Аеробна крвна култура (со антибиограм како што е соодветно) - Синево
Генерални информации
Културата на крвта е една од најважните и најнежните методи за лабораторијата за микробиологија. Крвта, нормално стерилна, изолира и идентификува бактерија или габа во крвната култура има значително дијагностичко значење 13 .
Бактериемија е присуство во крвта на бактерии од септичка епидемија или оштетена мукоза. Честопати, бактериската состојба е лишена од клинички израз или е придружена само со треска и треска на која може да се додадат симптоми и знаци на состојбата што предизвикала бактериемичен исцедок.
Септикемија е клинички термин кој дефинира важна бактериемија со неправилна, непредвидлива и тешка клиничка еволуција, придружена со треска, неправилна треска, токсемија, хипотензија, проституција, полиморфни и разни осипувања, ткивни или висцерални септички метастази. Тежината на септичкиот синдром остава во позадина симптоми на примарна инфективна епидемија, кои секогаш мора да се бараат 1 .
Микроби вклучени во:
Staphylococcus aureus, Escherichia coli и други ентеробактерии, стафилококи-коагулаза-негативни (SCN), Pseudomonas spp, Streptococcus spp, анаеробни бактерии, квасец
Streptococcus spp., Enterococcus spp., Staphylococcus spp
Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae
Во зависност од влезната порта:
Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae
Ентеробактерии, строго анаеробни бактерии, Enterococcus spp.
Строго анаеробни бактерии, E.coli, Enterococcus spp.
Инфекции и опструкции на уринарниот тракт
Ентеробактерии, Enterococcus spp.
Принципот на крвна култура
Културата на крвта е квалитативен тест за откривање на микроорганизми присутни во крвта. Крвта, земена под услови на строга асепса, се сее во шише со крвна култура, чиј состав фаворизира развој на аеробни, анаеробни и микроаерофилни микроби 11 .
Главните фактори на збогатување вклучени во животната средина кои го фаворизираат развојот на микробите се:
- комбинација на пептони, казеин и желатин за внес на аминокиселини;
- екстракт од квасец за внес на витамини;
- хемин и NAD кои овозможуваат развој на хемофилус и го промовираат растот на микроби кои бараат хранливи материи, како што се Actinobacillus spp, Cardiobacterium spp, Eikenella spp и други анаероби;
- витамин Б6, неопходен елемент во развојот на стрептокок со недостаток на ендокардитис и стафилокок;
- CO2 важен елемент за раст на микробите кај видовите: Neisseria, Brucella, Haemophilus, Streptococcus, Campylobacter.
Сепак, размножувањето на бактериите зависи и од низа фактори независни од условите за одгледување: густината на микробите во крвта, нивната фаза на размножување, присуството во крвта на некои инхибиторни супстанции.
Бактериемијата и фунгемијата кај возрасните генерално се развиваат со мал број циркулирачки микроорганизми (помеѓу 1-30 CFU/mL крв). Кај новороденото, новороденчето и малото дете, концентрацијата надминува 100 CFU/mL. Општо земено, постои директно пропорционална врска помеѓу сериозноста на инфекцијата, прогнозата и концентрацијата на бактерии во крвта. .
Бактериите заробени во шишето со крвна култура можат да бидат:
- недопрена, слободна во плазмата, во фаза на активно множење и ќе продолжи да се дели брзо во супа од крвна култура или во фаза на одмор и ќе започне да се размножува на крајот од фазата на латентност што одговара на прилагодување кон хранливата околина на вијалата;
- повеќе или помалку оштетени или маскирани од дејството на системот на антитела-комплемент, антибиотици, полиморфонуклеарна фагоцитоза или моноцити и ќе се развијат по автолиза на леукоцити ако останат одржливи;
- Бактерии во форма на L (недостатоци во исхраната) чиј раст бара прилагодена средина (хипертонична и богата со фактори на раст) 12 .
