Аполипротеин Е - генотипизација - ла

Генерални информации

Аполипопротеин Е (ApoE) е 299 аминокиселински гликопротеин кој игра клучна улога во метаболизмот на липидите. Главно се синтетизира во црниот дроб и мозокот, но исто така се наоѓа во бубрезите или слезината. Во нервниот систем астроглијата и микроглијата се главните производители на ApoE, додека невроните по можност изразуваат рецептори за ApoE.

ApoE се приврзува на различните плазматски липопротеини како што се хиломикроните, липопротеините со многу мала густина (VLDL) и липопротеините со висока густина (HDL). Учествува во расчистување на остатоците од хиломикрон и VLDL кои служат како лиганд за рецепторите за липопротеин (LDL рецептор и аеО специфичен рецептор на црниот дроб). Вишокот холестерол во крвта се елиминира со транспорт до рецепторите на површината на клетките на црниот дроб за обработка. Одржувањето на нормалното ниво на холестерол е од суштинско значење за спречување на коронарна срцева болест и мозочен удар 1; 3; 4; 5; 6. ApoE е исто така важен за цревната апсорпција на холестерол 6 .

Генот АПОЕ, лоциран на долгата рака на хромозомот 19 (составен од 4 егзони и 3 интрони, со 3597 базни парови), има полиморфизам во кој се опишани три алели (ε2, ε3 и ε4) што може да доведе до шест различни генотипови (ε2/ε2, ε2/ε3, ε2/ε4, ε3/ε3, ε3/ε4 и ε4/ε4). Трите алели кодираат три изоеформа на ApoE: E2, E3 и E4, соодветно, кои се разликуваат едни од други со аминокиселините присутни на позициите 112 и 158. E3 - најчестата изоформа во кавкаската популација има цистеин (Cys) на позиција 112 и аргинин ( Arg) во позиција 158. E2 и E4 се разликуваат од E3 со единствена замена на аминокиселини во една од двете позиции - E2: Arg158 Cys; E4: Cys112 → Arg.

Фреквенцијата на алели ε2, ε3 и ε4 за поголемиот дел од кавкаската популација варира на следниов начин:

Генотипот АПОЕ влијае на навлегувањето на липопротеините од страна на клетките на црниот дроб, како и на катаболизмот на хиломихромите, честичките на ВЛДЛ и ХДЛ. Алелот ε3 е варијанта поврзана со „нормалниот“ метаболизам на липидите. Од друга страна, многу студии кои ја проценуваат улогата на полиморфизмот на ApoE врз плазматските липиди покажаа дека присуството на алелот ε4 е поврзано со зголемување на LDL-холестеролот, додека присуството на ε2 е поврзано со намалени нивоа на LDL-холестерол. Покрај тоа, некои студии објавија дека алелот ε4 е поврзан со коронарна срцева болест, особено кај мажите. Исто така, присуството на алели ε2 и ε4 предизвикува високи концентрации на плазма триглицериди 3; 4; 5; 6. Овие промени се должат на спротивните ефекти што варијантите Е2 и Е4 обично ги имаат на плазматските липиди:

е поврзана со помалку ефикасно формирање на хиломикрон и VLDL; трансферот на крв во црниот дроб е помал, што доведува до бавно чистење на диетални масти;
предизвикува помала конверзија на липопротеини со средна густина (IDL, што е всушност остатоци од VLDL) во LDL-холестерол, што доведува до понизок вкупен холестерол и зголемени триглицериди;
преференцијално се врзува за ХДЛ-холестерол;
има значително помал афинитет кон рецепторите за липопротеини.

го ограничува врзувањето за ХДЛ-холестерол;
преференцијално се врзува за VLDL-холестерол; со што се спречува нормалниот процес на клиренс на холестерол;
обезбедува брза конверзија на IDL во LDL;
глобален ефект: зголемување на вкупниот холестерол, ЛДЛ-холестерол и триглицериди.

