Појава и откривање на цитринин во храна од растително потекло - PDF бесплатно
Од Вајенстефан научен центар за исхрана, употреба на земјиште и животна средина на Техничкиот универзитет во Минхен, Чаир за хигиена на животни Унив.- Проф. Д-р х.ц. Јохан Бауер Поднесен од Институтот за хигиена и технологија на храна од животинско потекло Столче за хигиена и технологија на млеко Унив.- Проф. Ветеринарен факултет Ервин Мортлбауер на Универзитетот Лудвиг Максимилијанс во Минхен Појава и откривање на цитринин во храна од растително потекло Инаугуративна дисертација за добивање на ветеринарен докторат на ветеринарниот факултет на Универзитетот Лудвиг Максимилијанс во Минхен од Клаудија Барбара Шнајдер од Минхен Минхен 2007 година
Печатен со дозвола на Ветеринарниот факултет на Универзитетот Лудвиг Максимилијанс во Минхен Декан: Говорник: Ко-судија: Унив.-Проф. Д-р E. P. Märtlbauer Проф. Др. Märtlbauer јуни. Проф. Д-р. Ден на дипломирање на Дег: 9 февруари 2007 година
Мојот сопруг и моите две ќерки
Страна I Содржина Вовед. 1 Б литература. 3 1 Физички и хемиски својства на цитринин. 3 2 Печурки кои произведуваат цитринин. 5 3 Појава на цитринин. 7 4 Токсикокинетика. 9 5 Биолошки својства на цитринин. 10 5.1 Ефекти врз микроорганизмите. 10 5.2 Ефекти врз макроорганизмите и клеточните системи. 10 5.2.1 Цитотоксичност. 11 5.2.2 Нефротоксичност. 12 5.2.3 Генотоксичност. 15 5.2.4 канцерогеност. 16 5.2.5 Ембриотоксични и тератогени ефекти. 5.2.6 Комбинирани ефекти со други микотоксини. 17 5.3 Фармаколошки својства. 18 6 Метод за откривање на цитринин. 19 C Материјал и методи. 20 1 материјал. 20 1.1 Примерен материјал. 20 1.2 Потрошен материјал. 21 1.3 Потрошен материјал. 21 1.4 Хемикалии. 22 2 методи. 22 2.1 Развој на метод за одредување на цитринин во житарките. 23 2.1.1 Прелиминарни тестови за екстракција. 23 2.1.2 Прелиминарни тестови за прочистување. 24 2.1.2.1 Раздвојување течност-течност. 24 2.1.2.2 Прочистување со помош на екстракција на цврста фаза. 30 2.1.2.3 Прочистување со помош на имуноафинитетна хроматографија. 33 2.2 Развој на методи за одредување на цитринин во сокови од овошје и зеленчук. 34
Страна II 2.3 Ориентациони студии за стабилноста на цитрининот во овошните сокови 38 2.4 Определување на цитринин во азиската храна. 38 2.5 Валидација на методите. 39 2.6 Масено спектрометриско определување на цитринин. 41 2.6.1 LC-MS анализа на житни култури. 41 2.6.2 Анализа на LC-MS/MS на овошни и зеленчукови сокови, како и азиска храна. 42 2.7 Испитување на комерцијалните примероци. 43 резултати. 45 1 Откривање и утврдување на цитринин со употреба на ESI-MS или MS/MS. 45 2 прелиминарни експерименти за одредување на цитринин во органски матрици. 48 2.1 reитарки. 48 2.1.1 Екстракција. 48 2.1.2 Прочистување. 49 2.1.2.1 Раздвојување течност-течност. 49 2.1.2.2 Прочистување со помош на екстракција на цврста фаза. 52 2.1.2.3 Прочистување со употреба на колони за имуноафинитет. 54 2.2 Сокови од овошје и зеленчук. 55 2.2.1 Резултати од прелиминарните тестови. 55 2.2.2 Прелиминарни студии за стабилноста на цитрининот во сокот од јаболко. 57 2.3 Валидација на методот. 58 3 Појава на цитринин во храната. 61 3.1 Ceитарки. 61 3.2 Сокови од овошје и зеленчук. 62 3.3 азиска храна. 62 Е дискусија. 63 Ф резиме. 68 Г Резиме. 69 H библиографија. 70
