Ензимска хидролиза на топлина-коагулиран компир протеин 2
Документи
Препис на ензимска хидролиза на топлина-коагулиран компир протеин Дел 2. Параметри на влијание
Ензимска хидролиза на топлина-коагулиран компир протеин Дел 2. Параметри на влијание *
Од Ф. Мителбах, Е. Бергхофер, В. Стејрер и В. Хајн, Виена
За успех на ензимска хидролиза на топлински коагулирана ензимска хидролиза на топлински коагулиран протеин од компир. II. Производи од компир протеин, од суштинско значење е да се има влијанието на Параметрите што ја одредуваат реакцијата. Да се намалат или исклучат некои тест параметри на супстанциите што инхибираат. Ова може да се направи со избор на соодветни ензимски препарати или со користење на испитана ензимска хидролиза на коагулираниот топлина протеин од компир. Намалување и елиминирање на, соодветно, влијанието на одредени методи пред третман. инхибитори слични на протеини со избор на специфични ензими или со
примена на методи за предтретман на бропер беше од најголемо значење.
Протеинот од компир добиен со коагулација под притисок на топлина е во голема мера нерастворлив [1,2,31]. Ензимската хидролиза е еден од начините да се подобри растворливоста и другите поврзани функционални својства [4]. Во продолжение на работата што веќе е накратко пријавена [5], беа испитани различни фактори кои влијаат на ензимското разградување на протеините од компир.
Сув производ на протеини од компир од различни години на берба е произведен со коагулација под притисок на топлина и сушење со циркулација:
Содржина на суров протеин Содржина на вода Содржина на сурова пепел (N x 6,25)
1974 78,3% 9,7% 3,4% 1975 77,9% 7,8% 3,0% 1976 8О, О% 8,2% 2,7% 1971 75,2% 6,7% 3, 0% I978 79,2% 7,6% 2,8%
Влажната коагулација на протеин од компир од 1978 година се произведува со коагулација под притисок на топлина и се зачувува со длабоко замрзнување сè додека не се користи:
Содржина на суров протеин Содржина на вода Содржина на сурова пепел (N x 6,25)
Комерцијални препарати од различно потекло.
pH опсег 5,9 -8,0: Зелен фосфат пуфер со јонска јачина I = 0,2:
PH 9.2: универзален тампон според Теорел и Стенхуген;
PH 5, o: Бујдер ацетат пуфер, I = 0,2; pH 2,0 или 2,5: Тампон на натриум Натриум/хлороводородна киселина.
3 методи 3.1 Експериментална поставеност за ензимска хидролиза
Ензимската деградација беше спроведена во групни експерименти или со употреба на пуфери или според техниката на pH-стати. Методологија при употреба на тампонски раствори: Измерете 5,0 g подлога во колба со заоблено дно од 250 ml со NS 29/32, покријте ја со 80 g тампон, откако ќе додадете магнетски мешалка, затворете ја колбата, ставете ја во термостатска водена бања од 1 ", Под кој има магнетски мешач, вметнете ја и загревајте ја на посакуваната температура во рок од 15 мин. Измерете ја потребната количина на ензим во брод со мерење, исплакнете го ензимот во колба со тркалезно дно користејќи ги преостанатите 15 g тампонски раствор и затворете ја колбата По одреденото време на хидролиза, запрете ја реакцијата со ставање на колбата во врела водена бања 20 минути. Изладете ја колбата на собна температура под млаз вода. Изведете празен тест за секоја серија без додавање на ензими. Експериментите на сериите со помош на техниката pH-Stat беа во суштина извршени како во [ 7] како што е опишано .
3.2 Следење на деградација на протеините
За оваа цел, главно се определува растворлива протеинска фракција (растворлив протеин базиран на вкупен суров протеин) и, во случај на pH статистичка техника, се пресметува степенот на хидролиза од потрошувачката на каустика [8], но ова се однесува само на pH вредностите Можно е 6,5.
* Дел 1 Старке 32 (1980), 231
Скроб/Старке 32 (1980) број 11, стр. 369-375 aj Verlag Chemie, GmbH, D-6940 Weinheim 1980 0038-9056/80/1111-0369 02,50 $/0
Содржината на растворлив протеин е утврдена со следниов метод: Центрифугирајте ја протеинската суспензија на околу 40 000 g и 2-4 ° C за 30 минути. Во про clearирен супернатантен материјал, утврдете ја содржината на азот според Кјелдал на вообичаен начин и помножете со 6,25 за да добиете растворлив Конвертирајте сурови протеини.
