Гилберт-ов синдром - генетско тестирање (промотор UGT1A1) - анализа на Синево
Генерални информации
Гилбертов синдром (ГС), исто така познат како синдром на Меуленграхт, е наследна болест со автосомно рецесивно пренесување, која се карактеризира со благи, постојани, нехемолитички зголемувања на некоњугираната билирубинемија во отсуство на заболување на црниот дроб.
Оваа болест има фреквенција помеѓу 3% (Азија), 3-7% (САД) и 33% (Африка), варијациите во зависност од бројот на обработени примероци и методите на анализа.
Синдромот опишан од Августин Гилберт и Пјер Леребулет е предизвикан од ензим на црн дроб (глукуронилтрансфераза), кој игра важна улога во метаболизмот на некоњугираниот билирубин во црниот дроб. Генетските мутации доведуваат до ограничена синтеза на ензими, што придонесува за зголемено ниво на слободен билирубин во телото.
Серумскиот билирубин доаѓа од деградација на хемоглобинот; потоа се транспортира до црниот дроб каде што под дејство на уридин-дифосфат 1А1 глукуронозилтрансферазата (UGT1A1) е конјугирана со глукуронска киселина и потоа се елиминира жолчката 1; 4; 6; 7 .
Уридин-дифосфоглукуронат-глукуронилтрансфераза (UGT) спаѓа во групата на ензими на гликозилтрансфераза. Цицачите биле класифицирани во три семејства, засновани на сличноста во генската низа и структурата: UGT2, UGT1 и UGT8. Во рамките на овие семејства, постојат неколку изоензими, но само две изоформи на семејството UGT1A (UGT1A1 и UGT1A4) имаат билирубин како супстрат. Кај луѓето, само UGT1A1 игра значајна улога во глукуронидизацијата на билирубин. Билирубин-УГТ е одговорен за конјугирање на широк спектар на подлоги кои вклучуваат лекови, хормони и невротрансмитери 1; 4; 7 .
Генот UGT1A1 се наоѓа на хромозомот 2q37 и се состои од 5 егзони. Неколку изоензими на UGT1A, вклучително и билирубин-UGT (идентификуван како UGT1A1 и кој се состои од 533 аминокиселини), се кодирани од овој ген. Егзоните 2 - 5 се заеднички за сите изоформи на групата (UGT1A 1-13), а егзонот 1 кодира уникатен регион во рамките на секој UGT1A што дава специфичност на подлогата. Четирите вообичаени егзони се наоѓаат во 3 'регионот на генот и го кодираат карбокси-терминалниот домен (246 AA) за сите изограми на UGT, специфични за интеракциите со подлогата за заеднички донатор, UDP-глукуронска киселина. 5-регионот на генот UGT1A содржи 13 егзони распоредени во тандем и 4 псевдоексони. За секој изоензим го кодира N-терминалниот домен. Егзоните 1а и 1д ги кодираат променливиот регион за билирубин-UGT1A1 и UGT1A2, соодветно, при што UGT1A1 е одговорен за скоро целиот конјугиран билирубин, додека UGT1A2 игра минимална улога. Изразот на UGT1A1 зависи од доменот на промоторот, лоциран во 5 'регионот близу егзон 1, кој содржи повторувачка TA кутија, конвенционално означена како A (TA) 6TAA, но исто така и од доменот на потенцирање на фенобарбиталниот ефект (gtPBREM) лоциран во регулаторниот регион. на гените 1; 4; 7; 9 .
Голем напредок во разбирањето на генетската основа на Гилберт-овиот синдром е постигнат во 1995 година, кога биле идентификувани абнормалности во регионот на промотори.
Три различни типа генетски аномалии се почести кај пациенти со Гилберт-ов синдром: вметнување на два ТА-нуклеотиди во полето ТАТА, забележано како А (ТА) 7TAA; 3275T> G во gtPBREM; и 211G> A (p.G71R) во егзон 1. Повеќето Кавкази и Африканци со Гилберт-ов синдром се хомозиготни за мутацијата А (TA) 7TAA и затоа се смета дека се водечката причина за болеста. Мутантниот алел се нарекува UGT1A1 * 28 додека дивиот алел UGT1A1 * 1.
Присуството на 2 екстрануклеотиди (ТА) во промоторниот регион на генот (елемент ТАТАА) се меша со врзувањето на факторот транскрипција IID и предизвикува намален израз на билирубин-UGT1 (30% од нормалното). Во хомозиготна состојба, намалувањето на билирубин глукуронидацијата конјугира појава на билирубин моноглукуронат во жолчката во споредба со диглукуронатните форми 1; 4; 7 .