Хомозиготниот генотип ε2/ε2 е поврзан со хиперлипопротеинемија од типот III (семејна дисбеталипопротеинемија), семејна дислипидемија која се карактеризира со комбинирано зголемување на нивото на холестерол и триглицерид во серумот и присуство на голем бета-дел на електрофорезата на липопротеинските ID. Има инциденца од 1/2000 до 1/10 000 и е поврзана со висок ризик од корорнарна срцева болест и периферни васкуларни заболувања. Почетокот на болеста е генерално во зрелоста, но варира од адолесценти до постари лица. Пред развој на васкуларна болест, пациентите обично немаат никакви симптоми, кај повеќето се дијагностицира хиперлипопротеинемија од типот III по рутинска контрола, каде што се забележуваат промени во плазма холестеролот и триглицеридите. Клиничките манифестации вклучуваат ангина пекторис, миокарден инфаркт или интермитентна клаудикација. Кај нелекувани лица, ксантоми може да се забележат (рамни на дланките или туберозни во зглобовите).

Демонстрацијата на генотипот ε2/2 е неопходна за дијагностицирање на хиперлипопротеинемија тип III. Над 90% од луѓето со хиперлипопротеинемија тип III се хомозиготни за алелот ε2. Сепак, помалку од 10% од луѓето хомозиготни за ε2 алелот имаат клинички манифестации на хиперлипопротеинемија од типот III. Ова сугерира дека други генетски, хормонални или фактори на животната средина придонесуваат за фенотипско изразување на болеста. Пациенти со липиден профил во согласност со хиперлипидемија од типот III се кандидати за анализа на генотип АПОЕ 3; .

Аполипротеинот Е игра важна улога во метаболизмот на липопротеините и хомеостазата на холестерол во мозокот и затоа носителите на алелот ε4 на генот ApoE имаат висок ризик од развој на Алцхајмерова болест (BA). Хомозиготите за алелот ε4 на генот ApoE обично развиваат БА на помлада возраст отколку хетерозиготите. Генотипирањето на ApoE не е специфично ниту чувствително и може да игра само адјувантна улога во дијагностицирањето на БА кај симптоматски индивидуи; кај асимптоматски луѓе неговата улога е мала. Така, присуството на алелот ε4 не е ниту потребно ниту доволно за да се развие БА 7 .

По откривањето на генот ApoE, неколку студии покажаа поврзаност помеѓу полиморфизмот на генот ApoE и хронични болести како што се Алцхајмерова болест, когнитивен пад поврзан со возраста, остеопороза, карцином на дојка, бубрежна болест во крајна фаза, атеросклероза, дијабетес, корорнарна срцева болест и долговечност. 6 .

Препораки за генотипирање на ApoE - проценка на кардиоваскуларниот ризик, персонализација на терапијата, дијагноза на хиперлипопротеинемија од типот III и проценка на Алцхајмеровата болест кај пациенти со деменција 1; 3; 4 .

Примерок собрани - крвта ќе дојде 2 .

Контејнер за берба - вакутаин кој содржи ЕДТА како антикоагуланс 2 .

Количината собрана - колку што дозволува вакуумот 2 .

Причини за одбивање да се обиде - употреба на хепарин како антикоагуланс 2 .

Стабилност на тестот - 7 дена на 2-8ºС 2 .

Метод - верижна реакција на полимеризација (PCR) со откривање со електрофореза на агарозен гел 2 .

Интерпретација на резултатите

Добиениот генотип АПОЕ ќе биде соопштен 2 .

Граници и пречки

Овој тест нема да ги открие сите мутации кои предизвикуваат хиперлипопротеинемија од типот III. Затоа, отсуството на детекција на мутација не ја исклучува можноста дека поединецот може да биде носител или да е под влијание на оваа болест.

Резултатите од тестот треба да се толкуваат во согласност со клиничкиот контекст, семејната историја и присуството на дополнителни лабораториски податоци. .