Медицински производи направени од растителни екстракти како инхибитори на липаза - SCHREZENMEIER JUERGEN
1. Употреба на следниве супстанции, екстракти од супстанции или есенции на супстанции како индивидуални компоненти или како мешавина за производство на орално администриран лек кој делува како инхибитор на липаза:
Кардамон и/или
Марјоран и/или
Мајчина душица и/или
Чили (Capsicum frutescens) и/или
Вечерна јаглика и/или
Лисја од оригано (ориганум вугаре) и/или
Лисја од камилица (Chamomilla recutica) и/или
Оревче (Myristica fragrans) и/или
Сос од јаболка (мана) и/или
Микроб од жито и/или
Бадем и/или
Лешник и/или
Орев и/или
Семе од тиква и/или
Cuphea wrightii и/или
Вечерна јаглика и/или
Масло од лен (Linum usitatissimum) и/или
голема чадора (Arctium lappa L) и/или
Лен и/или
Микроби од Helianthus annuus (сончоглед) и/или
Невен (Calendula officinalis) и/или
Echinops banaticus и/или
Mallotus philippinensis и/или
Семе од репка и/или
Сусам и/или
црна ким и/или
Cynoglossum officinale и/или
Лапахотеа и/или
Арктостафилос ува-урси и/или
Камен цвет (Флор де Пиедра) и/или
Прополис и/или
Примула Верис и/или
Магнолија официналис и/или
Целер (Apium graveolens)
2. Употреба на следниве супстанции, екстракти од супстанции или есенции на супстанции како одделни компоненти или мешавини
Кардамон и/или
Марјоран и/или
Мајчина душица и/или
Чили (Capsicum frutescens) и/или
Вечерна јаглика и/или
Лисја од оригано (ориганум вугаре) и/или
Лисја од камилица (Chamomilla recutica) и/или
Оревче (Myristica fragrans) и/или
Сос од јаболка (мана) и/или
Микроб од жито и/или
Бадем и/или
Лешник и/или
Орев и/или
Семе од тиква и/или
Cuphea wrightii и/или
Вечерна јаглика и/или
Масло од лен (Linum usitatissimum) и/или
голема чадора (Arctium lappa L) и/или
Лен и/или
Микроби од Helianthus annuus (сончоглед) и/или
Невен (Calendula officinalis) и/или
Echinops banaticus и/или
Mallotus philippinensis и/или
Семе од репка и/или
Сусам и/или
црна ким и/или
Cynoglossum officinale и/или
Лапахотеа и/или
Арктостафилос ува-урси и/или
Камен цвет (Флор де Пиедра) и/или
Прополис и/или
Примула Верис и/или
Магнолија официналис и/или
Целер (Apium graveolens)
како инхибитори на липазата.
Ова може да се постигне систематски со активни супстанции кои се апсорбираат сами или се инактивираат за време на варењето и со тоа се отстрануваат од тежината на реакцијата со компликацијата на мастите липаза-колипаза.
Администрацијата на инхибитори на липаза се смета за корисен лек за пациенти со симптоми на метаболички синдром. Покрај тоа, растителен екстракт-инхибитор на липаза или компоненти изолирани од нив може да се користат како адитиви во храната.
Употребата на растителни екстракти како можни инхибитори на липазата во дигестивниот тракт е именувана од неколку патенти. Ова се јапонски апликации со следниве броеви: ЈП 2003 026 585, ЈП 2002 275 077, ЈП 2002 047 194 .
Позитивните ефекти на растителните екстракти врз липидниот профил после јадење се опишани во неколку публикации, имено следниве супстанции како што се Zylokaria Paliurus, семки од грозје, жалфија, Cassia mimosoides, L. var. Nomame Makine и Alpinia officinarum.
Покрај тоа, пронајдокот си постави задача да определи понатамошни растенија што можат да се користат како инхибитори на липазата.
За да се реши овој проблем, се споменуваат екстракти или есенции од следниве супстанции и нивните мешавини.
