56-та нефректомија во комбинација со диета со висока содржина на сол и инхибиција на синтезата на азотен оксид за да се предизвика

Резиме

Опишана е постапка во два чекора за утврдување на хронична бубрежна инсуфициенција (CRF) кај стаорецот Луис со хируршко отстранување на 5/6 од бубрежната маса. Комбинација на хируршка интервенција, инхибиција на НОС и диета со висока содржина на сол доведува до модел сличен на хумана ХББ, овозможувајќи проучување на каузалните механизми и развој на нови терапевтски интервенции.

Апстракт

Вовед

Поради својата прогресивна природа, последователно заболување на бубрезите во последната фаза и придружен кардиоваскуларен морбидитет и морталитет, ХББ е сè поголем проблем со јавното здравје. Затоа, забавувањето на прогресијата на ХББ е голем здравствен приоритет. Бидејќи ХББ се карактеризира со комплексни нарушувања на хомеостазата, неопходни се интегративни модели на животни за да се проучи развојот и прогресијата на ХББ. Бубрегот е составен од мноштво различни типови на клетки кои комуницираат едни со други. Оваа сложеност не може да се имитира ин витро.

Протокол

Сите експерименти се изведуваат во согласност со експерименталните етички упатства за животни на Лабораторискиот комитет на животни во Утрехт. Протоколот се спроведува под раководство и одобрување на комитетот на авторот за заштита и употреба на животни.

ХББ е индуцирана кај машки родени стаорци Луис (река Чарлс, Сулцфелд, Германија) на возраст од 8 недели. Стаорците се сместуваат под стандардни услови во средина контролирана од светлина, температура и влажност.

  1. Стерилизирајте хируршки инструменти:
    • 1 студент форцепс 1-2 заби 12 см
    • 1 студентски стандард клешти за модели
    • 2 клешти Семкен
    • 1 ножици Мајо
    • 1 студент Ариз ножици
    • 1 држач за игла Олсен-Хегар со ножици
    • Bебе
  2. Проверете го списокот на залихи:
    • Оперативна маса со подлога за затоплување и ламба
    • О 2, изофлуран
    • ткиво
    • Бричење
    • Скали
    • Стерилна зададена точка на работа
    • Стерилна газа 5x5 и 10x10
    • 70% алкохол
    • 0,9% раствор на NaCl
    • Шприц од 1 ml
    • Игли (25G)
    • Влошки од гел-пена: Спонгостан
    • Викрил 4,0 и 5,0
    • Бупренорфин 0,03 mg/kg (разреден 1:10 во физиолошки солен раствор)
    • Чист кафез за стаорци по операција

2. Унинефректомија на десната страна

3. Субтотална нефректомија на левата страна

  1. Седум дена подоцна, истите подготовки се прават лево за десната страна, како што е опишано од 2,1 до 2,5. Пред операцијата, се пресметува количината на бубрежно ткиво што треба да се отстрани, што е приближно 2/3 од тежината на десниот бубрег. Подгответе мали парчиња гел-пена (Спонгостан, Johnонсон и Johnонсон, Newу erseyерси) пред операцијата.
  2. Ставете остри ножици околу горниот пол на левиот бубрег и ресекција на горниот пол со еден удар (за локацијата на ножиците, видете Слика 3). Покријте веднаш со парче гел-пена и ставете нежен притисок со стерилна газа.
  3. Повторете со долниот пол на бубрегот како во 3.3.
  4. Подигнете го бубрегот за да спречите згрутчување на кожата. Одржувајте лесен притисок врз обете перничиња од гел со стерилна газа додека не престане крварењето. Ако крварењето продолжи, додадете друга подлога од пена.
  5. Ставете остаток од бубрег со лепливи гел влошки од пена во стомакот. Затворете ги мускулите и кожата и следете ги 2.9-2.12.

  1. Истата постапка за изложување на бубрезите беше подложена на измамен надзор. Наместо да се искорени бубрегот или да се сечат прачките една недела подоцна, обете бубрези се обезглавуваат во интервал од една недела, не се мачат да ги вознемируваат надбубрежните жлезди. Затворањето на раните и постоперативната нега се идентични до 2.11 и 2.12.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Резултати од репрезентацијата

По субтоталната нефректомија е приближно 1: 6 од вкупната бубрежна маса што останува. Слика 4 ја покажува тежината на отстранетиот дел од десниот бубрег со просечно и стандардно отстапување во два претходни експерименти. Треба да се има на ум дека во една недела по UNX, се јавува хипертрофија на левиот бубрег, што укажува на тоа дека тежината што треба да се пресмета врз основа на тежината на десниот бубрег секогаш резултира со помалку од 5/6 далеку. Сепак, бидејќи не е можно да се одреди тежината на левиот бубрег за време на операцијата, ова е точниот начин да се отстранат околу 5/6 од првичната бубрежна маса.

