Улогата на ендотелијалните прогениторни клетки кај пациенти со аксијална спондилоартропатија - PDF
1 Од Клиниката за нефрологија и ревматологија (проф. Д-р Мед. Г.А. Милер) од Медицинскиот факултет на Универзитетот во Гетинген Улогата на ендотелијалните прогениторни клетки кај пациенти со аксијална спондилоартропатија ИНВАГУРАЛНА РАСПОРЕДУВАЕ за да се добие докторски степен на Медицинскиот факултет на Универзитетот Георг Август zu Göttingen претставена од Марија Елизабет Вогт, родената Струве од Франкфурт ан дер Одер Гетинген 2018
2 декан: проф. Д-р. рер. нат H. K. Kroemer Говорник: Со-говорник: Трет говорник: Priv.-Доз. Д-р медицински Сузан Патчан проф. Д-р. медицински Rotraut Mößner Проф. Др. медицински Маргарет Шам Датум на устен испит: 12.06.2019 г.
3 Со ова изјавувам дека ја подготвив дисертацијата со наслов Улогата на ендотелните прогениторни клетки кај пациенти со аксијална спондилоартропатија и дека не користев други извори или помагала освен оние наведени од мене. Оснабрик,.
4 Содржина на списокот со фигури. VI список на табели. VII Список на кратенки. VIII 1. Вовед и цели Вовед Спондилоартритис и аксијална спондилоартропатија Дефиниција и историја Епидемиологија/тек на болеста Патогенеза клиника и курс Дијагностика Физички преглед Резултати Класификација на лабораторија Лабораторија за сликање Терапија/управување со Атеросклероза/кардиоваскуларен ризик кај пациенти со аксиларна ендотелијална васкулогено и дисфункција на ангиогенезата Експериментален опис; Изолација и одгледување на ЕПС и разни цитокини Понатамошни стимуланси и инхибиторни фактори на бројот на ЕПС ЕПЦ во контекст на патолошки состојби Состојба на истражување Материјал и методи Колективно собирање на податоци и податоци на пациенти Одредување на оценки на ЕПЦ и методи на клинички преглед
5 3.4 Статистичка анализа на колективните резултати на пациентите Резултати од анализата на CFU Hill Анализа на FACS Вазомодулаторни медијатори Дискусија за курсот Резиме на додаток Библиографија V
7 Список на табели Табела 1: Список на употребливи потрошни материјали 38 Табела 2: Резиме на користени инструменти/уреди 39 Табела 3: Список на употребени реагенси 39 Табела 4: Описни статистички податоци за основните карактеристики на популацијата на пациентите 46 Табела 5: Клинички мерења за проценка на подвижноста на 'рбетот/текот на болеста 46 Табела 6: Описна статистика за бројот на CFU-EC во групата пациенти и контролната група 47 Табела 7: Список на p-вредностите за бројот на CFU-EC, класифицирани според различните варијабли/карактеристики 48 Табела 8: Описни статистички податоци за бројот на CFU-EC, класифицирани според пол 49 Табела 9: Описна статистика за бројот на CFU-EC, класифицирана според ASDAS 52 VII
8 Список на кратенки acldl = ацетилирана липопротеинска анкилоза со мала густина = целосно зацврстување на зглобовите = анкилозен спондилитис = анкилозен спондилитис ASAS = Проценка на активност на спондилоАртритис Меѓународно општество ASDAS = Анкилозен спондилитис Болест Активност Резултати axspa = Бањање на спондилоизолоидроандроза Функционален индекс BASG = Глобален индекс на анкилозирачки спондилитис на бања BASMI = Индекс на метрологија на анкилозирачки спондилитис во бања BSA = албумин на говеда во серум BSG = стапка на седиментација CAC = циркулирачки ангиогени клетки CD = кластер на диференцијација CEC = циркулирачки ендотелијални клетки, циркулирачки ендотелијални клетки CFU = воспалително цревно заболување единица за формирање CFU-EC = единица за формирање колонија-ендотелијална клетка CPC = циркулирачка прогениторна клетка CRP = Ц-реактивен протеин DMARD = антиревматски лек за модификација на болест ECFC = клетка за формирање на ендотелијална колонија ELISA = имуносорбент поврзан со ензим nt Анализа на ентезитис = воспаление во областа на прицврстување на тетивите, лигаментите или капсулите EC = ендотелијални клетки ecfc = доцни израстоци EPC EPC = ендотелијална прогениторна клетка VIII
9 ESSG = Европска група за студии на спондилоартропатија ФАКС = сортирање на клетки активирани со флуоресценција FBA = растојание на подот на прстите FLK-1 = рецептор на VEGF-2 CD309 KDR HDL = липопротеин со висока густина HLA = хуман леукоцитен антиген HSC = хематопоетски матични клетки IL-6 = Интерлеукин-6 KDR = рецептор за вметнување киназа на домен KHK = коронарна срцева болест LDL = липопротеин со мала густина LWS = лумбален 'рбет MC = миелоидна матична клетка MRT = магнетна резонанца НЕ = азотен оксид НСАИЛ = нестероидни антиинфламаторни лекови солен PDGF = добиен тромбоцитен фактор на раст PPI = инхибитори на протонска пумпа РА = ревматоиден артритис SDF-1 = добиен фактор од стромална клетка 1a SpA = спондилоартритис, спондилоартропатија, спондилоартропатија TGF = трансформирачки фактор на раст TPC = резидентно ткиво прогениторна клетка IX VEGF = васкуларен ендотелијален фактор
