PDF QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA само за ин-витро дијагностицирање на комплексноста на CLIA висока - бесплатно

Краток опис

Преземете QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA за ин-витро дијагностика CLIA комплексност: висока.

quanta

Опис

QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA

Само за „Ин-витро дијагностика“ .КЛИКА комплексност: Висока

Наменета употреба QUANTA LiteTM F-Actin IgA е ензимски поврзана имуносорбентна анализа (ELISA) за полу-квантитативно откривање на IgA антитела против F-актин на мазни мускули во човечки серум. Кај пациенти со клинички откритија кои укажуваат на целијачна болест, присуството на анти-F-актински антитела од класа IgA се користи за да се помогне во проценката на веројатноста за значителна атрофија на ресички.

Принципот на тест, антиген F-актин прочистен со афинитетна хроматографија бил врзан за празнините на полистиренскиот микротитер плоча додека ја одржувал оригиналната конфигурација. Предвидените контроли и разредените серуми на пациенти се пипетираат во различни бунари. Постоечките антитела на Ф-актин се врзуваат за антигенот. Остатокот од примерокот/контролата се отстранува со миење. Ензимски означен анти-хуман IgA се пипетира во бунарите и се врзува за антителото на пациентот за време на втората инкубација. Откако ќе се отстрани преостанатиот конјугат во понатамошен чекор за перење, се додава хромоген супстрат. Интензитетот на добиената реакција на бојата се мери по запирање со фотометарот на плочата за микротитар. Квантитативната проценка се спроведува со споредување на вредностите на истребување на пациентите со вредноста на калибраторот.

Содржина на тест пакетот 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Микротитер ЕЛИСА плоча обложена со високо прочистен антиген F-актин (12-1 х 8 бунари), со држач за ленти во пакувања со фолија и десикант ЕЛИСА негативна контрола, 1 шише тампон со стабилизатор и човечки серум без човечки антитела против Ф-актин, претходно разреден подготвен за употреба, 1, 2 mL F-Actin IgA ELISA Ниско позитивен (калибратор), 1 шише тампон со стабилизатор и хуман серум со антитела против F-Actin, претходно разреден готов за употреба, 1,2 ml F-Actin IgA ELISA високо позитивно (позитивна контрола), 1 шише пуфер со стабилизатор и хуман серум со антитела против F-актин, претходно разреден готов за употреба, разредувач за примерок HRP од 1,2 mL, 1 шише - розова боја со Tris-пуфер солен раствор, Tween 20, протеински стабилизатори и конзерванси, 50 ml HRP концентрат за миење, 1 шише со 40x концентрат - Обоено црвено со пуфер солен раствор и Tween 20, 25 ml. За разредување, погледнете во соодветното поглавје во упатствата. 1

HRP IgA конјугат, (коза), анти-хуман IgA, 1 шише - жолто обоено со пуфер, протеински стабилизатори и конзерванси, 10 ml TMB хромоген, 1 шише со стабилизатори, 10 ml HRP раствор за стопирање, 0,344M сулфурна киселина, 1 шише - безбоен, 10 мл

Мерки на претпазливост 1. 2. 3. 4.

Чувајте ги сите реагенси во комплетот на 2-8 ° С. Не замрзнувајте. Реагенсите се стабилни до крајот на датумот на употреба според нив, ако се чуваат и ракуваат според упатствата. Вратете ги неискористените ленти за микробработ во оригиналното пакување, запечатете ги херметички и вратете ги во фрижидер. Разредениот пуфер за миење е стабилен една недела на 2-8 ° C.

Примероци Тестот треба да се изврши со примероци од серум. Додавањето азиди или други стабилизатори на примероците од серумот може негативно да влијае на резултатите. Примероците што се микробактериски контаминирани, хемолитични, липемични или инактивирани од топлина, не треба да се користат. По извлекувањето на крвта, серумот мора да се оддели од крвта. Документот NCCLS H18-A3 ги препорачува следниве услови за чување на примероците на пациентите: 1) Не чувајте примероци на собна температура подолго од 8 часа. 2) Ако тестот не може да се изврши во рок од 8 часа, чувајте ги примероците на ладно место на 2-8 ° С. 3) Ако тестот не може да се изврши во рок од 48 часа, примерокот мора да се замрзне на -20 ° C или понизок. Замрзнатите примероци мора да се тресат добро по одмрзнувањето и пред тестирањето

Постапка за испитување Материјал присутен во комплетот за тестирање 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Ф-Актин ЕЛИСА микротитерна плоча (12-1 х 8 бунари), со држач за ленти 1,2 мл предилутирана ЕЛИСА негативна контрола 1,2 мл предилутиран Ф-Актин ИгА ЕЛИСА ниска позитивна контрола 1,2 мл предилутирана Ф-актин IgA ЕЛИСА висока позитивна контрола 50 ml HRP разредувач на примерок 25 mL HRP концентрат за миење, 40 пати концентрат 10 mL HRP IgA конјугат (од коза), анти-хуман IgA 10 mL TMB Chromogen 10 mL HRP раствор за стопирање, 0,344M сулфурна киселина

Потребен дополнителен материјал Пипети за 5, 100, 200-300 и 500 μL совети за пипета за еднократна употреба Епандорф реакции шишиња за серумско разредување, 4 мл волумен на дестилирана или деионизирана вода 1 шишенце за разреден HRP концентрат за миење Читач за микротитер плочи со 450 nm филтер (и 620 nm за бихроматско мерење)

Метод на подготовка на тест 1. 2.

