Намален интрацелуларен глутатион (GSH) - Синево
Оваа анализа се изведува во одредени центри на Синево, според следниве спецификации/услови:
Генерални информации
Глутатион е трипептид составен од глутаминска киселина, глицин и цистеин. Тој е најзастапен интрацелуларен тиол со мала молекуларна тежина, 85-90% е присутен во цитозолот, а остатокот во разни органи: митохондрии, ендоплазматски мрежи, пероксизоми, нуклеарна матрица.
Во клетката глутатион постои главно (> 98%) во намалена тиолска форма (GSH), но поради остатоци од цистеин кои можат лесно да се оксидираат неензиматски од разни електрофилни супстанции (слободни радикали, реактивни видови кислород и азот) присутен во оксидирана форма како глутатион дисулфит (GSSG). После синтезата, таа се дистрибуира во интрацелуларните оддели и во вонклеточниот простор за употреба од други клетки и ткива. Односот GSH/GSSG се користи како индикатор за статусот на клеточен редокс и има вредност на физиолошката состојба> 9. Со исклучок на жолчните киселини, кои можат да содржат до 10 mmol/L GSH, екстрацелуларните концентрации на GSH се релативно ниски (2-20 mol/L во плазмата) 1; 2 .
GSH се синтетизира во сите еукариотски клетки, но интрацелуларната синтеза и прометот на GSH се разликуваат помеѓу различните типови на клетки и ткивата (најголемите концентрации се наоѓаат во црниот дроб, еритроцитите и леукоцитите). Синтезата се редовно катализира од два цитозолни ензими: γ-глутамил-цистеин синтаза (GCS) и глутатион-синтетаза, црниот дроб е главниот производител и извозник на GSH. При првата реакција, γ-карбоксилната група глутамат реагира со амино групата цистеин и формира пептидна врска, што го штити GSH од хидролиза на други интрацелуларни пептидази. Иако γ-глутамил-цистеин може исто така да биде подлога за γ-глутамицилцилотрансфераза, синтезата на GSH е фаворизирана кај животинските клетки со многу поголемиот афинитет на GSH синтетазата 1; 2 .
Во нормални услови, клеточното ниво на GSH е регулирано со два главни механизма: еден што ја контролира синтезата и друг што го контролира увозот од клетките. Но, врз концентрациите на GSH влијаат и агенси или состојби кои ја менуваат редокс состојбата и доведуваат до формирање на конјугати или комплекси на S-глутатион или кои ја нарушуваат дистрибуцијата на GSH во различни интрацелуларни органи. Покрај тоа, нивото на клеточен глутатион значително се намалува како одговор на неухранетост на протеините, оксидативен стрес, хормонални концентрации и разни патолошки или физиолошки состојби (бременост и вежбање).
Стапката на синтеза на GSH е во голема мера контролирана од степенот на изразување и каталитичката активност на ензимот γ-глутамил-цистеин синтетаза и мобилната достапност на цистеин. Оксидативен стрес, воспалителни цитокини, карцином, хемотерапија, јонизирачко зрачење, термички шок, инхибиција на активност на ГЦС, осиромашување на ГСХ, конјугација на ГСХ, простагландини А2, тешки метали, антиоксиданти и инсулин ја зголемуваат транскрипцијата или активност на γ-глутамил-цистеин-синтаза (ГЦ) -широка разновидност на клетки. Спротивно на тоа, недостаток на протеини, дексаметазон, еритропоетин, TNF-β, хипергликемија и GCS фосфорилација ја намалуваат транскрипцијата на GCS или активноста 1; 2 .
За разлика од синтезата, која се одвива интрацелуларно, деградацијата на глутатион се одвива исклучиво во вонклеточниот простор на површината на клетките кои го изразуваат ектоензимот γ-глутамил транспептидаза (γ-глутамил трансфераза или GGT). Изобилува во апикалната површина на епителија на жолчните канали и е единствениот ензим што може да започне катаболизам на GSH и молекули што содржат GSH (GSSG, конјугати на S-глутатион и комплекси на глутатион) во физиолошки услови. Кај возрасните, високо ниво на γ-глутамил трансфераза е исто така конститутивно изразено во бубрезите, цревата и епидидимисот 1 .
Глутатион е вклучен во многу метаболички процеси, ефикасно ги елиминира слободните радикали и другите реактивни видови кислород (хидроксилни радикали, липидни пероксиди, нитритни пероксиди и H2O2) директно и индиректно преку ензимски реакции. Како супстрат на глутатион пероксидаза го детоксифицира телото од вишок пероксиди во случај на оксидативен полнеж. Глутатион системот е „систем на фаќање“ за пероксиди во метаболизмот на водата и липидни пероксиди трајно формирани во клетката, метаболизирајќи ги со формирање на вода и кислород. Овозможува важна заштита на митохондријалната и клеточната мембрана од штетните ефекти на реактивните кислородни видови (оксидативен стрес), ја штити терцијарната структура на протеините и го активира транспортот на аминокиселините низ клеточната мембрана.
Глутатион е вклучен во претворање на оксидираната и неактивна форма на витамини Ц и Е во намалена форма 3 .
Реагира со разни електрофилни супстанции, физиолошки метаболити (естроген, меланин, простагландини и леукотриени) и ксенобиотици (бромобензен и ацетаминофен) и формира нетоксични соединенија.