11 Истражени се следниве прашања: 1. Каква улога играат EPC во аксијалната спондилоартропатија? 2. Дали нивниот број или функционалност се сменија во споредба со здравата контролна група? 3. Дали бројот или функцијата на ЕПС се во корелација со сериозноста на клиничкиот тек, употребената терапија со лекови или активноста на болеста? 4. Дали EPC играат улога во прогресијата на болеста кај секој пациент? Се надеваме дека резултатот од нашата студија може да има ефект врз терапевтските опции или прогностичките параметри. 2
19 Значително неповолни прогностички фактори според една француска студија, покрај кокситисот, се ESR> 30, слаб одговор на терапија со НСАИЛ, ограничена подвижност на лумбалниот 'рбет, ран почеток на болеста (пред 17-та година од животот), манифестации на органи или олигоартритис (Пучнер 2012). Потрошувачката и занемарувањето на никотин или само повремено извршената физиотерапија, исто така, има негативно влијание врз текот. Смртноста е особено поголема како резултат на зголемениот кардиоваскуларен ризик (Manger and Schulze-Koops 2012). 10
24 блокатори на TNF-α предизвикуваат целосна ремисија кај над 50% од пациентите со аксијална спондилоартропатија (Баркхам и сор. 2009). Сите мерења на напредокот (BASDAI, BASFI, BASMI) се подобрија по 24 и 102 недели и се нормализираа параметрите на воспалението (Браун и Сипер 2007). Според Харун и сор. (2013), терапијата со блокатори на TNF-α, особено ако се започне во рана фаза на болеста, се чини дека го намалува радиографскиот напредок. Хируршката терапија е само опција за избрани пациенти со телесен инвалидитет, како што се оние со нестабилен 'рбет. Покрај фармаколошката терапија, фундаментална улога играат и мерките без лекови, особено физиотерапијата. Студиите покажуваат дека ако редовно се изведува терапија за вежбање, може да се демонстрира подобрување на физичката функција, болката и целокупната благосостојба (Дагфинруд и сор. 2008). 15-ти
48 материјали Уред СО2 инкубатор (ормар за греење) Епендорфски пипети Фрижидер-фрижидер за замрзнувач ФАКС-Калибур Микроскоп: Дијавертна микроскоп за превртена клетка култура стерилна клупа Цитрифуга за чист воздух тип CA/R Вортекс ieени 2: Центрифуга Megafuge 1,0R: Ротикса/Производител Санио Епендорф АГ, Hamburg Becton Dickinson Sanyo Liebherr Leica Microsystems Olympus Biohazard Bodo Schmidt GmbH Heraeus instruments GmbH Hettich Табела 2: Резиме на инструментите/уредите што се користат Супстанција број на каталог на производителот Biocoll 1,0777 g/ml Biochrom AG, Belin L6115 BSA ph 7,0 LabClin L3484 реагенс за блокирање на ендокулт Базал медиум StemCell Technologies Inc Ендокултен додаток StemCell Technologies Inc FcR блокирачки реактор Милениеј Биотек фибронектин FLK = системи за истражување и развој на глувчето против човекот, Минеаполис FAB 357F VEGFR2 формалин хидрохлорид лектин од Ulex europaeus SIGMA9 SIGMA9 SIGMA9 ЈП антитела Jексон Имуноресор, Балтимор, САД Табела 3: Список на користени реагенси 39
50 Далечина од подот до прстот (FBA) Пациентот се наведнува напред колку што може со исправени нозе. Се мери растојанието помеѓу врвот на средниот прст и подот. Оваа измерена вредност се користи за проценка на 'рбетот, како и на зглобовите на колкот и ихиокруралните мускули. Често се користи во клиниката за следење на напредокот (Фелдткелер и ван дер Хајде 2005). Странична наклонетост на 'рбетот Со пациентот стои исправено, растојанието помеѓу подот и продолжениот врв на средниот прст се мери на телото. Се прави ново мерење со максимална странична наклонетост со нозете сè уште исправени (без ротација!). Средната вредност се формира од разликата помеѓу првата и втората вредност, измерена за обете страни (норма> 10 см) и се користи за пресметување на БАСМИ (ван дер Хејде и сор. 2008). Слика 10: Шематски приказ на странична наклон на 'рбетот (за детали за мерењето, погледнете го текстот) Растојание до глуждот Оваа мерка се користи за проценка на подвижноста на зглобот на колкот. Кога пациентот лежи, растојанието помеѓу внатрешните глуждови се мери со што е можно пошироки нозе (проширени колена, прсти нагоре) (норма> 100 см). Оваа вредност е вклучена во БАСМИ (Фелдткелер и ван дер Хајде 2005). 41