Растот на бактериите во крвната култура може да се одложи или спречи ако не се користи антикоагуланс во културниот медиум, бидејќи микроорганизмите ризикуваат да бидат заробени во тромбот на фибрин. Во исто време, некои антикоагуланси можат да бидат токсични за одредени патогени, исто како и антибиотиците во крвта. Овие пречки може да се отстранат со употреба на натриум полианетолсулфонат (СПС), нетоксичен антикоагуланс кој промовира раст на бактериите преку неутрализирање на бактерицидната активност на човечкиот серум и инхибиција на дејството на антибиотиците (стрептомицин, канамицин, гентамицин, полимиксин Б). СПС може да има инхибиторна улога врз соеви на Пептострептококус, Неисерија, ефект неутрализиран со присуство на желатин во културниот медиум.
Се продаваат полуавтоматски или компјутеризирани компјутерски системи за брзо откривање на бактериите во крвните култури. Принципите на кои се засноваат овие системи се повеќекратни. Ги споменуваме само оние што ги користиме во лабораторијата во Синево: директно откривање на производство на СО2, со помош на:
-сериско скенирање на примероци на гасови што произлегуваат од раст на бактерии во вијалата за крвна култура, како во системот BACTEC (BACTEC 9050);
-принудувајќи ја културната течност (под ослободен притисок на СО2) да премине во сигналниот оддел од каде што може да се испита микроскопски и субкултурно, како во ОКСОИДНИОТ СИГНАЛ СИСТЕМ 9 .
Препораки за утврдување
Тоа се прави на индикација на лекарот во одредени клинички ситуации како што се:
• сите случаи со треска од неодредено потекло, особено ако се придружени со клинички знаци кои укажуваат на инфекција;
• пациенти со акутен ендокардитис;
• синдром што сугерира на системска инфекција со специфични микроби (ентерична треска, бруцелоза, лептоспироза);
• тешки локализирани инфекции (менингитис, пневмонија, интраабдоминални супурации).
Крвната култура е исто така мотивирана од:
• имунокомпромитирани пациенти (карцином, зависници од дрога);
• пациентот кој е подложен на медицинска агресија (катетер, дијализа или операција) и има фебрилна состојба;
• во одредени конкретни ситуации (бремена жена, срцев пациент, дијабетичар, со бубрежна инсуфициенција, хепатална инсуфициенција) кога пациентот има треска од неодредено потекло 8 .
Подготовка на пациент
Земањето примероци се изведува пред антимикробен третман, во согласност со предвидливата еволуција на фебрилната крива или кога пациентот сигнализира појава на треска. Ако тоа не е можно, крвта ќе се земе веднаш пред да се даде нова доза на антибиотик. Индицирано е да се земат три периодични примероци во рок од 24 часа; во итни случаи ритамот е во интервал од 30-60 минути 6 .
Примерок собрани - венска крв, по можност пост (на празен стомак), хиперлипемија може да спречи докази за раст на бактерии во течното опкружување.
Областа по избор за пункција е претставена со вените на пликот на лактот. Постапката за земање мостри ги почитува нормите на асепса и антисепса неопходни за да се избегне контаминација на примерокот со бактерии престојувани во флората на кожата. По собирањето на крвта, 10 ml примерок од крв, собран во шприцот, се става во контејнерот со медиумот за култура Signal со дупчење на неговото гумено капаче во услови на строга асепса. Шишето нежно се тресе за да се хомогенизира во масата на медиумот. За системот BACTEC, бербата се врши во контејнер за крвна култура врз принципот на вакуумски затворени системи.
Примерокот е обележан и транспортиран што е можно побрзо од бербата во лабораторијата, на што е можно поблиска температура до 37ºC (изотермална кутија) 8 .
Потребни материјали - 10 ml стерилен шприц; вијала со медиум за култура Сигнал 8; шише со медиум за култура (BACTEC PLUS AEROBIC/F и PLUS ANAEROBIC/F 4; 10; 14, BACTEC PÈDS PLUS ™/F 5 погодно за педијатриски примероци и мали количини на крв) за системот BACTEC.
