Phospho-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4) зајак mAb

Western blot анализа на екстракти од HaCaT клетки, нетретирани (-) или третирани со hTGF-β3 # 8425 (+) во отсуство или присуство на TGFR инхибиторот SB 431542, со употреба на Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) зајак mAb (горен) или Smad2/3 (D7G7) XP ® зајак mAb # 8685 (долен).

Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) зајак mAb 8828

ser465467

Western blot анализа на екстракти од HaCaT клетки, нетретирани (-) или третирани со hTGF-β3 # 8425 (+) во отсуство или присуство на TGFR инхибиторот SB 431542, со употреба на Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) зајак mAb (горен) или Smad2/3 (D7G7) XP ® зајак mAb # 8685 (долен).

  • Ваш локален претставник
  • Вашите информации за локална набавка
  • Гарантирано антитело
  • Најчесто поставувани прашања
  • Техничка поддршка
  • Сертификат за анализа
  • Податоци за поддршка
  • Поврзани производи
  • Користење на производот
  • Протоколи
  • Позадина
  • Патеки и протеини
  • Цитати и прегледи

Податоци за поддршка

РЕАКТИВНОСТ H M R Mk
Осетливост Ендогени
MW (kDa) 52, 60
Извор/изотип Зајак IgG

Апликациски клуч:

  • В.-Западен филм
  • IP-Имуноцени
  • IHC-Имунохистохемија
  • Чип-Имуно-врнежи на хроматин
  • АКО-Имунофлуоресценција
  • Ф.-Цитометрија на проток
  • Е-П-ЕЛИСА пептиди

Клуч за вкрстена реакција на видовите:

  • Х.-Човечки
  • М.-Глушец
  • Р.-совети
  • Хм-хрчак
  • Мк-Мајмун
  • Среда-Визон
  • Ц.-Пилешко
  • Дм-D. меланогастер
  • X-Ксенопус
  • З.-Зебрафиш
  • Б.-Говеда
  • Дг-Куче
  • Стр-Прасе
  • Sc-S. cerevisiae
  • Це-C. елегантите
  • Г.-Коњ
  • Але-Сите видови се очекуваа
Smad2/3 (D7G7) XP® зајак mAb # 8685
Smad2/3 Антитело # 3102
Smad2 (D43B4) XP® зајак mAb # 5339
Smad2/3 Антитело # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) зајак mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) зајак mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) зајак mAb # 3108
Smad3 (C67H9) зајак mAb # 9523
Phospho-Smad1/5 (Ser463/465) (41D10) зајак mAb # 9516
Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) зајак mAb # 18338

Информации за употреба на производот

Складирање

Се испорачува во 10 mM натриум HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCl, 100 μg/ml BSA, 50% глицерол и помалку од 0,02% натриум азид. Да се ​​чува на -20 ° С. Немојте да го правите антителото во делови.

Протокол

Протокол за размачкување на Вестерн

За вестерни флеки, инкубирајте мембрана со разредено примарно антитело во 5% w/v BSA, 1X TBS, 0,1% Tween T 20 на 4 ° C со нежно тресење, преку ноќ.

ОДДЕЛЕНИЕ: Ве молиме, погледнете ја веб-страницата на производот за примарни антитела за препорачано разредување на антитела.

A. Решенија и реагенси

Од подготовка на примерок до откривање, реагенсите што ви се потребни за вашиот Western Blot сега се во еден пригоден комплет: # 12957 Комплет решенија за апликација Western Blotting

ОДДЕЛЕНИЕ: Подгответе раствори со деионизирана обратна осмоза (RODI) или вода со еквивалентно одделение.

Б. Размачкување на протеини

Општ протокол за подготовка на примерок.

  1. Третирајте ги клетките со додавање на свежи медиуми кои содржат регулатор за посакуваното време.
  2. Аспирираат медиуми од културите; измијте ги клетките со 1X PBS; аспирираат.
  3. Лизирајте ги клетките со додавање на 1X SDS-тампон за примерок (100 µl на бунар од 6-бунар плоча или 500 µl за плоча со дијаметар од 10 cm). Веднаш изгребете ги клетките од плочата и пренесете го екстрактот во цевка за микроцентрифуга. Продолжете на мраз.
  4. Сониктирајте 10-15 секунди за да ја завршите лизата на клетката и ДНК на смолкнување (да се намали вискозноста на примерокот).
  5. Загрејте примерок од 20 μl на 95-100 ° C за 5 мин; кул на мраз.
  6. Микроцентрифуга за 5 мин.