Со текот на времето, стаорците со ХББ развиваат хипертензија, уремија, анемија, протеинурија и значително намалување на GFR и ERPF. По 6 недели, ХББ воспостави, соодветна временска точка за тестирање на мерките за спасување. Со текот на времето, се забележува остра прогресија на хипертензија и протеинурија, додека хематокритот и функцијата на бубрезите (GFR и ERPF) покажуваат благо влошување (Слика 5). Други симптоми на кои не се фокусиравме во нашите експерименти се нарушувања во метаболизмот на калциум фосфат и липиди и многу други. Во зависност од стресот на стаорци, развојот на ХББ може да варира во голема мера 14, 15, 2. Ние користевме диета со висока содржина на сол и блокатор на НЕ за да предизвикаме висок крвен притисок и ендотелијална дисфункција.

Прогресијата на бубрежната инсуфициенција се следи со собирање на урина (се користи за мерење на количината на протеини и креатинин), крв (плазматска уреа и креатинин) и систолен крвен притисок. Свесни сме дека развојот на висок крвен притисок може попрецизно да се следи кога се користи телеметрија наместо плетизмографија на опашката. Клиренсот на креатинин може да се пресмета, но има тенденција да го потцени намалувањето на GFR поради широка тубуларна секреција на креатинин кај стаорци 16, истакнувајќи ја важноста на златниот стандарден метод за одредување на бубрежната функција со одредување на клиренсот на инулин и PAH 17, 18, 19 . Конерис и сор. ја опиша целата процедура 20. Клиренсот на инулин и PAH се пресметува од нивната концентрација во примерокот на урина (U), стапката на проток на урина (V) и нивната концентрација во плазмата (P). Претходно демонстриравме значително намалување на GFR и ERPF во овој модел користејќи класична технологија на клиренс, додека ова беше помалку видливо од промените во плазматскиот креатинин, плазматската уреа или клиренсот на креатинин 13.

нефректомија
Слика 1. Временска линија на L-NNA, диета со висока содржина на сол, UNX и SNX. Дадени се надолжни мерења на функцијата на бубрезите и временската точка на завршување за да се утврди. Со подолго следење по потребите на SNX, 6% исхрана со NaCl може да се продолжи со текот на времето.

98fig2.jpg "/>Слика 2. Дисекција на надбубрежната жлезда. За да ја отстраните надбубрежната жлезда, без да ја вознемирувате, ставете пинцети во маснотијата помеѓу бубрегот и надбубрежната жлезда и движете се од столбот на садот до врвот, како што е наведено со црвената линија. Илустрација адаптирана од 20-то американско издание „Анатомија на хоророт на човечкото тело“, 1918 година.

нефректомија
Слика 3. Неторектомија субтотал. Црвените линии покажуваат рабови на сечење. Илустрација адаптирана од 20-то американско издание „Анатомија на хоророт на човечкото тело“, 1918 година.

56-та
Слика 4. Порција го отстрани бубрежното ткиво по субтотална нефректомија во два различни експерименти. Exp 1, n = 16, exp 2, n = 23.

нефректомија
Слика 5. Развојот на бубрежна инсуфициенција кај стаорци со ХББ заврши 6 недели по SNX (разбиени линии n = 5) наспроти здрави контроли (раздвоени линии n = 5) и стаорци CKD завршија 12 недели по SNX (£ n = 8) наспроти здрави контроли (• n = 8 ) Стаорците со ХББ добиле L-NNA до 4-та недела и диета со висока содржина на сол од 1-ва недела до завршувањето (не е прикажано на графиконот). SNX предизвикува хипертензија (мерено со плетизмографија на опашка) (А), Уремија (Б), анемија (C) и протеинурија (Г) и значително намалување на GFR (Д) и ERPF ()) 13. * Потребна е одредена претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Дискусија

Хируршко отстранување на 5/6 од бубрежната маса кај стаорецот Луис, комбинирано со диета со висока содржина на сол и привремена инхибиција на НОС доведува до модел на ХББ што личи на ХББ на човекот и овозможува истражување на каузалните механизми и ефективноста на терапевтските интервенции кај CKD.