Кардамон
риган
мајчина душица
Чили (Capsicum frutescens)
Вечерна јаглика
Лисја од оригано (ориганум вугаре)
Лисја од камилица (Chamomilla recutica)
Оревче (Myristica fragrans)
Сос од јаболка
Микроб од жито
бадем
лешник
орев
Семе од тиква
Cuphea wrightii (д)
Вечерна јаглика
Масло од лен (Linum usitatissimum)
голема чадора (Arctium lappa L) (д)
Лен (д)
Микроби од Helianthus annuus (сончоглед) (д)
Невен (Calendula officinalis) (д, ч)
Echinops banaticus
Mallotus philippinensis (д)
Семе од репка, (д)
Сусам (и)
црна ким (именка)
Cynoglossum officinale
Лапахотеа (д)
Арктостафилос ува-урси
Камен цвет (flor de piedra)
Прополис
Примула Верис
Магнолија официналис
Целер (Apium graveolens)
Опис на подготовката на екстрактите а) екстракти од СО 2:
Екстракција на висок притисок со суперкритичен јаглерод диоксид. Не содржи вода, шеќер или протеини.
Кардамон:
- Дел од растението што се користи: семе со капсули од Elettaria cardamomum.
- Суровината е добиена од Гватемала.
- Конзистентност на екстракт: мрсна течност
- Екстрактот содржи 72% есенцијални масла
- Други компоненти:
α-пинен, β-пинен, β-мирцен, 1,8 цинеол, линалол, α-терпинеол, линалил ацетат, терпинилацетат
- Дел од користеното растение: Лисја од оригано мајорана
- Конзистентност на екстракт: мрсна течност
- Екстрактот содржи 80% есенцијални масла
- Други компоненти:
Сабинен, цис и транс сабинехидрат, Терпинен-4-ол, Сабиненхидратцетат
Дел од растението што се користи: лисја на тимусот вулгарис. Суровината е добиена од Германија. За повеќе информации, видете погоре Кардамон.
Супстанциите што ги инхибираат липазите во растителните екстракти сè уште не се идентификувани.
Опис на подготовката и постапката за утврдување на ензимските активности. Подготовка на растворот за тестирање
За да се подготви испитниот раствор од извлечен прав и течен материјал, 200 mg од извлечениот материјал се раствораат во 1 ml соодветен растворувач и енергично се промешува. По центрифугирање на 3400 вртежи 5 минути, добиената течна компонента се користи како тест раствор. За да се прилагоди односот помеѓу концентрацијата на цврстите состојки и ензимската маса во последниот експеримент, тест-растворот се разреди 1: 200 со цел да се одреди алкалната фосфатаза.
За да се подготви тест растворот од екстракти на CO 2 и олеоресини, 100 μl екстракт од мрсна течност се раствораат во 900 μl на соодветен ензимски пуфер и се третираат со ултразвук на 100 вати 5 минути.
Панкреатична липаза (панкреасна липаза)
Извршени се две одредувања на липаза за да се утврди активноста на липазата на панкреасот in vitro:
- 1. Анализата за утврдување на активност на липаза се состои од
- 200 μl од 50 mM/L тампон BICIN (pH 8,0) кој содржи 1% арапска техничка гума за џвакање.
- 50 μl раствор на растителен екстракт и
- 25 μl раствор на панкреатична липаза од 0,35 mM/L
Оваа мешавина се инкубираше 20 минути на 37 °.
Конечното мерење на активноста на липазата во панкреасот се изведува во автоанализатор за клиничка хемија (Конелаб, Коне) со употреба на тест за колориметар на липаза со дијацилглицерол со метилресоруфин во трета позиција како супстрат и колипаза и жолчни соли како основни ко-фактори. Овој процес е специфичен за пранкреатичната липаза и се заснова на ензимите кои расцепуваат метилресоруфин од подлогата.
Следната шема на пипетирање е избрана за да се утврди активноста на липазата на панкреасот во автоанализаторот:
- 1. 60 μl реагенс 1: колипаза и холат
- 2. 2 μl раствор за испитување + 10 μl раствор за миење
- 3. Инкубација од 180 секунди
- 4. 40 μl реагенс 2: колориметриски супстрат и холат
- 5. Инкубација 120 секунди
Активноста на липазата беше утврдена врз основа на 12 мерни точки по 83 секунди. Метил ресоруфинот се мери фотометриски на 75 нанометри.
- 2. Инхибицијата на липазата под влијание на растителни екстракти е утврдена со втор метод на мерење на активност на липаза, во кој се мери ослободувањето на слободни масни киселини при хидролиза од триолеин од страна на ензимот.
