Ознака на протеини - биологија

Кога Ден на протеини, Афинитетна ознака или етиповна ознака. Ден За „обележување“, „ознака“ или „етикета“), различни, главно кратки, аминокиселински низи се користат во биохемијата за означување на протеини. Означените протеини припаѓаат на фузините протеини.

биологија

Апликации

Различните ознаки се различно добро прилагодени за различни намени. Тие се користат во текот на протеинскиот дизајн при производство на рекомбинантни протеини или нивно прочистување и откривање преку афинитетна хроматографија, анализи на пулдаун, вестерн бот, имунохистохемија, микроскопија на флуоресценција или живо снимање.

За да се генерира протеинска ознака, кодираната ДНК секвенца на протеинската ознака се вметнува во кодирачката ДНК секвенца на фузиониот протеин зад почетниот кодон или пред кодонот на стоп, додека се одржува рамката за читање. Ова создава N-терминал или C-терминален протеински ознака на протеинот за време на преводот.

Повремено, протеинот треба да се отстрани од протеинот по чистењето, на пр. B. може да се постигне со место на расцепување на протеаза или индуциран интеин. Пристапот базиран на протеолиза користи протеази со подолга секвенца за препознавање кои се сечат само на интерфејсот на протеинската ознака, на пр. Б. ТЕВ-Протеаза. [1] Интеините може да се активираат од тиоли или со намалување на pH вредноста. [2] [3] [4]

Некои ознаки имаат и други функции освен што врзуваат антитело или имуноконјугат, како што се:

  • Имуноафинитетно хроматографско прочистување (сите со соодветните антитела)
  • Откривање базирано на антитела (за сите, на пр. Со Western blot, имунохистохемија или имунофлуоресценција)
  • Афинитетна хроматографија заснована на афинитет кон друг партнер за врзување (на пример, ознака CaM, ознака CBP, ознака GST, ознака MBP)
  • Места за биотинилација за прочистување со стрептавидин (на пр. Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Комплексно формирање со двовалентни јони на никел и нитрилотриацетна киселина модифицирана и вкрстено поврзана агароза или декстран (на пр. His-Tag)
  • Флуоресценција (на пр. GFP или флеш-ознака)
  • Полесно раздвојување во HPLC како резултат на зголемениот поларитет (на пр. His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Цистеини како реактивни групи (на пр. Ознака GST, предвремена ознака, ознака на тиоредоксин)
  • Зголемување на растворливоста Тела за вклучување, со поголеми ознаки (на пр. ознака GST, ознака MBP)
  • Подобрете го преклопувањето на протеините Тела за вклучување или поради погрешно поврзани дисулфидни мостови (на пр. тиоредоксин ознака, поли (NANP) ознака)
  • реакции на индукција на врнежи [5] [6]