Моделот на 5/6 нефректомија е добро познат и широко опишан модел за ХББ. Сепак, едноставно отстранување на 5/6 од бубрежната маса не предизвика веднаш откажување на бубрезите во сите соеви на стаорци. Ние ги користиме стаорците Луис за да ги проучиме ефектите на терапиите базирани на клетки во ХББ, бидејќи достапноста на стаорците GFP + Луис може 21 клетка да ги следи администрираните донаторски клетки кај стаорецот примател (неGFP +) Стаорецот Луис е релативно отпорен на развој на бубрежна слабост и развојот на ХББ е бавен во споредба со другите соеви 22, 15. Затоа, отстранувањето на 5/6 од бубрежната маса е комбинирано со исцрпување на НЕ и диета со висока содржина на сол, бидејќи тоа личи на неколку аспекти на хумана ХББ, како што е големиот внес на сол и ендотелијалната дисфункција. Читателите треба да имаат предвид дека потребата од комбинација 5/6 нефректомија со диета со висока количина сол и/или без замор зависи од видот на стаорци кои се користат за експериментите.

Направивме 5/6-та нефректомија во постапка во два чекори отколку во постапка во еден чекор, бидејќи на ова се смета дека е помалку стресно врз животното, асоцира на помала смртност поврзана со хирургија и е најпосакувана од нашиот комитет за тестирање на животни. Ние претпочитавме засек на крилото отколку лапаратомија за да стигнеме до бубрезите, бидејќи лапаротомијата е поврзана со поголем ризик од инфекција на раната, олабавување на конците, хернија на поткожниот диск и адхезии на цревата во споредба со засекот на крилото. Понатаму, ако експерименталниот дизајн вклучува интервенција со абдоминален засек - како што е случај во нашите експериментални студии за администрација на клетки на коскена срцевина во бубрежната артерија на преостанатите лапаротомии кои вршат бубрези за SNX не е застапник бидејќи треба да се избегнуваат повторни лапаротомии.

Неколку критични проблеми може да се појават по хируршкото отстранување на 5/6 од бубрежната маса. За време на UNX може да има потешкотии во стабилизирањето на бубрегот бидејќи околните маснотии лесно ќе се олабават. Може да се користат два методи за да се изложи бубрегот. 1) Користете помали форцепси за да ги зафатите бубрежните садови со нежно движење надолу од долниот пол на бубрегот кон васкулатурата и нежно влечење додека не успеете да го стабилизирате бубрегот. 2) Користете тапа форцепс за нежно отстранување на бубрегот од стомакот. Кога бубрегот е изложен, газата може да се користи за да се запре крварењето што се јавува во текот на овој процес. За да се избегне крварење, маснотијата започнува да се влече на долниот пол на бубрегот, каде што маснотијата е силно прицврстена на бубрегот.

Важно е да се создаде помеѓу јазолот околу бубрежниот сад и бубрегот за да се спречи крварење по отстранувањето на бубрегот, бидејќи јазолот ќе се лизне од бубрежните садови поради влезниот проток на крв, брзо исполнувајќи го стомакот со крв. Може да се користи газа за отстранување на крвта и може да се изврши притисок за да се запре крварењето. Користете форцепс за да го дофатите бубрегот и да создадете нова лигатура. Ако садовите на бубрезите не можат да се следат, држете притисок додека не престане крварењето. 1 ml физиолошки солен раствор за да се спречи дехидрираност поради крварење во абдоминалната празнина и почекајте околу 5 мин пред да ги затворите мускулниот и слојот на кожата. Внимателно следете го стаорецот дополнително следните денови. Ако завојот постои пред по отстранувањето на бубрезите, но бубрежните садови течат, долгите краеви на лигатурата може да се користат за врзување на садовите.

Ако по дисекцијата на столбот и покрај притисокот врз пена гел-влошките ако има крварење, тоа најверојатно се должи на повреда на голема бубрежна артерија или бубрежна карлица. Ова крварење може да се запре со поставување нови влошки за гел-пена на раната, да не се мачи да ја поместува подлогата за пена додека го креваш остатокот бидејќи поголемите садови се наоѓаат во близина на папокот и да чекаат подолг временски период.

Крвта во урината може да се врати до 2 дена по операцијата. Ако бубрежната карлица е оштетена или има голема бубрежна функција крварење, ќе има трага од постојана хематурија. Стаорците со постојана хематурија по операцијата мора да бидат еутаназирани бидејќи не е можно да се запре крварењето. Ако хематурија е забележана во подоцнежен момент по операцијата, што може да се појави до 2 недели по операцијата, стаорецот исто така треба да биде еутаназиран бидејќи крвта е згрутчена во бубрежната карлица и на крајот ги заглавува уретерите и мочниот меур, предизвикувајќи опструкција.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.