UGT1A1 е исто така вклучен во метаболизмот на иринотекан, инхибитор на топоизомеразата I. Иринотекан е хемотерапевтски лек кој широко се користи за лекување на неколку видови на цврсти метастатски или повторливи тумори (дебело црево, ректум или бели дробови). Тоа е претходник што формира активен метаболит, СН-38. SN-38 нормално се деактивира со конјугација со глукуронска киселина, проследено со билијарна екскреција во гастроинтестиналниот тракт. Ако активноста на UGT1A1 е нарушена или дефицитарна, SN-38 не успева да биде конјугиран со глукуронска киселина и ја зголемува неговата концентрација. Ова може да доведе до сериозна неутропенија, дијареја и астенија, што може да биде опасно по живот.
Најчеста причина за неутропенија предизвикана од иринотекан се должи на мутацијата на A (TA) 7TAA во генот UGT1A1. Околу 10-15% од Кавказците и Афроамериканците се хомозиготни за овој вид на мутација и имаат 50% поголем ризик од тешка неутропенија (степен 4 или 5) по администрација на иринотекан. Приближно 40% од оние третирани со иринотекан се хетерозиготни и овие лица исто така имаат зголемен ризик (степен 4) на неутропенија. Се чини дека ризикот е поголем кај луѓето кои примаат иринотекан еднаш на секои 3 недели. Така, познавањето на видот на полиморфизам на UGT1A1 може да го води соодветниот избор на соодветни дози, да го намали ризикот од тешка токсичност и да ги подобри шансите за одржување на терапијата; 3; 5 .
Исто така, идентификувани се и дополнителни мутации. На пример, некои здрави азиски пациенти со Гилберт-ов синдром немаат мутации во регионот на промотори, бидејќи се хетерозиготни за мутации на мисици (Gly71Arg, Tyr486Asp, Pro364Leu) во кодирачкиот регион. Овие лица имаат значително покачено ниво на билирубин во споредба со оние што носат див алел.
Дефектната глукуронидација може да резултира од мутации во егзон 1а, регион на промотор или заеднички регион на егзон 4. .
Обично, пациентот со Гилберт-ов синдром не го манифестира нарушувањето до втората деценија од животот и често не е свесен за постоењето на жолтица сè додека не биде откриен со физички преглед или рутински лабораториски тестови. Вкупните серумски нивоа на билирубин варираат помеѓу 1,2-3 mg/dL и ретко надминуваат 5 mg/dL. Студиите со употреба на методи со висока точност покажуваат дека серумскиот билирубин кај пациенти со Гилберт-ов синдром е скоро целосно неконјугиран.
Типично, интензитетот на жолтица варира и се влошува по подолг пост, операција, треска или инфекција, прекумерен физички напор или ингестија на алкохол. Администрацијата на фенобарбитал ја намалува жолтицата со подобрување на нивото на ензимот. Тестовите на функцијата на црниот дроб се нормални и хепатоцитите обично се појавуваат нормални при светлосна микроскопија. Сепак, некои пациенти може да доживеат зголемување на бројот на гранули на липофусцин и мазна ендоплазматска мрежа, додека други може да имаат зголемување на лизозомалните ензими.
Изразувањето на фенотипот Гилберт синдром зависи од постоењето на релативно високо производство на билирубин. Ова исто така објаснува зошто некои луѓе хомозиготни за алелот UGT1A1 * 28 немаат хипербилирубинемија. Исто така, клиничките симптоми се почести кај мажите отколку кај жените бидејќи производството на билирубин е поголемо кај мажите 9 .
Постојат пациенти кои, покрај дефицитарна хепатална глукуронизација, имаат и одреден степен на хемолиза. Користејќи студии за кинетика на полуживот на радиобилирубин и еритроцити, беа опишани две форми на Гилберт-ов синдром: првата група, во која има само ензимски дефицит (во кој билирубинот очигледно се зголемува по постот најмалку 2 дена) и втората, во која покрај ензимскиот дефицит постои и степен на окултна хемолиза, клинички неоткривана, но само со чувствителни лабораториски методи. Во второто, постот не го зголемува билирубинот.
Дијагнозата на Гилберт-овиот синдром е утврдена врз основа на следниве елементи: мало зголемување на неконјугираниот билирубин, отсуство на клинички манифестирана состојба на хемолиза, нормални функционални тестови за клетките на црниот дроб, нормална биопсија на црниот дроб (утврдување што обично не е потребно) 1; 4; 6 9 .
Од друга страна, важно е да се напомене дека Гилберт-овиот синдром често може да коегзистира со други состојби поврзани со неконјугирана хипербилирубинемија, како што се таласемија или дефицит на глукоза-6-фосфат дехидрогеназа 4. .
