Вирус на хепатитис на Ц-генотипи - Синево

Општи информации и препораки

Вирусот на хепатит Ц (ХЦВ) е патоген со глобална распространетост и водечка причина за морбидитет и морталитет. Според последните проценки, серопреваленцата на ХЦВ е зголемена во последните 15 години на 2,8%, што е еквивалентно на> 185 милиони инфекции ширум светот. Постојаната инфекција со ХЦВ е поврзана со развој на цироза на црниот дроб, хепатоцелуларен карцином и откажување на црниот дроб со висока стапка на смртност.

Како и другите РНК вируси, и ХЦВ има значителна генетска разновидност на ниво на нуклеотиди, што е голем предизвик и за развој на вакцини против ХЦВ и за пангенотипски терапии.

Врз основа на филогенетската анализа на геномската секвенца, HCV соевите во моментов се класифицирани во 7 различни генотипови (HCV 1-7) кои се разликуваат едни од други во нуклеотидните низи во пропорција од 30-35% и во над 50 подтипови, вклучувајќи регистрира разлика од 15-25%. Покрај тоа, кај инфицирани лица, ХЦВ циркулира и се однесува како мешавина од различни вирусни популации наречени квази-видови 1; 2 .

Геномот на HCV е составен од домени кои многу се разликуваат во стапката на мутации и варијабилноста на нуклеотидните низи. Така, непреведениот регион на 5 'крај од геномот (5'UTR) е најдобро зачуваниот домен, со најбавна стапка на еволуција. Потоа следи генот C (јадро) кој го кодира јадрото на протеинскиот нуклеокапсид и кој еволуира три пати побрзо во споредба со регионот 5'UTR. Гените кои ги кодираат протеините на школка Е1 и Е2 ја сочинуваат хиперваријабилната област, која се разликува од еден до друг изолат. Ова им овозможува на вирусот да ги заобиколи имуните механизми на домаќините насочени против достапните протеини во вирусниот плик. .

Според неодамнешните податоци за вкупната преваленца на ХЦВ, генотипот 1 е најраспространет (46,2% од сите случаи на инфекција со ХЦВ), проследен со генотип 3 (30,1%); генотипови 2, 4 и 6 се одговорни за 22,8% од случаите и генотип 5 за 1 .

Кај нас преовладува генотипот 1б и мешавина од генотипови 1а и 1б 4. Една студија спроведена во Институтот Матеи Балш во Букурешт на 670 пациенти покажа 99,7% преваленца на генотип на ХЦВ 1 .

Целта на антивирусната терапија е да се излечи инфекцијата со ХЦВ. Одржливиот вирусолошки одговор (SVR) е дефиниран со незабележлива HCV RNA 12 и 24 недели по завршувањето на третманот. ХЦВ инфекцијата се лекува во над 99% од случаите каде што е добиена СВР. Кај пациенти без цироза, СВР генерално се поврзува со резолуција на заболување на црниот дроб, додека кај оние со цироза, иако фиброзата на црниот дроб може да се повлече и ризикот од развој на хепатална инсуфициенција и портална хипертензија е намален, ризикот од хепатоцелуларен карцином не е целосно елиминиран.

До 2011 година, третманот се засноваше на комбинација на пегилиран интерферон α со рибавирин, стапката на одговор беше различна во зависност од генотипот на HCV. Со овој терапевтски пристап, добиена е RVS стапка од приближно 40% во Северна Америка и 50% во Западна Европа за HCV генотип 1. Повисоки стапки на RVS (до 80%) се добиени за генотипови 2, 3, 5 и 6, додека за генотип 4 се добиени средни RVS стапки 6 .