51 Растојание од трагус-wallид Ова мерење се користи за проценка на кифоза. Растојанието помеѓу трагусот и theидот се мери со тоа што пациентот стои исправен со грбот и потпетиците кон theидот и е исто така дел од БАСМИ (Фелдткелер и ван дер Хајде 2005). Слика 11: Шематски приказ на растојанието трагус-wallид, (за детали за мерењето, погледнете го текстот) Ротација на цервикален 'рбет Со оглед на тоа што пациентот седи исправено и гледа право напред, главата се ротира надесно и лево колку што е можно (стандард > 70). Аголот помеѓу максималната ротација и нултата позиција се користи за пресметување на BASMI. Рамената не смеат да бидат свртени (Фелдткелер и ван дер Хајде 2005). BASMI Индексот на метрологија на анкилозирачки спондилитис во бањата е формиран од различни клинички мерења за да се процени подвижноста на 'рбетот и какви било ограничувања. Тука спаѓаат изменетата мерка на Шобер, страничната наклон на лумбалниот 'рбет, максималното растојание на глуждот, растојанието на gusидот трагус, ротацијата на цервикалниот' рбет (за пресметка видете во додаток). Овој индекс е воведен во англискиот град Бат во 1994 година. Во 42 година
53 3.4 Статистичка евалуација Резултатите беа оценети со помош на програмата СТАТИСТИЦА од статистифт. Прво, податоците беа тестирани за нормална дистрибуција користејќи го тестот Shapiro-Wilks-W. Статистика користи продолжување на овој тест опишан од Ројстон 1992 година. Нема нормална дистрибуција во собраните податоци. Понатаму, описната статистика, особено со просечната и стандардната девијација, беа креирани со СТАТИСТИКА. Бидејќи нема нормална дистрибуција, се користеа непараметарски методи за тестирање на статистичкото значење. За ова беше користен тестот Ман-Витни У. За разлика од нормалниот т-тест со нормална дистрибуција, ова не се заснова на средните вредности, туку на основа на редовите. Дефинирана е значајна разлика, т.е. над-случајна асоцијација, со p-вредност под нивото на значење од 0,05. За илустрација на односите помеѓу различните варијабли, коефициентот на корелација е пресметан со употреба на Спирмен, како и нивото на значење. Парцели со кутии и расфрлани парцели беа создадени за да ги илустрираат резултатите. 44
64 CFU-EC и пушење Постои тренд на помал број на CFU-EC кај пушачите. Сепак, разликата кај непушачите не е статистички значајна (p = 0,37). 70 Box-Whisker-Plot CFU и потрошувачка на никотин CFU средна вредност + SD: потрошувачка на никотин без потрошувачка на никотин потрошувачка на никотин без потрошувачка на никотин средна вредност ± stdf. Средна вредност 96 1,96 * stdf. Исклучени екстремни вредности Слика 18: Број на CFU-EC, класифицирани според потрошувачката на никотин 55
65 4.3 Анализа на ФАКС За квантитативна проценка на цепс, примероците на пациентот беа подготвени и анализирани со помош на уредот ФАКС. Двојно позитивните ќелии за CD133 и FLK одговараат на cepcs. Во споредба со здравата контролна група, овде не може да се забележи значајна разлика. Средната и медијаната се скоро идентични (p = 0,69, N пациенти = 49, N контролна група = 10). Исто така, не може да се прикаже статистички значајна корелација помеѓу измерените CFU-EPC и CD133 +/FLK + клетките измерени со FACS. 8 Заговор за мустаќи за двојно-позитивни ЦД133/ФЛК-клетки кај пациенти и контролна група Stdf Средна вредност 96 1,96 * stdf. Исклучени екстремни вредности Слика 19: cepcs (во%) кај пациенти и контролна група. 56
66 ФАКС и активност на болеста Дефект на цеп-цепките според активноста на болеста, измерен со БАСДАИ, покажа статистички незначителна тенденција кон поголем број на цепс со висока активност на болеста (што одговара на БАСДАИ> 4; p = 0,1). FACS и пол Класификацијата на cepcs измерена според FACS според полот не покажа значителна разлика (p = 0,08). Постои тенденција кон помал број на cepc кај машки пациенти. 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 Box-Whisker-Plot Број на EPC (во%) поделен по пол EPC 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 Средна + SD: Womenени 1,45 + 2,3 мажи 0,62 + 0,8 0,4 жени мажи значи средна d stdf. Средна вредност 96 1,96 * stdf. Слика 20: cepc (во%) класифицирани според пол 4.4 Вазомодулаторни медијатори Разликите помеѓу концентрациите на различните вазомодулаторни медијатори (VEGF, PDGF, TGF-β, ангиопоетин -1 и -2) во контролната група и кај пациентите не беа статистички значајни. 57