Иако долго време се сметаше за клинички безопасен ентитет со бениген тек, неодамнешните податоци покажуваат дека погодените лица можат да бидат склони кон развој на оштетување на црниот дроб од третман со разни лекови и дека генетскиот дефект може да влијае на резултатот од трансплантација на црн дроб и други клинички состојби. .
Бидејќи Гилберт-овиот синдром се пренесува автосомно рецесивно, при зачнувањето детето мора да добие две копии на неисправниот ген (по еден од секој родител) за да се развие болеста. Сепак, дури и ако се присутни и двете копии на генот, не е апсолутно сигурно дека синдромот ќе се манифестира клинички 5; 9 .
Препораки за анализа на мутации на промотори UGTA1
-потврда на дијагнозата на Гилберт-овиот синдром;
-идентификација на лица со зголемен ризик од несакани реакции на третман со иринотекан и на кои им се препорачува да ја намалат својата доза на хемотерапија 3 .
Примерок собрани - крвта ќе дојде 2 .
Контејнер за берба - вакутаин кој содржи ЕДТА како антикоагуланс 2 .
Количината собрана - 5 ml крв 2 .
Причини за одбивање да се обиде - употреба на хепарин како антикоагуланс; коагулирани или хемолизирани примероци 2 .
Стабилност на тестот - 7 дена на 2-8ºС 2 .
Метод - секвенционирање со цел да се одреди бројот на повторувања на БП во регионот на промоторот UGT1A1: (БП) 6 е нормално, (БП) 7 патолошки 2 .
Известување и толкување на резултатите
Бројот на повторувања на БП во регионот на промоторот UGT1A1, како и хомозиготниот или хетерозиготниот статус ќе бидат соопштени 2 .
Граници и пречки
Хепатална или бубрежна дисфункција може да предизвика несакани реакции на иринотекан независно од полиморфизам на повторување на БП.
Лековите кои значително го инхибираат цитохром P450 3A4, како што е кетоконазолот, ја зголемуваат изложеноста на пациентот на иринотекан и неговиот активен метаболит, SN-38, зголемувајќи ја сериозноста на несаканите ефекти.
Лековите кои премногу го стимулираат цитохром P450 3A4 (антиконвулзивни средства како што се фенитоин, фенобарбитал и карбамазепин или рифампицин) или некои додатоци на билки ќе предизвикаат значително намалување на изложеноста на иринотекан и неговиот активен метаболит SN-38 3 .
1. Кацујуки Мацуи, Јошихиро Маруо, Хироши Сато и Јошихиро Такеучи, Комбиниран ефект на регулаторни полиморфизми врз транскрипцијата на UGT1A1 како причина за Гилберт синдромот. Во BMC Gastroenterology 2010, 10:57.
2. Лабораторија во Синево. Специфични препораки на употребената технологија за работа во 2010 година. Ref Type: Каталог.
3. Клиника Мајо. Медицински лаборатории Мајо. Тест каталог. Повторете го генотипот UDP-Glucuronosyl Transferase 1A1 TA, UGT1A1. www.mayomedicallaboratories.com. Тип на ref: Интернет комуникација.
4. Сандип Мукерџи, Гилберт синдром, www.emedicine.medscape.com, Реф. Тип: Интернет комуникација.
5. Потрага по дијагностика. Полиморфизам на гените UGT1A1 (Повторете го ТП). Лабораториска поддршка за дијагностицирање и управување. Клинички фокус. www.questdiagnostics.com. Референтен тип: Интернет комуникација.
6. Шабана Фархин, Сангамитра Сенгупта, Амал Сантра, Супарна Пал, Гопал Кришна Дали, Меенакши Чакраворти, Парта Ма Маџумдер, синдром на Абхиџит Коудури Гилберт: Голема фреквенција на (TA) 7 алел TAA во Индија и нејзина интеракција со вметнување на нов CAT во промотор на генот за ген на билирубин UDP- глукуронозилтрансфераза 1. Во светот Ј Гастроентерол 2006 14 април; 12 (14): 2269-2275
7. Сурини Јусоф - Билирубин-Уридин - Дифосфат Глукуронозил Трансфераза (UGT1A1) Мутации на гени кај новороденчиња кај малајското население во Келантан со хипербилирубинемија.
8. Т.М. Даноф, Д.А. Кембел, Л.К. Мекарти, К.Ф. Луис, М.Х. Репаш, А.М. Саундерс, НК Спурр, И.Ј. Порвис, АД Роус, ЦФ Ксу, Гилберт-ов синдром, варијанта на УГТ1А1 дава подложност на хипербилирубинемија предизвикана од транласти, во списанието Фармакогеномика ( 2004) 4, 49–53