3.3 Производство на овошна вода од компир (FW) во лабораториска скала Измијте 250 - 500 g нелупен компир со вода од чешма, а потоа исплакнете со дестилирана вода, исушете ја со филтер-хартија и измерете ја до 0,1 g. Наполнете сад за заптивање собирачки колектор (на пр. Цилиндрично стакло од 500 ml со завртка) за FW со 0,17% K2S20, засновано на количината на компири. Преработувајте компири што е можно побрзо во соковник од типот Progress 609K22. Извадете ја пената и сите делови од лушпата од површината на FW со помош на лажица или извадете ја со стаклена цевка користејќи пумпа за млаз вода. Центрифугирајте го FW на околу 40 000 g и 2-4 ° C, истурете го супернатантот и измерете го волуменот. Приносот на светло жолт FW обично е до 50% од количината на употребениот компир.
3.4 Полу-квантитативно тестирање за инхибиторни ефекти со помош на дифузија на гел од агар Комерцијално достапен сет примероци беше искористен за производство на агар гел-плочи со казеин како подлога и pH 7,2 [9]. Плочи со различни вредности на pH беа подготвени според Ловенштајн и Ингилд [нè]. Утврдувањето беше спроведено како кај Такахаши и сор. [Јас јас]. Во овој случај, течноста или суспензијата што треба да се испита е додадена во различни количини во стандардна серија со, по правило, четири различни, соодветни концентрации на ензими. Полу-квантитативната проценка беше извршена на необоени плочи со мерење на разликите во соодветните дијаметри на радијалните зони со и без додавање на инхибитори .
4 Резултати и дискусија Табелата 1 ги сумира можните влијателни фактори во ензимската хидролиза на протеинот од компир. Нашите експерименти беа засновани на дефинирани производи од компир протеин (видете материјал), така што суровината-
Табела 1. Можни влијанија во ензимската хидролиза на протеинот од компир.
Разновидност на компири Квалитет на клубени Услови на коагулација Чистота на коагулацијата Услови на сушење Содржина на инхибитор Предтретман на подлогата Подготовка на ензим Однос на ензим/подлога Концентрација на супстрат pH вредност Високо јонска температура Време на реакција Инхибиција на бстрат Инхибиција на производот
и зависни од процеси инфлуентни променливи, секоја може да се претпостави дека се постојани.
4.1 Споредба на различни ентимерни препарати
4.1. Сув производ на протеини од компир како супстрат Ензимите наведени во Табела 2 се користеа на оптимална температура и pH вредност определена од производителот, додека односот Е/С, концентрацијата на подлогата и времето на хидролиза се одржуваа константни. Сув производ на протеини од компир 1974 година служеше како тест супстрат и казеин за споредба. Од резултатите во Табела 2 може да се види дека со сите ензими во компир протеините, може да се постигне пониска, а во повеќето случаи дури и значително пониска деградација отколку кај казеинот. Причината за ова дојде меѓу другото. недостаток на можности за напад на ензимите како резултат на структурата на компирниот протеин и/или присуството или појавата на супстанции со инхибиторен ефект, што беше дополнително истражено (види Делови 4.2.2 и 4.3). Како резултат на различните активности на употребените ензими, резултатите дадени во Табела 2 - за разлика од вредностите во Табела 3 - не дозволуваат споредби во однос на ефективноста на ензимските препарати.
Табела 2. Ензимска деградација на сувиот производ на компир протеин 1974 и казеин со помош на разни протеази со употреба на тампонски раствори (концентрација на подлогата 5%; Е/С 0,02; време на хидролиза 3 ч).
pH вредност Содржина на протеини во Терн (X) температура компир казеин
Неутрална протеаза од Бак. субтилис Карика папаја протеаза Неутрална протеаза од Бак. suhtilis алкална протеаза од Бак. лихенијормис неутрална протеаза од Бак. субтилис Процеза на габични киселини од трипсин од A s p. Саитои Пепсин Мешавина на ендо- и егзопептидази од A s p. oryzae алкална протеаза од Бак. субтилис Протеаза од зеленчук Термофилна протеаза од Бак. термопротеолитикус Рокко, прочистена Неутрална протеаза од Бар.субтилис Неутрална габична протеаза од Aspergillus sp. Термофилна протеаза од Бак. термопрореолитикус Рокко