Подготвен раствор за употреба (реагенс R1) се користи за подготовка на смесата за инкубација. R1 се состои од:
26 mmol/L Tris пуфер, pH 9,2
19 mmol/L натриум деоксихолат
0,1 mmol/L калциум хлорид
0,3 mmol/L триолеин
300 KU/L колипаза
Мешавината за инкубација е составена на следниов начин:
50 μL 26 mmol/L Tris пуфер, pH 9,2
50 μL 9,7 mmol/L триолеинска емулзија во R1
50 μL 0,134 mol/L панкреасна липаза во 26 mmol/L Tris пуфер pH 9,2
50 μL раствор за тестирање
1% метил целулоза во 26 mmol/L Tris пуфер (pH 9,2) беше искористен во истрагата за екстрактите од CO 2.
По време на инкубација од 30 минути на 37 ° во водена бања, реакцијата беше запрена со додавање на 3 ml мешавина од хлороформ-хептан-метанол (50: 49: 1). Ослободените слободни масни киселини беа извлечени од реакционата смеса со енергично мешање 10 минути. По центрифугирање (3400 вртежи, 10 минути) се добива остаток од 2 ml од фазата на хлороформ и 1 ml од бакарен реагенс (94 ml чиста вода, 6 ml 1 N NaOH, 6,45 mmol/L на Cu (NO 3) 2, Се додава 0,1 mol/L триетаноламин, 33% (w/v) NaCl). Оваа смеса енергично се мешаше 10 минути и се центрифугираше на 3400 вртежи 10 минути. Од суперинатан течност е земена 1 ml и се додаваат 1 ml хлороформ на 0,1% батокупроин и 0,05 (w/v) 3-терц-бутил-4-хидроксианизол. Комплексот на масна киселина-бакар-батокупроин конечно се одредува фотометриски на 480 nm во стандарден фотометар.
Со цел да се осигура дека падот на активноста на липазата не се должи на неспецифичен ензимски инхибитор или денатурација на ензимскиот комплекс, исто така, се утврди и активноста на α-амилаза и алкална фосфатаза. Инхибицијата на α-амилаза може да има ефект на намалување на нивото на шеќер во крвта после јадење и се смета за дополнителен позитивен ефект кај пациенти со дијабетес.
Мерењата на активноста на амилазата под влијание на растителни екстракти се извршени на следниов начин:
Мешавината на инкубација за одредување на активноста на амилазата се состои од вкупно 250 μL:
- - 200 μL 50 mM/L пуфер MOPSO (pH 8,0) со 1% арабиум на гума
- - 25 μL раствор на растителен екстракт и
- - 25 μL раствор на 0,35 mM/L α-амилаза
Оваа мешавина се инкубираше 20 минути на 38 ° С. Конечното мерење на активноста на панкреасната липаза се врши во авто-анализатор за хемиска хемија (Конелаб, Коне).
Принцип на хемиска реакција:
- 1. Етилен-р-нитрофенол- (гликоза) 7 → етилен- (гликоза) 3-4 + ρ-нитрофенол- (гликоза) 2-4
- 2. остатоци од ρ-нитрофенол (гликоза) ρ-нитрофенол (λ = 405 nm) + гликоза
Постапката за пипета во авто-анализаторот за утврдување на активностите на α-амилаза се спроведе на следниов начин:
- 1. 120 μL реагенс: супстрат + α-глукозидаза
- 2. 300 секунди инкубација
- 3. 3 μL раствор за тест
- 4. инкубација од 180 секунди
Активноста на α-амилаза се определува со мерење на 5 точки за 120 секунди.
Мерењето на активноста на алкалната фосфатаза под влијание на растителни екстракти беше спроведено на следниов начин:
Инкубационата мешавина за одредување на активноста на липазата се состоеше од
- - Содржи 200 μL од 50 mM/L HEDTA пуфер (pH 8,0),
- - 25 μL раствор за испитување на растителен екстракт и
- - 25 μL од 0,014 mM/L раствор на алкална фосфатаза
Смесата се инкубираше 20 минути на 22 ° C.
Конечното мерење на активноста на липазата на панкреасот е извршено во автоанализатор за клиничка хемија (Конелаб, Коне).
Равенка на реакција
- 2-амино-2-метил-1-пропанол + 4-нитрофенил фосфат естер → (2-амино-2-метил-1-пропаноö) фосфат + 4-нитрофеноксид (λ = 409 nm)
Постапката со пипета во авто-анализаторот за утврдување на активноста на алкална фосфатаза беше како што следува:
- 1. 150 μL реагенс
- 2. 300 сек. Инкубација
- 3. 3μL раствор за тест
- 4. Инкубација за 120 сек
Активноста на алкална фосфатаза е утврдена со употреба на 5 мерни точки за 22 секунди.
Резултати% ензимска инхибиција во ензимски тестови: