Техника на оклузија на средната церебрална артерија за индуцирање на пост-мозочен удар на протокол кај стаорци
Резиме
Тука презентираме протокол за индукција на пост-мозочен удар кај стаорци со исклучување на средната церебрална артерија преку внатрешната каротидна артерија. Ние го користиме тестот за присилно пливање Порсолт и тестот за претпочитање сахароза за да ги потврдиме и процениме депресивните расположенија.
Апстракт
Вовед
Мозочниот удар е рангиран на четвртото место на списокот на болести што докажуваат смрт во Соединетите Држави од 1, 2, 3, додека предизвикува најмногу хендикеп кај возрасните во развиените земји 4; Ова го прави мозочниот удар водечки кандидат меѓу најдобрите здравствени проблеми во светот. Нормалноста на преживеаните пликови е ретка, со околу 15% -40% од преживеаните кои страдаат од трајна попреченост, 20% бараат институционална нега 3 месеци по мозочен удар 5, а околу една третина од шестмесечните преживеани бараат и други да им помогнат Ивотот. Преку секој ден 6. Исто така, се верува дека мозочен удар е одговорен за зголемување на националното трошење на здравјето 7. Американското здружение за срце проценува дека трошоците поврзани со случајот во САД се над 50 милијарди долари во 2010 година 8 .
Не само што мозочниот удар предизвикува долгорочна штета, туку и некои преживеани се склони да доживеат емоционални нарушувања и однесувањето, како што се деменција, замор, анксиозност, депресија, делириум и агресија 9, 10, 11, 12, 13, 14. Повторливо психолошко продолжение по мозочен удар е пост-мозочен удар дијагностицирана депресија (ПСД), која се дијагностицира кај приближно 40% -50% од преживеаните 15, 16, 17. Депресијата предизвикана од мозочен удар доведува до зголемен морбидитет и морталитет 18, 19, 20, 21, 22. Патофизиологијата на ПСД не е целосно разбрана, но се чини дека е предизвикана од повеќе фактори и е поврзана со попреченост, когнитивно оштетување и лезии на местото 23.
Моделот на стаорец на фокална мозочна исхемија создаден од МЦАО е најшироко користен животински модел на мозочен удар 24, 25, 26, 27. Демонстрацијата за воведување на ПСД кај стаорци преку оклузија на МЦА преку ИЦА користи техники кои ја минимизираат смртноста и варијабилноста во моделот МЦАО.
Примарната цел на овој протокол е да ги оцрта чекорите за стимулирање на ПСД кај стаорци со исклучување на МЦА преку ИЦА, модифициран МЦАО модел кој ја намалува смртноста и резултатот од варијабилноста 28. Специфичните цели вклучуваат извршување на невролошки и хистолошки прегледи (одредување на бројот на невролошки фокуси [НСС], обемот на инфарктната зона и едемот на мозокот) за да се потврди ефективноста на МЦАО и да се користат бихевиорални тестови за да се утврди влијанието на оваа постапка на МЦАО врз Развивање на емоционални нарушувања, особено ПСД.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Протокол
Комитетот за нега на животни на Универзитетот Бен Гурион во Негев, Израел, ги одобри сите постапки за лекување и тестирање што се користат во овој протокол.
1. Подгответе ги стаорците за презентација на претходната постапка на судењето
ОДДЕЛЕНИЕ: Изберете возрасни машки стаорци Спраге-Доули со тежина од 300-350 гр.
- Стаорци, четири на кафез, во вивариум на 22 ° C и влажност од 40%, со обратен циклус на светло/темно 12 часа (светло од 8:00 часот) и неограничен пристап до храна и вода.
- Случајно доделете ги стаорците на две групи, имено на група МЦАО (N = 24) и срамна група (N = 19).
2. Подгответе ги стаорците за операција
3. Хирургија (техника МЦАО)
ОДДЕЛЕНИЕ: Изведете операција како што е опишано од Бојко и сор. 28 и користете ги алатките на МекГари и сор. 29 и Улуч и др. 30 .
- Извршете вентрална средна линија и расечете ја површната фасција.
- Внимателно направете нагло и тапо раздвојување во рамките на трите триаголни мускули (стернохиоидни, дигастрични и стерномастоидни мускули) за да ги идентификувате каротидните артерии (ECA, ICA и заедничката каротидна артерија [CCA]).
- Внимателно расклопете ги и изложувајте ги точните CCA и ICA.
- Одделете ги десните CCA и ICA од вагусниот нерв.
