика 5: Aspergillus niger микроскопски Aspergillus niger кај отомикози 29
Слика 6: Култура на Aspergillus tubingensis на Sabouraud Слика 7: Aspergillus tubingensis микроскопски Aspergillus niger кај отомикози 30
Не може да се најдат значајни разлики помеѓу одделните видови Aspergillus. 3.2 Молекуларни биолошки резултати Бидејќи немаше макроскопски или микроскопски видливи разлики помеѓу црниот аспергилус, ние имавме за цел молекуларна биолошка идентификација со помош на ITS регионот на рибозомалната ДНК, која е варијабилна и не-кодира за многу габи и генот тубулин. ДНК беше изолирана од нашите габи и анализата на низата започна по ПЦР. Aspergillus niger кај отомикози 31
3.2.1 изолација на ДНК и PCR Првиот контролен чекор за успешна PCR беше гелот од агароза со нашите производи на PCR. Прочистувањето и секвенционирањето може да се започнат со оние примероци чии ленти беа јасно видливи. Слика 8: Агарозен гел на производи за PCR (ИТС), обоен со EtBr Слика 9: Агарозен гел на производи за ПЦР (-Тубулин), обоен со EtBr Aspergillus нигер кај отомикози
3.2.2 ДНК секвенционирајќи го неговиот регион Како референца се користеа CBS соевите на Aspergillus niger (CBS 554,65), Aspergillus foetidus (CBS 56465) и Aspergillus tubingensis (CBS 134,48). Aspergillus niger се разликуваше од Aspergillus foetidus и Aspergillus tubingensis врз основа на разликите во основата во G 56 A, C 109 T, C 514 T (усогласувањето види подолу). Се бараше диференцијација помеѓу последните две врз основа на генетскиот кодиран тубулин. Aspergillus niger кај отомикози 33
3.3 Медицинска евиденција Кај 15 пациенти, покрај точната молекуларна биолошка идентификација, наодите од габи биле ретроспективно споредени со клиничките наоди. Податоците доаѓаат од клиничката комуникациска и информациска мрежа МЕДОКС. Aspergillus niger кај отомикози 57
3.4 Статистичка проценка на демографските податоци за сите позитивни наоди на габи од увото (2006-2010) Статистичката проценка на сите позитивни наоди на габите од увото во периодот од 2006 до 2010 година од миколошката лабораторија на Институтот за хигиена, микробиологија и медицина на животната средина покажа 425 позитивни наоди од габи од 360 Трпелив. Пронајдени се вкупно 478 габи, што може да се припише на повторено појавување на одделни пациенти и присуство на мешани или повеќе наоди. Пронајдените печурки вклучувале 28 различни видови. Во нашата анализа, Кандида парапсилозата најчесто се наоѓаше во ушниот канал, проследена со A. niger sensu lato. (Табела 6, слики 10 и 11) Aspergillus niger кај отомикози 63
Табела 6: Спектар на габи (2006-2010) број на микроб/име на микроб% врз основа на број/име на микроб Кандида парапсилоза 139 29,08% Aspergillus niger 97 20,29% Aspergillus fumigatus 85 17,78% Candida albicans 83 17,36% Aspergillus flavus 23 4,81% Pseudallescheria boydii 7 1,46% Candida glabrata 6 1,26% Candida lusitaniae (Clavispora lusitaniae) 4 0,84% Габи 3 0,63% Scopulariopsis brevicaulis 3 0,63% Aspergillus candidus 3 0,63% Trichophyton ментагрофити 2 0,42% Candida non-albicans 2 0,42% Candida guilliermondii (Pichia guilliermondii) 2 0,42% Aspergillus sclerotiorum 2 0,42% Стерилен мицелиум 1 0,21% Scopulariopsis sp. 1 0,21% Scedosporium apiospermum 1 0,21% Paecilomyces sp. 1 0,21% Microsporum canis 1 0,21% Exophiala dermatitidis 1 0,21% Chrysosporium queenslandicum 1 0,21% Candida utilis 1 0,21% Candida tropicalis 1 0,21% Candida magnoliae 1 0,21% Candida famata 1 0,21% Candida ciferrii (Stephanoascus ciferrii) 1 0,21% Aspergillus terreus 1 0,21% Aspergillus sydowii 1 0,21% Aspergillus sp. 1 0,21% Aspergillus oryzae 1 0,21% Aspergillus glaucus 1 0,21% Вкупно 478 100% Aspergillus niger во otomycoses 64
Филаментозни габи (n = 233) наспроти никнувачки габи (n = 245) (n = 478) Филаментозни габи 49% Никнувачки габи 51% Слика 10: Дијаграм на филаментозни габи наспроти зелечки габи од сите позитивни наоди од габи (2006-2010) Филаментозни габи во проценти (n = 233) 10 % 36% 12% 42% Aspergillus niger Aspergillus fumigatus Aspergillus flavus Друга слика 11: Дијаграм на филаментозни габи на сите позитивни наоди од габи (2006-2010) Aspergillus niger во otomycoses 65
Родова распределба (n = 360) женски 43% машки 57% Слика 12: Родова распределба на пациенти со сите позитивни наоди за габи (2006-2010) Машки пациенти почесто се соочувале со наоди од габи во увото. Сепак, резултатите не можат да се следат во дијагностицираната отомикоза и даваат само општ преглед на габите пронајдени во увото во последните пет години. Возрасна дистрибуција на позитивни наоди од габи во% (n = 360) 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 18 18 16 13 13 8 8 3 3 0 0 0 11 11-20 21-30 31-40 41-50 51-60 61 -70 71-80> 80 Слика 13: Возрасна дистрибуција на пациенти со сите позитивни наоди за габи (2006-2010) Просечната возраст е 52,3 години со просек од 52 и стандардна девијација од 19,88 години. Возрасните групи од 41 до 50 годишна возраст и од 51 до 60 годишна возраст (по 18%) најчесто се соочувале со позитивни наоди од габи. Aspergillus niger кај отомикози 66
како со квасец беа исто толку присутни колку и единственото присуство на Aspergillus niger.Конечно, беа проверени наодите за габи (од увото) во последните пет години во пошироката област на Грац. Од 425 позитивни наоди за габи и 360 пациенти, откривме тесно мнозинство во корист на квасец (51%) во споредба со филаментозни габи (49%). Доминантен изолат меѓу 28-те различни видови беше Кандида парапсилоза (29%), втора најчеста, а со тоа и најчеста мувла беше Aspergillus niger sensu lato (20%). Просечната возраст беше 52,3 години (просечна вредност: 52) со стандардна девијација од 19,88 години. Возрасните групи од 41 до 50 годишна возраст и од 51 до 60 годишна возраст (по 18%) најчесто се соочувале со позитивни наоди за габи. Мажите (57%) почесто се соочувале со позитивен габичен резултат отколку жените (43%). Aspergillus niger кај отомикози 75