Донесете ги сите реагенси и примероци на собна температура (20-26oC) и измешајте ги темелно. Заменете ја целата содржина (25 mL) на концентратот за перење со 975 mL дестилирана вода. микс (разредување 1:40). Разредениот пуфер раствор е стабилен една недела на 2-8 ° С. Доколку не се користи целата плоча на микротитар одеднаш, може да се додаде 2 мл концентрат со 78 мл дестилирана вода за подготовка на 16 бунари. се мешаат. Разредете ги серумските примероци 1: 101 со мешање на 5 μL серум со 500 μL разредувач за примерок подготвен за употреба. Разредените примероци треба да се тестираат во рок од 8 часа. Не разредувајте ниска позитивна контрола на F-Actin IgA ELISA, висока позитивна контрола на F-Actin IgA ELISA и негативна контрола на ELISA. Секој тест бара два бунари за секоја од трите контроли и еден или два бунари за примерокот на пациентот (се препорачува сите примероци да бидат подготвени во дупликат додека не се постигне потребната прецизност и репродуктивност).

Ниско-позитивната контрола на F-Actin IgA ELISA, високата позитивна контрола на F-Actin IgA ELISA и негативната контрола на ELISA треба да се носат заедно со секое испитување, за да се осигура дека сите реагенси и испитното работење функционираат правилно. Бидејќи ниско-позитивната контрола на F-Actin IgA ELISA, високата позитивна контрола на F-Actin IgA ELISA и негативната контрола ELISA се предилутирани, не е потребен чекор за разредување на примерокот на пациентот за контролите. Дополнителни контроли за гарантирање на квалитетот може да се спроведат во согласност со упатствата на националното или третото

меѓународни регулаторни органи или органи за акредитација. Соодветни контроли може да се добијат од хуман серум и да се тестираат на 25 години

Негативно сомнително позитивно 1. 2. 3.

Позитивен резултат на анти-Ф-актин IgA кај пациенти со целијачна болест укажува на зголемена веројатност за сериозна атрофија на ресички. Негативен резултат укажува на отсуство на антитела или концентрации на F-актин IgA под границата на откривање на системот за тестирање. Предлагаме да се додаде следната белешка на лабораториските резултати: „Следниве резултати се добиени со INOVA QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA. Вредностите на F-актин IgA кои беа утврдени со употреба на системи за тестирање од други производители не можат да се менуваат. Нивото на пронајден титар на IgA не може да биде во корелација со титар на крајна точка. "

Ограничувања на постапката 1. 2. 3. 4.

Имунолошки комплекси или други агрегати на имуноглобулин во серумот на пациентот може да предизвикаат неспецифично врзување и лажно позитивни резултати. Не сите пациенти со целијакија се позитивни на антитела на Ф-актин IgA. Не сите SMA позитивни примероци имаат антитела на F-актин IgA. Откривањето на антитела на Ф-актин-ИгА кај пациенти со заболување на црниот дроб мора да се толкува со претпазливост, бидејќи присуството на антитела на Ф-актин-ИгГ во оваа група на болести често се поврзува со антитела на Ф-актин-ИгА, кои можеби не се поврзани со интестинална патологија. Антителата на Ф-актин IgA треба да се мерат само кај пациенти со целијачна болест како помошно средство за проценка на оштетувањето на цревата. Резултатите од овој тест треба да се користат заедно со клинички резултати и други серолошки тестови. Карактеристиките на изведбата за други примероци освен серумот не се утврдени. 4-ти

Податоци за перформанси Очекувани вредности Нормален опсег Панел од 500 примероци од очигледно здрави лица (250 мажи и 250 жени) беше тестиран со комплет QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Возраста беше помеѓу 18 и 80 години (просек = 41). Специфичноста на анализата беше 92,2% (461/500). Се покажа дека 3 од 39 примероци се позитивни на антитела tTG-IgA, така што овие може да бидат недијагностицирани пациенти со целијачна болест. Еден од овие три примероци исто така бил позитивен на ендомизиум и е практично сигурно дека е случај со целијакија. Преваленцата на целијачна болест кај нормалното население во САД се проценува дека е 1 од 133; доказ за недијагностицирани пациенти со целијачна болест во нормална група не е неочекуван

Клиничка чувствителност и специфичност Бидејќи QUANTA LiteTM F-Actin IgA анализата е наменета да се користи за проценка на веројатноста за оштетување на цревата кај пациенти со целијачна болест, чувствителноста и специфичноста беа утврдени врз основа на 445 примероци со резултати од биопсија. Од 445 примероци, 157 имале патологија тип 3 и 288 тип 0, 1 или 2. според Марш. 27 N = 445 марш изрез F-актин IgA единици M3a/b/c M0, M1, M2 вкупна количина Pos (> 24, 9 единици) 76 14 90 негативни (24,9 единици) 60 30 90 негативни (