Ин витро тестови за дејството на фуразолидон, хостациклин, хлорамфеникол и
Документи
Од Федералниот истражувачки институт за размножување на мали животни, Селе
Ин витро експерименти за ефектите на фуразолидон, клиника за домаќинство, левомицетин
и дихидрострептомицин на Salmonella pullorum
Во 1954 година ЦОСГКОВЕ; GRUMBLES и персонал; ХАРВУД и СТУНЗ, како и СМИТТ укажаа на соодветноста на фуразолидонот за третман на инфекција со салмонела пулорнур кај живината. СМИТ (1954б), ВИЛСОН (1956), ТИТКЕМЕЈЕР и СМИТТЛ (1957), БЕЛДИНЦ и МАЈЕР (1958) во компаративните студии откриле дека фуразолидонот е супериорен во однос на сулфонамидите и антибиотските агенси кои претходно биле користени во однос на ефектот на третманот. Но, дури и со овој препарат не е можно целосно да се исклучат латентни носители на микроб меѓу клинички здравите животни, како што покажуваат бројни студии: [SMITH (1954b и 1955); ГОРДОН и ТАКЕР (1955); ХАРБОР И ПРОДАВАЧ (1955); LUCAS (1955); ВИЛСОН (1955 и 1956); GYLSTORPF and DORN (1956); ХАРБОР (1956); SMYSER и VAN ROCKEL (1957); АЈАКАРДИ (1958); БЕЛДИНГ и МАЈЕР (1958); Хендерсон и сор. (1958) л.
Овие изјави се базираат првенствено на експерименти врз животни. Ин витро експерименти за дејството на фуразолидон врз солен раствор. pullorum микробите биле користени само во ограничена мерка. Засегнатите автори првенствено се занимаваа со утврдување на дозите потребни за ветувачка терапија [YUKCHENCO and YURCHENCO (1953); СМИТ (1954 а и б); РОGЕРИ и соработници (1956) л. Покрај тоа, следниве прашања се од интерес, чие појаснување може да помогне да се процени соодветноста на препаратот за терапија:
Јас Дали може да се очекуваат отпорни бактериски соеви во пракса? 2. Неопходно е да се земе предвид во терапевтската доза
Откријте ги разликите во чувствителноста помеѓу различните соеви?
3. Дали препаратот има бактериостатско или бактерицидно дејство?
Ефект на фуразолидон, хостациклин, итн. Врз Salmonella pullorum 95
4. До кој степен може да се предизвика отпорност на лекови кај микробите од пулорум и дали тоа е тогаш реверзибилно или трајно?
5. Со долгорочни, ниски дози на препаратот, постои стимулација на раст на микробите?
6. Дали микробите кои станале отпорни ја губат чувствителноста на другите препарати (вкрстена отпорност)? Пообемни ин витро експерименти треба да дадат одговор на ова
Прашања се пронајдени. Покрај фуразолидон, во нашите истражувања вклучивме и претставник на групата тетрациклин (хостациклин), како и хлорамфеникол и стрептомицин.
Вкупно 24 соеви за собирање, кои биле изолирани од поднесоци од различно потекло помеѓу 1955 и 1957 година и идентификувани како Salmonella pullorurn, биле користени за тестовите. Видот треба да се сфати како генетски униформни микроби што се појавија од индивидуално складирана колонија (за единечни соеви претпоставивме две одделни колонии, кои потоа се означени како а и б).
Сите експерименти во кои требаше да се утврдат ефективните концентрации на препаратот беа извршени со помош на разредување на цевката, што го применивме со моќност од два. Дадените вредности се однесуваат на 1 ml и се засноваат на следниве дози, кои никогаш не биле користени постари од 24 часа: 1. Фуразолидон 0,01 g со 4 ml диметилформамид ') како растворувач
(Furoxon Boehringer, Mannheim) во 96 ml хранлив раствор = 100 ml 2. Тетрациклин 0, масло g
(Хостациклин Хоехст) во 100 ml хранлив раствор = 100 илml 3. Хлорамфеникол О, ОИ g
(Boehringer, Mannheim) во 100 ml хранлив раствор = 100 μg/ml 4. Дихидрострептомицин сулфат 0,1 g
(Баер, Леверкузен) во 100 ml хранлив раствор = 1000 y/ml Користениот хранлив раствор се состоеше од:
1,8 g Витам Бакт. 1,0 g декстроза 0,5 g пептон 0,3 g NaCl O, 2 g сек. Натриум фосфат 0,1 ml бромотимол сина (1,6% алкохол.)
како индикатор за боја во 100 ml дестилирана вода. Прилагодено на pH 7,2 со NaOH.
