Диференцијација на клетките - луѓе - исхрана - животна средина

Принцип на колориметриско откривање со p-нитрофенол Метаболизам на pNPP до жолт p-нитрофенол со мембрана врзани алкални фосфатази на живи клетки.

Анализата на p-нитрофенол фосфат (анализа на pNPP) за прв пат беше користена од Engvall et al. (1980) и се користи за одредување на степенот на диференцијација помеѓу приврзаните и не-приврзаните клетки. pNPP е супстрат од алкална фосфатаза (АП). По хидролиза на фосфатните остатоци од фосфатазата, p-нитрофенолот се формира како жолт, растворлив краен производ. По завршувањето на реакцијата со додавање на раствор на натриум хидроксид, интензитетот на обоеноста може да се одреди колориметрично во читачот на ELISA со бранова должина од 405 nm. Формирањето на жолт производ е пропорционално на активноста на алкалната фосфатаза.

диференцијација

Горна лева слика.

Принцип на флуорометриско откривање со флуоресцеин дифосфат (FDP)

Активноста на алкална фосфатаза може да се утврди и флуориметриски како мерка за проценка на степенот на диференцијација.
Во овој случај, се користи флуорометриска боја флуоресцеин дифосфат наместо колориметриска боја p-NPP. Алкалната фосфатаза е во состојба да ослободи флуоресцеин од ова соединение, кое потоа може да се мери флуориметриски (пр. 485nm/Em 538nm) во читачот на повеќе плочи.

Пробна проценка

1. Определување на содржината на протеини во примерокот со помош на анализата Брадфорд
2. Измерете ја апсорпцијата или флуоресценцијата на примероците
3. Пресметка како μM p-NP или флуоресцеин/мин/мг протеин

Слика горе десно.

Трошоци (колориметриски доказ)

Трошоци (флуорометриски доказ)

Примери за примена

Студии за регулирање на настаните на диференцијација во контекст на хомеостазата на клетките и ткивата по дополнување на флавоноиди или олигосахариди (Кунтц и сор. 2007 и 1999 година)