GSH се формира со НЕ конјугат, S-нитрозо-глутатион, кој потоа се раствора со системот на тиоредоксин. И за НЕ и ГСХ се потребни за хепатално дејство на агенси што чувствуваат инсулин, што укажува на нивната суштинска улога во регулирањето на употребата на липиди, гликоза и аминокиселини на клеточно ниво. .
Зголемување на производството на НЕ со зголемување на активноста на НЕ синтазата резултира во инхибиција на ГЦС и осиромашување на ГСХ во макрофагите активирани со цитокин и неврони. Во овој поглед, глукозамин, таурин, полинезаситени масни киселини, фитоестрогени, полифеноли, каротеноиди и цинк, кои инхибираат НЕ синтеза, можат да спречат или да го ослабнат намалувањето на GSH во клетките. Спротивно на тоа, диетата богата со заситени масти, масни киселини со долг ланец, ЛДЛ, линолеинска киселина и железо, што ја подобрува активноста на НЕ синтезата, може да ја влоши загубата на ГСХ од клетките.
Покрај тоа, GSH е од суштинско значење за активирање на Т-лимфоцити и полиморфонуклеарни леукоцити, како и за производство на цитокини и, според тоа, ја води функцијата на леукоцитите со цел да се развие брза и ефективна имунолошка реакција. Покрај тоа, ин витро и ин виво студии покажуваат дека GSH ја инхибира инфекцијата со вирусот на грип.
Глутатион, исто така, игра важна улога во сперматогенезата и созревањето на спермата 2 .
Исто така, важноста на GSH во појавата на некои болести е веројатно најдобро илустрирана со мноштвото состојби забележани кај пациенти со вродени грешки во метаболизмот на GSH. Овие генетски грешки се релативно ретки, но кога ќе се појават резултатот може да биде драматичен, со појава на смрт во матката 1 .
Улогата на глутатион на клеточно ниво е сумирана во табелата подолу 2 .
Препораки за одредување на интрацелуларен глутатион - промени во GSH хомеостазата кај вирусни инфекции, синдром на стекната имунодефициенција, неоплазми, вчитување на ксенобиотик/тешки метали, артериосклероза (липидни пероксиди), некои автоимуни болести (СЛЕ, ревматоиден артритис) и невродегенеративни заболувања. Нормализацијата на глутатионското ниво 3 се покажа како корисна кај овие болести .
Обука на пациентот - по можност на празен стомак (на празен стомак) 3 .
Примерок собрани - крвта ќе дојде 3 .
Контејнер за берба - вакутаин кој содржи хепарин како антикоагуланс 3 .
Волумен на тест - 10 ml сер 3 .
Причини за одбивање на доказите - хемолизиран примерок 3 .
Стабилност на тестот - крвта мора да пристигне максимум 24 часа во лабораторијата каде што се прави тестот и во овој период се чува на собна температура. Ладењето на примерокот е контраиндицирано 3
Причини за одбивање на доказите - примероци кои го надминале опсегот на стабилност, ладилни или замрзнати примероци 3 .
Метод - проточна цитометрија - определување на глутатион во моноцити, Т-лимфоцити и НК-клетки; се користи нефлуоресцентно соединение GSH GreenTM кое станува интензивно флуоресцентно со реакција со интрацелуларен тиол 3 .
Референтни вредности
НК ЦД16/56 клетки:> 722 мфи;
mfi = просечен интензитет на флуоресценција 3 .
Интерпретација на резултатите
Важно е да се напомене дека промената на односот GSH/GSSG во оксидираниот статус активира неколку сигнални патишта, со што се намалува клеточната пролиферација и се зголемува апоптозата. Така, оксидативниот стрес игра клучна улога во патогенезата на многу болести, вклучувајќи рак, воспаление, квашиоркор, напади, Алцхајмерова болест, Паркинсонова болест, српеста клетка, заболување на црн дроб, цистична фиброза, ХИВ/СИДА, АМИ, мозочен удар и дијабетес. шеќер 2 .
Како што е прикажано погоре, одржувањето на соодветни нивоа на GSH, прометот и статусот на оксидација се важни за нормален развој на клеточните функции, а промените во овие процеси предизвикуваат разни патологии. Недостаток на GSH се манифестира со зголемена подложност на оксидативен стрес, а добиената штета се смета за клучен чекор во појавата и прогресијата на неколку болести. Спротивно на тоа, високи нивоа на GSH, зголемен антиоксидантен капацитет и отпорност на оксидативен стрес се забележуваат во многу видови туморски клетки 1 .
1. Назарено Балатори, Сузана М. Кранс, Силвија Нотенбом, Шуџи Ши, Ким Тиу и Кристин Л. Хамонд. Дисрегулација на глутатион и етиологија и прогресија на човечки болести. Во Biol Chem. 390 (3): 191-214, 2009 година.
2. Гујоао Ву, Јун-ongонг Фанг, Шенг Јанг, оана Р. Луптон и Ненси Д. Тарнер. Метаболизам на глутатион и неговите влијанија врз здравјето. Во J. Nutr. 134: 489–492, 2004 година.
3. Лабораторија во Синево. Специфични препораки за користената технологија за работа 2011 година. Ref Type: Каталог.