Вчитајте 20 μl на гелот SDS-PAGE (10 см x 10 см).

ОДДЕЛЕНИЕ: Се препорачува полнење на претходно обележани обележувачи на молекуларна тежина (# 13953, 5 μl/лента) за да се потврди електро-трансферот и биотинилираната протеинска скала (# 7727, 10 μl/лента) за да се утврдат молекуларните тежини.

  • Електро трансфер во нитроцелулозна мембрана (# 12369).

    • В. Блокирање на мембраната и инкубации на антитела

    ОДДЕЛЕНИЕ: Волуменот е за мембрана од 10 см х 10 см (100 см 2); за мембрани со различна големина, соодветно прилагодете ги волумените.

    I. Блокирање на мембраната

    1. (По избор) По трансферот, измијте ја мембраната на нитроцелулоза со 25 ml ТБС за 5 мин на собна температура.
    2. Инкубирајте ја мембраната во 25 ml блокирачки пуфер за 1 час на собна температура.
    3. Измијте три пати по 5 мин со 15 ml TBST.

    II. Примарна инкубација на антитела

    1. Инкубирајте мембрана и примарно антитело (при соодветно разредување и разредувач како што е препорачано на веб-страницата на производот) во 10 ml примарен пуфер за разредување на антитела со нежно возбудување преку ноќ на 4 ° C.
    2. Измијте три пати по 5 мин со 15 ml TBST.
    3. Инкубирајте ја мембраната со анти-зајак IgG, антитело поврзано со HRP (# 7074 на 1: 2000) и анти-биотин, антитело поврзано со HRP (# 7075 на 1: 1000-1: 3000) за откривање на биотинилирани протеински маркери во 10 ml блокирање на пуфер со нежна возбуда за 1 час на собна температура.
    4. Измијте три пати по 5 мин со 15 ml TBST.
    5. Продолжете со откривање (Дел Д).

    D. Откривање на протеини

    Упатства за употреба:

    1. Измијте го HRP-врзаниот мембрана (конјугат на антитела) три пати 5 минути во TBST.
    2. Подгответе 1X SignalFire ™ ECL реагенс (# 6883) со разредување на еден дел 2X реагенс А и еден дел 2X реагенс Б (на пример, за 10 ml, додадете 5 ml реагенс А и 5 ml реагенс Б). Измешајте добро.
    3. Инкубирајте ја подлогата со мембрана 1 минута, извадете го вишокот раствор (мембраната останува влажна), завиткајте ја во пластика и изложете ја на Х-зраци.

    * Избегнувајте повторна изложеност на кожа.

    објавено во јуни 2005 година

    ревидиран јуни 2020 година

    Специфичност/чувствителност

    Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb препознава ендогени нивоа на Smad2 протеин кога се фосфорилира во Ser465 и Ser467. Ова антитело, исто така, препознава ендогени нивоа на Smad3 протеин кога се фосфорилира Ser422 само или кај Ser423 и Ser425.

    Реактивност на видовите:

    Човек, глушец, стаорец, мајмун

    Извор/прочистување

    Моноклонално антитело се произведува со имунизација на животни со синтетички пептид што одговара на остатоци околу Ser465/467 од хуман Smad2 протеин.

    Позадина

    Членовите на семејството Смад на молекули на трансдукција на сигнали се компоненти на критичен интрацелуларен пат што пренесува TGF-β сигнали од клеточната површина во јадрото. Дефинирани се три посебни класи на Самади: Самда регулирани со рецептори (Р-Самади), кои вклучуваат Smad1, 2, 3, 5 и 8; заедничкиот медијатор Смад (ко-Смад), Смад4; и антагонистички или инхибиторни Smads (I-Smads), Smad6 и 7 (1-5). Активирани рецептори тип I се поврзуваат со специфични R-Smads и ги фосфорилираат на зачуван карбокси-терминален мотив SSXS. Фосфорилираниот R-Smad се дисоцира од рецепторот и формира хетеромерен комплекс со ко-Smad (Smad4), овозможувајќи преместување на комплексот до јадрото. Еднаш во јадрото, Smads може да насочи кон различни протеини кои врзуваат ДНК за да ги регулираат одговорите на транскрипција (6-8).

    Патеки и протеини

    Истражете ги патиштата + протеините поврзани со овој производ.