Количината собрана - возрасен: 10 ml; дете: 3-5 ml (сигнал) и помеѓу 3-10 ml кај возрасни и 1-3 ml кај дете (BACTEC) 8 .
Причини за одбивање на доказите
• неправилно собрани примероци (не се почитувани правилата за антисептици);
• неправилен транспорт 8 .
Потребна е обработкана по бербата - Сигнален систем: во прилог е експанзионата комора испорачана во истиот комплет. Инкубирајте на 37 ° С. Времето на инкубација на термостатот и следење на примерокот е во просек 7 дена. Потребна е продолжена инкубација кај пациенти со субакутен ендокардитис, во примероци земени под антибиотска терапија (до 14 дена) или кога следат микроорганизми кои бараат многу 8 .
BACTEC систем: скенирајте го баркодот на шишето до читачот на баркод и ставете го шишето во посочената положба. Откако вратата е затворена, процесот започнува автоматски. Уредот има капацитет од 50 шишиња. Тој постојано ги следи ампулите за крвна култура инкубирани на 35 o C. Вијалите постојано се тресат за да се промовира растот на бактериите. Позитивните ампули се сигнализираат звучно и визуелно. Системот автоматски извршува контрола на квалитетот на секои 10 минути. Интегрираниот софтвер управува со примерок од податоци 2 .
Метод на работа
A. За комплет сигнал-оксид; составен е од:
а) Контејнер за сигнален медиум; составот на овој медиум овозможува развој на аеробни, анаеробни и микроаерофилни микроби, што предизвикува зголемување на притисокот откриен од индикаторот за раст прилагоден на шишето (експанзиона комора);
б) комора за проширување на животната средина; во случај на размножување на бактериите и зголемување на притисокот, дел од мешавината на крв/супа поминува во оваа комора и укажува на бактериска активност (позитивна крвна култура) 4 .
Класичниот метод се користи за следење на тестовите:
• Макроскопско - визуелно - двапати дневно испитување на ампули за крвна култура за да се бараат знаци на раст на бактериите. Појавата на вијалата може да биде насочена кон предметната бактерија, на пример:
а) заматеност - аеробни грам-негативни бацили, Staphylococcus spp, Bacteroides spp;
б) хемолиза - Streptococcus spp, Staphylococcus spp, Lysteria spp, Clostridium spp, Bacillus spp;
в) производство на гас - аеробни и анаеробни грам-негативни бацили;
г) тромби - Staphylococcus aureus.
• Микроскопско испитување на свежиот препарат и на грам-обоената мачка направена од вијалата за крвна култура.
Забелешка: постојаната агитација на контејнерите во првите 24 часа од инкубацијата го подобрува растот на огромното мнозинство на аеробни бактерии 9; 15 .
Интерпретација на културите во системот Сигнал
Отсуство на раст - околината во контејнерот Сигнал останува чиста и не поминува низ зелениот ракав на експанзионата комора. Во првите 6-12 часа инкубација, може да се направат слепи субкултури (инокулација на чоколаден агар во CO2 атмосфера на 35ºC уште 48 часа или во тиазликолирана супа со ресазурин) и размаски што ќе бидат обоени со грам (микроскопски преглед).
Контејнерите за одгледување на отсуство повторно ќе се инкубираат и понатаму ќе се следат.
Позитивна крвна култура - ако во крвта што треба да се испита имало микроби што се размножиле во културниот медиум (позитивна крвна култура), околината ќе помине во комората за проширување и ќе се издигне над зелениот ракав.