ОДДЕЛЕНИЕ: При идентификување на каротидните артерии идентификувани во чекор 3.2, ИЦА ќе биде признаена како половина од гранките на ЦЦА заедно со ЕЦА. - Вметнете катетер (топлински гравиран или силиконски обложен 4-0 најлон) директно преку ИЦА,
- Јавните службеници даваат 5 ml солен раствор од 0,9% интраперитонеално за секој стаорец, веднаш по операцијата за да се спречи дехидрираност.
- Администрирајте лекови против болки безусловно првиот ден по операцијата; Користете мелоксикам 1 mg/kg SQ q24 ч. Дајте разреден дипирон (0,5 g растворен во 400 ml вода за пиење) на стаорци кои покажуваат симптоми на болка во текот на првите 3 дена.
- Victртви на стаорци со напади (нападите се предизвикани од зголемениот интракранијален притисок од едем на мозокот или крварење 28).
5. Резултат за невролошка сериозност 31
ОДДЕЛЕНИЕ: Оваа постапка ја вршат двајца набудувачи кои не учествуваат во хируршката процедура; Тие ги тестираат невролошките дефицити и степенот моторни дефицити за вкупен резултат од 0-4 32. Овој резултат може да се оцени во различни временски интервали; На овој испит, тоа беше направено 50 минути, 24 часа, 7, 15 и 30 дена по операцијата. Еве ги чекорите за проценка на НСС. Иако не е потребна во оваа ситуација, овој резултат е потребен за да се утврди мозочен удар на глодар, со цел да се спроведе третман.
- Ставете го стаорецот на керамички под и оставете го слободно да лута 1 минута.
- Нежно повлечете го стаорецот назад за опашката и загрижени се вака.
- Постигнете го стаорецот со резултат 0 без невролошки дефицит.
- Оценувајте го стаорецот со резултат 1 за флексија пред.
- Сорда стаорец со резултат 2 за контралатерален слаб преднук.
- Резултат 3 на стаорецот за циркулација на хемиплегична страна кога ќе го повлече опашката.
- Искористете го стаорецот со резултат 4 за спонтано заокружување 32.
ОДДЕЛЕНИЕ: Ако се забележи повеќе од еден одговор, се претпочита дејството со поголема оценка.
6. Определување на волумен на инфаркт (хистолошки преглед)
7. Мерење на церебрален едем 38
ОДДЕЛЕНИЕ: Едемот на мозокот беше измерен 24 часа по последниот МЦАО. Еутанизација на животни со сериозен невролошки дефицит што се меша со јадење и пиење најмалку три дена, повеќе од 20% губење на тежината, хемиплегија или напади.
- Проценете ја големината на едемот на десната хемисфера со употреба на компилација на делумно исечените области за да се пресметаат количините на десната и левата хемисфера во произволни единици (пиксели).
ОДДЕЛЕНИЕ: Користете го софтверот ImageJ 1.37v за оваа пресметка по оптичко скенирање (резолуција: 1.600 x 1.600 dpi). Изберете ја областа за интерес и користете ја функцијата за мерење од менито за анализа. Во нашата истрага беа користени макроа. - Изразете ја областа на мозокот обично едем како процент од стандардните области во непогодената контралатерална хемисфера.
- Пресметајте го степенот на оток користејќи ја равенката 39 развиена порано .
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Резултати од репрезентацијата
Хистолошки наоди (Табела 1) покажаа статистички значителен волумен на инфаркт како процент од вкупниот мозок во споредба со животните во контролната група на срамот (стр. Слика 2А) и имал подолго траење на неподвижност (стр. Слика 2Б) Во споредба со срамни стаорци.
| Историски резултати | Затвори група на оклузија на церебрална артерија | Група засрамена |
| Цел мозок (волумен на инфаркт) | 8,8% ± 6,5 | 0,3% ± 0,1 |
| Мозок речиси | 10,2% ± 4,6 | 2,6% ± 1,2 |
| Сите податоци ја претставуваат групата ± S.E.M. | ||
Табела 1: Хистолошки наоди за волумен на инфаркт и едем на мозок. MCAO = оклузија на средната церебрална артерија (n = 5); Билет (n = 5).