Сеидбата на микробите во секоја цевка се изврши подеднакво со пад од пипета од 1 ml од 6-часовни култури на супа што беа инокулирани со супстанца. Растот на микробите или инхибицијата на микробите беа избришани од промената на бојата по 24 часа пилинг. Разредувањето на кое не се случи промена на бојата во трите паралелни редови за разредување се сметаше како вредност на инхибиција.
Од сите разредувања, беа направени брисеви на ендо и агарна почва со цел да се провери чистотата на културите еднаш и за
I) Диметилформамид има инхибирачки ефект врз растот на бактериите до разредување од 1: 100. Во сегашниот аранжман за тестирање, оваа концентрација паѓа под 2-3 (0,5 O/o диметилформамид).
другите да можат да одлучат дали и до која концентрација на препаратот имало бактерицидно или само бактериостатско дејство.
Три соеви (бр. 11, 12 и ново изолираниот вид 99) беа искористени за да предизвикаат отпор. Бактериите беа одгледувани во концентрацијата на препаратот што само дозволи да се размножат микробите и во повисоките концентрации. Ако микробите растеле добро за време на 24-часовните пасажи, соодветно помалите разредувања биле користени за понатамошно размножување. За овие експерименти, на фуразолидон му беше дозволено да се раствори само во 0,4 ml диметилформамид. Нецелосно решение на препаратот мора да биде прифатено (види F u h o t e e 1).
Контролите за раст на провокациските пасуси, поставени со бактериите кои станаа отпорни, покажаа дали се јавува навика во смисла на стимулација на раст.
По 30 провокативни пасажи (дихидрострептомицин 8 пасуси), микробите се хранат во едноставен хранлив раствор на секои 24 часа за 30 пасуси повторно и нивната чувствителност на препаратот се тестирала од време на време во тестот за разредување на цевките.
Микробите кои станаа нечувствителни на еден препарат беа тестирани за вкрстена отпорност со другите препарати.
Табела 1 ги прикажува инхибиторните концентрации на фуразолидон, хостациклин, хлорамфеникол и дихидрострептомицин утврдени ин витро за 24 тестиран лосос. индицирани соеви на пулорна. Во табелата се дадени и концентрациите на кои препаратите имале бактерицидно дејство.
Првенствено отпорни соеви на Салм. pullorum не можеше да се најде во никој случај. Од друга страна, кај хостациклин, хлорамфеникол и стрептомицин, откриени се разлики во чувствителноста помеѓу индивидуалните соеви, трите степени на разредување и со фуразолидон четири степени на разредување, се сметаат за недоволни. Изразено во единици за тежина на мл хранлив медиум, чувствителноста на фуразолидон се движеше помеѓу 6,25 г и 0,39 г; со хостациклин и хлорамфеникол помеѓу 0,78 y и 0,095 y и со дихидрострептомицин помеѓу 250 y и 3 1,25 y.
Хостациклин имаше најдобри инхибиторни вредности - тесно следен од левомицетин. Фуразолидон мораше да се дозира во просек скоро десет пати, а дихидрострептомицин 300 пати поголем за да се постигне истиот инхибиторен ефект in vitro. Но, дури и дозата на хостациклин од 100 илмл (2 4 = најголема концентрација на тест) резултираше само со бактериостаза; бидејќи бактериите способни за репродукција лесно може да се детектираат од истенчувањето, во кое не е забележан раст на микроб со промена на бојата. Во случај на хлорамфеникол, 5 беше 0 y и 2 5;
/ г за да се утврди бактерицидно дејство. Фуразолидон и стрептомицин веќе биле бактерицидни (фуразолидон 12,5 7; дихидрострептомицин 250 7) кога концентрацијата била зголемена двапати или четири пати, измерена според дозите потребни за инхибиција на микробите. Широкиот опсег помеѓу инхибиторни концентрации и концентрации со бактерицидни својства во случај на хлорамфеникол и особено на хостациклин веќе беше видлив во проценката на серијата разредување со повеќе или помалку течечки транзиции во промената на бојата, додека индикацијата на бојата за дихидрострептомицин и Фуразолидон остро нацртан.
Изложеност на фуразолидон, хостациклин, итн. 3uf Salmonella pullorum 97
Т а б е л е И К е м м е е т т и н д К о н з е н т р а т и о н м и т б а к т е р и з и д е р В и р к у н г в о н Ф у р а з о л и д о н, Х о с т а ц и н и к -
s t r e p t o m y c i n g e g e n i i b e r 2 4 S a l m. p u l l o r u m - S t a r n m e n
Фуразолидон хостациклин хлор - дихидро - амфеникол стрептомицин л) вирус Ваксифис - восок - предупредувачки восок-
инхибираат инхибираат инхибираат hemrng. пресврт- бактерициден пресврт- бактерициден тум- бактерицид тум- бактеризи,