Б. За системот BACTEC, принципот на работа е следниот:
Преку метаболичката активност, микроорганизмите во вијалата ослободуваат СО2 и шишенцата кои содржат маркер за активација, кој станува флуоресцентен во контакт со СО2, го откриваат неговото присуство. Фотодетекторот на фотоапаратот го мери нивото на флуоресценција и ги испраќа податоците до компјутерот. Мерењето го толкува системот според параметрите за позитивност програмирани однапред. Компјутерот ја идентификува позитивната вијала што се сигнализира слушно и визуелно со запалување на сијалицата. Графичката позиција на позитивно откриената вијала се појавува на екранот на екранот на уредот.
Бидејќи е целосно автоматски систем, ампулите се следат на секои 10 минути што овозможува веднаш откривање на позитивни ампули .
Протоколот за следење е 7 дена - но развојот на микроорганизми може да се открие по 8 часа 2; 4; 10; 14 .
В. Позитивните крвни култури се обработуваат на следниов начин:
Сигнален систем: Мала количина медиум се зема од долната област на комората за проширување. Пристапот до комората за проширување се прави преку нејзиниот горен дел, преку стерилен маневар. Овој маневар не може да ја контаминира содржината на контејнерот Сигнал.
Систем BACTEC: преку игла прикачена на шишето, се зема количина медиум од кој се прават брисеви и се сее на културни медиуми 2 .
Земениот примерок се користи за:
а) ширење брисеви на слајдовите на микроскопија; тие се испитуваат по боење со Грам. Во однос на резултатот од читањата, се прават повторувања.
б) трансплантација на цврсти и течни медиуми во зависност од микроскопски докажаните бактерии: агар-крв/крв на Колумбија, агар-чоколадо, Левин/МекКонки, Сабуро со хлорамфеникол, супа од тиогликолат со ресазурин.
в) плочите се инкубираат, во зависност од микроскопските бактерии, на температура од 35 deC-37ºC во аеробни услови, во атмосфера со 5-7% CO2 или во анаеробиоза (GasPack + редукциска смеса) 48-72 часа. Се испитуваат изолирани колонии.
г) тестови неопходни за идентификација: идентификација на каталаза, комплет за стафилококна идентификација, комплет за идентификација на стрептокок, дискови на Оптокин, фактори X, V и XV, политропски медиуми за ентеробактерии, реакција на оксидаза, тестови на API (API 20E, API 20NE, API NH и сл.) тестови за идентификување на квасец. Идентификувањето може да се изврши и автоматски на системот Vitek.
д) тестирање на антибиотик или антифунгални чувствителност со дифузиметриски или автоматски метод на Витек 9 .
Д. Објавување на резултатите
а) делумен резултат со размачкана размачкана грам - тој се снима и објавува по телефон;
б) конечен резултат по изолација, идентификација на бактеријата и изведба на антибиограм или антифунгални.
Интерпретацијата на крајниот резултат се прави во согласност со клиничкиот контекст и бројот на позитивни ампули во однос на собраните 9 .
• неколку позитивни крвни култури со патоген микроб;
• неколку позитивни крвни култури со заеднички комензален микроб во одреден клинички контекст;
• 1 позитивна крвна култура со познати патогени микроби (Salmonella spp);
• 1 позитивна крвна култура со потенцијални патогени микроби во евокативен клинички контекст како што се: Streptococcus pneumoniae кај пневмонија, ентеробактерии кај инфекции на уринарниот тракт, стафилококи со коагулаза-негативни кај инфекции на катетер.
• 1 позитивна крвна култура со комензален микроб без клинички контекст: суперинфекција со коагулаза-негативен стафилокок, коринебактерии, негрупирани стрептококи;
• на депресивно имунолошко поле, овие бактерии исто така се земени предвид;
• на нормално имунолошко поле, крвната култура се повторува.
• примерокот беше собран по антибиотска терапија;
• бербата се вршеше доцна за време на болеста (се појавуваат антитела);
• недоволна количина на собрана крв;
• прекратко време на набудување;
• Погрешно избран медиум за култура.