| Невролошки резултат на фокусот | Затвори група на оклузија на церебрална артерија | Група засрамена |
| 50 минути по операцијата | 2,75 ± 0,14 | 0,0 ± 0,0 |
| 24 часа по операцијата | 3,2 ± 0,15 | 0,0 ± 0,0 |
| 7 дена по операцијата | 0,91 ± 0,2 | 0,0 ± 0,0 |
| Сите податоци ја претставуваат групата ± S.E.M. | ||
Табела 2: Невролошки фокусен број (НСС) за МЦАО и срамни стаорци. MCAO = оклузија на средната церебрална артерија (n = 16); Билет (n = 14). Оваа табела доаѓа од Ifergane et al. 45.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Дискусија
Еден од начините на којшто техниката MCAO презентирана овде може да се гледа како побезбедна отколку што е прикажан оригиналниот MCAO модел, не влијае на ECA и нејзините гранки, вклучително и на окциденталната артерија, крајните јазици и максиларната артерија. При затворање на МСП над ИЦА. Напуштањето на ECA (и неговите гранки) со оригиналниот модел MCAO, преку дистално раздвојување и коагулација на 46, предизвикува нарушена мастификација бидејќи васкуларното снабдување на мускулите е оштетено. 47 Уништувањето на мускулот на крајот може да предизвика ослободување на дополнителна динамика на компјутерската течност. За разлика од оригиналната техника МЦАО, во која пристапот до МЦА е преку ЕЦА, техниката опишана овде е изменета за мозочен удар без прекинување на протокот на крв во ЕЦА и нејзините притоки.
Главните аргументи во корист на новиот модел MCAO во однос на оригиналниот MCAO модел се состојат во неговата способност значително да ја намали варијабилноста на едемот на мозокот, волуменот на инфарктот и промените во тежината, како и да ја намали смртноста зависна од MCAO. Смртноста во постапката МЦАО е важен фактор 48; Стапката на смртност од 20 проценти се смета за разумна 49,50. Стапките на смртност (20% за оригиналниот MCAO, 12,5% за Novel MCAO и 0% за контролата) во сегашната студија беа во прифатлив опсег, но новата техника MCAO имаше подобри резултати од оригиналната MCAO.
Стаорците подложени на новата постапка МЦАО изгубиле тежина веднаш по операцијата и добиле поголема тежина на крајот од студијата отколку стаорците подложени на оригиналната техника МЦАО 28. Повеќе губење на тежината и помалку зголемување на телесната тежина кај стаорци подложени на оригиналниот MCAO може да резултира од влијание на лигаментите на ECA за време на операцијата, што резултира во дистална хипоперфузија во артериите на лицето, говорот и мандибулата, како и оштетување на мускулите од исхемична поддршка Мастика Кога се компромитира мастификацијата, оралниот внес се намалува што, доколку е во комбинација со катаболизам, може да биде одговорно за губење на тежината и, долгорочно, за слаби невролошки исходи, морбидитет и смрт 43. Пристапот до МСУ преку ИЦА не бара никакво мешање во ЕЦА или нејзините филијали. Така, не се предизвикани никакви негативни ефекти за време на новата постапка на МЦАО и немаат проблеми со тежината, морбидитетот или смртта кај стаорци кои се подложени на постапката.
Тестовите што се користат за проценка на основните депресивни фактори како што се депресивно однесување, анхедонија, неподвижност и нарушувања на учењето и помнењето се стандардни процедури што се користат во животински модели на депресија од 51, 52. Тест за однесување, како што е тестот за присилно пливање Порсолт, често е под влијание на невообичаени моторни вештини по МЦАО. Тука, овој тест беше користен од 30 до 33 дена по операцијата за да се утврди дека индукцијата на ПСД кај модифицираните стаорци МЦАО не влијаеше непотребно врз нивните моторни вештини. Според резултатите, стаорците од тест-групата покажале тотално однесување за бегство споредливо со стаорците за справување со пубијата. Стаорците MCAO имале значително повеќе неуспеси да избегаат, значително подолго времетраење на неподвижност и помала склоност кон сахароза во споредба со овците животни. Ова би сугерирало дека оваа техника МЦАО е способна алтернатива на оригиналниот метод МЦАО.
Разликата помеѓу вклучувањето и исклучувањето на стаорците во постапката МЦАО за поширока експериментална проценка зависи многу од резултатот на операцијата. Со моделот предизвикан од ПСД поврзан со МЦАО, некои непожелни несакани ефекти на МЦАО може да се содржат, оставајќи простор за вклучување на помали и евентуално по кревки стаорци во постапката МЦАО. Modelивотинскиот модел МЦАО презентиран овде обезбедува сценарио за намалување на несаканите исходи по ПСД предизвикано од МКАО, бидејќи има потенцијал да ја намали варијабилноста во промената на тежината, едемот на мозокот и волуменот на инфарктот и смртните случаи поврзани со МКАО. Оваа техника може потенцијално да послужи како алатка за проценка на идните третмани со ПСД и да се обезбедат претклинички податоци за ефикасноста на терапевтските супстанции, како и да се следат другите фактори кои ги менуваат модалитетите на клиничкиот исход кај мозочен удар и ПСД.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.