Бихејвиорални фармаколошки и молекуларни биолошки студии за повлекување на опијат кај стаорци -

Бихејвиорални фармаколошки и молекуларни биолошки студии за повлекување на опијат кај стаорци Дисертација на биолошки факултет на Универзитетот Лудвиг Максимилијан во Минхен, зоолошки институт, оддел за невробиологија, презентиран од Дипл. Кристијан Киршке на 31 октомври 2001 година

биолошки

Прв извештај: Втор извештај: Специјален извештај: Проф. Рајнер Ландграф проф. Д-р. Питер Шлегел проф. Д-р. Ден на усно испитување на Рајнер Спанагел: 17 јуни 2002 година

Содржина 1. Општ вовед 3 2.1. Вовед [S 35] -GTPγS студија за авторадиографија 11 2.2. Студија за авторадиографија на материјал и методи [S 35] -GTPγS 17 2.2.1. Animивотни и сточарство 17 2.2.2. Постапка за тестирање и дизајн на група 17 Експеримент 1 17 Експеримент 2 18 Експеримент 3 19 2.2.3. Избор на мозочни области 19 2.2.4. [S 35] -GTPγS авторадиографија 21 2.2.5. [H 3] -Студија за врзување ДАМГО 22 2.2.6. Евалуација и статистика 23 2.3. Резултати [S 35] -GTPγS студија за авторадиографија 25 Експеримент 1 25 Експеримент 2 31 Експеримент 3 35 2.4. Дискусија [S 35] -GTPγS студија за авторадиографија 37 3.1. Вовед во концептот на налоксон со мала доза 42 3.2. Материјал и методи нацепт за налоксон со мала доза 46 3.2.1 Animивотни и сточарство 46 3.2.2 Пелети од морфиум 46 3.2.3. Експерименти на отворено поле 47 Администрација на налоксон акутна мала доза 47 Сензитизација 48 3.2.4. Експерименти во Скинер кутии 49 Дискриминација на дрога 49 Откажување од опијат во Скинер кутии 50 3.2.5. Експеримент во полиња за набудување 51 3.2.6. Евалуација и статистика 52 3.3. Резултати од концептот на налоксон со мала доза 54 Пелети со морфиум 54 Експерименти на отворено поле 55 Експерименти во Скинер кутии 58 Експерименти во полиња за набудување 61 3.4. Дискусија за концептот на налоксон со ниски дози 63

4.1. Индукција на условено повлекување 68 4.2. Материјал и методи на условено повлекување 74 4.2.1 Animивотни и сточарство 74 4.2.2. Modelивотински модел на условено повлекување 75 4.2.3. Експеримент на отворено поле 77 4.2.4. Тест за хипералгезија (топла плоча) 77 4.2.5. Мерење на стресните хормони 77 4.2.6. Споредба на животинскиот модел со парадигмата на стресот 78 4.2.7. in situ хибридизација 79 4.2.8. Интервенција од мемантин 82 4.2.9. Евалуација и статистика 82 4.3. Резултати од условено повлекување 83 Дел 1: imalивотински модел за мерење на симптоми на условено повлекување 83 Дел 2: хибридизација на самото место 96 Дел 3: Фармаколошка интервенција со употреба на мемантин 99 4.4. Дискусија за условено повлекување 106 Дел 1: imalивотински модел за мерење на условени повлекување на симптомите 106 Дел 2: Ин хибридизација на самото место 109 Дел 3: Фармаколошка интервенција со употреба на мемантин 111 5. Заклучок 113 6. Библиографија 116 признанија 131 Виографија 132

Сè уште нема знаење за активноста на G-протеините споени со μ-опиоидни рецептори при повлекување, така што не е разјаснето прашањето до каде е претерана невронска активност при повлекување под влијание на G протеините и нивната функционалност. Целта на оваа студија е да се испита активноста на G-протеините споени со микро-опиоидни рецептори при повлекување, земајќи ги предвид различните параметри. Методот на истрага е оној на Сим и сор. (1995) понатаму се развива авторадиографија [S 35] -GTPγS, што овозможува мерење на оваа активност да се изврши на главно недопрениот дел од мозокот и истовремено да се утврди точна анатомска локација на оваа активност. Ова исто така овозможува да се извршат понатамошни методи на молекуларно биолошко испитување на истиот мозок (на пр. Студија за врзување на лиганд) со цел да се откријат сите разлики во интеракцијата помеѓу врзувањето на рецепторот и активирањето на Г протеините. 16

10 10 +5 +5 0 0 -5 -5 -10 -15 -10 Брегма-15 0 Брегма 0 5 5 5 5 0 Интераврална 10 0 Интерарална 10 +15 +10 +5 0 -5 +15 +10 +5 0 -5 Nucleus accumbens Interaural 10,60 mm Bregma 1,60 mm 10 10 +5 +5 0 0 -5 -5 -10 -15-10 Bregma-15 0 Bregma 0 5 5 5 5 0 Interaural 10 0 Interaural 10 +15 +10 +5 0-5 +15 +10 +5 0-5 ЛВ Централно јадро на амигдалата II Интераурален 6,70 мм Брегма -2,30 мм 10 10 +5 +5 0 0-5 -5-10 -15-10 Брегма-15 0 Брегма 0 5 5 5 5 0 Интераврална 10 0 Интерарална 10 +15 +10 +5 0-5 +15 +10 +5 0-5 Locus coeruleus Nucleus parabrachialis Interaural -0,80 mm Брегма -9,80 mm Сл. 4: Илустрација и позиција на испитаните области на мозокот. Претставување изменето од Паксинос и Вотсон (1998) 20

2.2.6. Евалуација и статистика Евалуација на авторадиографијата и статистиката на [S 35] -GTPγS: Развиените филмови беа дигитализирани со помош на видео камера (Sony XC-77) и оценети со помош на компјутер (Optimas, BioScan). Степенот на оцрнување на одделните региони на мозокот е снимен со помош на дензитометрија и радиоактивноста [S 35] е утврдена со споредување на применетиот [C 14] стандард (NEN) и пресметаниот фактор на конверзија. Резултатот беше изразен во nci/g. Факторот на конверзија е пресметан со лупење на инкубираните делови од слајдовите, одредување на тежината и одредување на радиоактивноста во фотометријата на течен сцинтилатор. Фактор на конверзија е пресметан од сивите нивоа и применетиот стандард [C 14] врз основа на резултатите од спектрофотометријата на течен сцинтилатор. Добиените податоци се пријавени како групна ± стандардна грешка (СЕМ). Статистичките пресметки беа извршени со двофакторна анализа на варијанса (ANOVA, фактор А: базично мерење на стимулација наспроти стимулација на ДАМГО, фактор Б: групи). Како последователен пост хок тест беше користен testуман-Кеулс тест. Ако веројатноста за грешка стр