Позитивни крвни култури за неколку видови бактерии
Ако неколку бактериски видови биле изолирани во една вијала или од различни шишенца на ист пациент, тие се забележуваат во следниве ситуации:
• катетер одржуван долго време.
Изолирани видови на бактерии во зависност од периодот на растење
• во првите 1-2 дена растат: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp, enterobacteria;
• по 3 дена растат: не-ферментативни грам-негативни бацили, анаеробни бактерии;
• на 4-5 дена: Haemophilus spp и стафилокок-негативен коагулаза;
• на секои 6-7 дена: Кандида видови;
• на 9 дена: коринебактерија 9 .
Граници и пречки
• применет антимикробен третман пред земање мостри;
• контаминација на крвта со егзогена флора;
• недоволна количина на земена крв;
• неправилно утврдена фреквенција и време на бербата;
• погрешно избрана околина за инкубација и трансплантација;
• несоодветно време на инкубација 1; 6; 12 .
1. Акијама Х., Канзаки Х., Тада Ј., Арата Ј. Кофилаза-негативни стафилококи изолирани од разни лезии на кожата. Во Д Дерматол, 25: 563-8. 1998 година. Реп. Тип: весник (целосен).
2. Бектон Дикинсон и Ко., Бактец 9050. Системи за микробиологија Бектон Дикинсон, Спаркс, Мериленд 21152 САД, 1997 година
3. Думитру Буиуц. Култура на крв во дијагностицирање на инфекција. Во трактатот за клиничка микробиологија. Думитру Буиук, Маријан Негут, Медицинска издавачка куќа, Романија, 2-то издание. 2008 година, 165-182 година.
4. Goldenbaum П., Стафорд Е., Талбот Б. Лабораториска студија за неутрализација на антимикробните средства со средство за крвна крв што содржат смола, Шести Европски конгрес за клиничка микробиологија и инфективни болести, 1993, 28-31.
5. Hardy L., Crowther L., Goldenbaum P., Beaty S . Шести Европски конгрес за клиничка микробиологија и инфективни болести, 1993, 28-31.
6. Josephозеф М. Цивета, Роберт В. Тејлор, Роберт Р. Кирби. Критичка грижа. Во Lippincott Raven ед. 1997 година; 28: 405-412.
7. Koontz FP., Flint KK., Reynolds JK., Allen S. Мултицентрична споредба на висок волумен (10 ml) бр. BACTEC Plus и стандардот (5 ml) бр. BACTEC систем. Во Дијагн. Микробиол. Зарази Дис., 1991, 14: 111-8.
8. Кумар П.Ј., Кларк М.Л. Во клиничката медицина. Бејлиер Тиндал, Велика Британија, 2. издание. 1990, 710-720.
9. Лабораторија во Синево. Специфични препораки на употребената технологија за работа во 2010 година. Ref Type: Каталог.
10. Левиевре Х., Гименез М., Ванденеш Ф. и др. Мултицентрична клиничка споредба на шишиња што содржат смола со стандардни аеробни и анаеробни шишиња за култура на микроорганизми од крв. Во евро.Ј. Клин. Микробиол. Инфицирај. Дис., 1997, 16: 669-674.
11. Loulergue J., Avril J.L., Omwanga D. Hemocultures. Во проучување на патолошки производи. Изд. Maury- Imprimeur S.A. 1987, 41-45.
12. Philippona A., Paul C., Nevot P. Hemoculture. Во Rev.Prat, 33: 1929-38. 1983. Ref Type: Journal (Целосно)
13. Reimer L.G, Wilson M.L., Weinstein M.P. Ажурирање за откривање на бактериемија и фунгемија. Во Клин. Микробиол. Откровение, 10: 445-465. 1997 година. Реп. Тип: весник (целосен).
14. Rohner P., Pepey Beatrice, Auckenthaler R., Предност на комбинирање на смола со медиуми на крвна култура Lytic BACTEC. Во J. Клин. Микробиол., 1997, 35 (10): 2634-8