На почетокот на 2015 година, Европската комисија одобри пласирање на нов лек на пазарот - Viekirax + Exviera, и третманот е одобрен за администрација со или без рибавирин кај пациенти со хронична инфекција со генотип 1 ХЦВ, вклучувајќи ги и оние со компензирана цироза на црниот дроб, пациенти со инфицирани со ХИВ-1, пациенти кои се подложени на третман на зависност од опијати и пациенти кои примаат трансплантација на црн дроб. . Покрај тоа, лекот е одобрен во комбинација со рибавирин за пациенти со хроничен генотип хепатитис Ц. Viekirax се состои од комбинација на фиксна доза на паритапровир 150 mg (инхибитор на протеаза NS3/4A) и ритонавир 100 mg (инхибитор на CYP3A4 што се зголемува паритаправир) во комбинација со омбитасвир 25 mg (NS5A инхибитор) еднаш дневно, и Exviera се состои од дасабувир 250 mg (ненуклеозиден РНК-зависен RNA полимераза инхибитор) администриран два пати на ден со или без рибавирин . Оваа комбинација на антивирусни лекови без интерферон, синергетски насочува кон репликација на ХЦВ на 3 различни нивоа. Според резултатите од 6 студии во фаза III и студии во 2 фаза II, вкупниот СВР во 12 недели за пациенти заразени со генотип 1 е над 96% 6; 7 .

Како заклучок, се препорачува генотипизирање на HCV кај сите инфекции на вирусот Ц пред да започне каков било третман, со цел да се избере соодветен протокол. .

Тестот извршен во нашата лабораторија ја користи техниката RT-PCR (обратна транскрипција на целната РНК со генерација на комплементарна ДНК што ќе се засили со реакција на ПЦР, со откривање на реално време на ампликон) и олигонуклеотидни сонди со флуоресцентни ознаки специфични за секој генотип за идентификување на генотипови HCV 1 до 6 и подтипови a и b на генотип 1 8 .

Примерок собрани - венска крв 8 .

Контејнер за берба - вакутаин кој содржи ЕДТА како антикоагулант 8 .

Потребна е обработка по бербата - одделете ја плазмата со центрифугација 8 .

Волумен на примерок - минимум 1 ml плазма 8 .

Стабилност на примерокот - примероците од плазмата се стабилни 1 месец на -20 ° C 8 .

Метод - PCR во реално време на автоматска платформа m2000 (Абот); тестот користи како засилување цели на низа од 5'UTR регионот на вирусен геном за откривање на генотипови 1-6 и регионот NS5B за посебна идентификација на подвидовите 1а и 1б; Се користат 4 групи на буквари кои бараат 3 вида на одделни реакции:

реакција А: ги детектира сите изолати на HCV, изолатите на подтипот 1а и изолатите на генотипот 3;
реакција Б: детектира изолати со генотип 2, подтип 1б и генотип 1;
реакција Ц: открива изолати со генотипови 4, 5 и 6.

Во времето на подготовка на секој примерок на пациент, се воведува РНК низа, неповрзана со геномот на HCV, што ќе служи како внатрешна контрола за сите фази на процесот. Контролните примероци (позитивни и негативни) исто така се користат при секое испитување.

Точноста на тестот беше докажана со анализа на 162 изолати на HCV со генотип 1 (110 со генотип 1а и 58 со генотип 1б), 41 изолиран генотип на HCV 2, 27 изолиран HCV генотип 3, 28 изолиран HCV генотип 4, 14 изолиран HCV генотип 5 и 12 изолиран генотип на HCV 6. Техниката за секвенционирање на нуклеинска киселина беше искористена за да се утврди референтниот генотип во секој анализиран примерок. Согласност помеѓу 2-те методи (PCR генотипизација и секвенционирање) беше 97,59% за сите идентификувани генотипови, 97,27% за подтипот 1а и 91,38% за подтипот 1б 8 .

Граници и мешање

Генотипизирање на ХЦВ не се препорачува за скрининг или потврда на инфекција со ХЦВ. Тестот е возможен само ако има виремија C> 500 IU/mL.

Олигонуклеотидната сонда што одговара на регионот 5'UTR на геномот на HCV од генотипот 1 не реагира вкрстено со примероците што содржат HCV подтип 6а, но може да покаже вкрстена реакција со подтипот 6b и некои подвидови non6a/6b од генотипот 6.

Во некои случаи, може да се добијат незабележливи резултати како резултат на хетерогеноста на HCV геномските секвенци, мешаните инфекции или (реткото) постоење на рекомбинантни HCV соеви 8 .