Страна III Список на слики: Слика 1: Структурна формула на цитринин, А) форма на п-хинон и Б) о-кинонска форма. 3 Слика 2: LC-MS хроматограми (m/z 251) на стандарден раствор (5 ng/ml, погоре) и примерок од пченкарен оброк што содржи цитринин (4,4 μg/kg, подолу). 46 Слика 3: Масен спектар на цитринин (ESI +, конусен напон 30 V). 46 Слика 4: LC-MS/MS хроматограми (m/z 249/175) на стандарден раствор (1 ng/ml, погоре) и примерок од сок од јаболко вештачки контаминиран со цитринин (c: 0,1 ng/ml, подолу). 47 Слика 5: Однесување на деградација на цитринин во сок од јаболко на собна температура. 58
Страна VI Список на кратенки за вредноста на активноста на водата BEN Balcan Endemic Nehropathy BHK21 клетки Бебехамстер бубрежни клетки CHO-K1 клетки Кинески хрчак клетки на јајниците ДНК Деоксирибонуклеинска киселина (ДНС: Деоксарибононуклеинска киселина) ЕИмум имуноанализа на ензим (ензимска имуноанализа) g забрзување на земјата (1g = 9,81 m/s 2) g грама ХЛХ хлороводородна киселина Хела клетки Хелијани клетки на карцином на грлото на матката HEK293 клетки Хуман ембрионски бубрежни клетки HL-60 клетки Хумана промејелоцитна леукемија клетки HPLC течна хроматографија со HPRT хипоксантин-гванин-фосфорибозис-трансфераза ХТЦ-клетки Хепатома ткиво клетки Хепатома ткиво I IARC Меѓународна агенција за истражување на карцином im интрамускулна i.p. интраперитонеално i.v. интравенски кг килограм телесна тежина LC-MS течна хроматографија-масена спектрометрија LC-MS/MS течна хроматографија-тандемска масена спектрометрија ЛД леталдоза ДОО-PK1 бубрежна клеточна линија на МДБК клетки Мадин Дарби говеда клетки на бубрезите MeOH метанол мин минути мл милилитри милиметар MPN Микотоксична свинска нефропатија гласник рибонуклеинска киселина m/z маса/полнеж n број на NADH никотинамид аденин динуклеотид N 2 азот nm наномоларен нанограм nn несогледлив солен раствор на пуфер-фосфат-пуфер p.o. per os
Страница VII ppb делови на милијарди ppm делови на милиони RNS рибонуклеинска киселина r-rns рибозомална рибонуклеинска киселина RP обратна фаза RNS рибонуклеинска киселина с.в. поткожна анализа на SCE сестра хроматидна размена анализа TBME терциерно-бутил-метил-етер ТЛЦ тенок слој хроматографија UDS анализа непланирана синтеза на ДНК (синтеза на поправка на ДНК) анализа клетки V79 белодробни фибробласти на машки кинески хрчаци СЗО Светска здравствена организација микрограми микрометар микромоларни
Литература страница 6 Табела 2: Род Аспергилус Пеницилиум Монаска габи кои произведуваат цитринин (Кол и Кокс, 1981; Бетина, 1989, Рот и сор., 1990; Френк, 1992; Блан и др., 1995б, Ванг и др., 2005 Видови A. candidus A. flavipes A. niveus A. terreus P. canescens P. citroviridae P. citrinum P. claviforme P. expansum P. fellutanum P. implicatum P. janthinellum P. jenseni P. lividum P. palitans P. purpurrescens P. roqueforti P. spinolosum P. velutinum P. verrucosum M. floridanus M. lunisporas M. pallens M. pilosus M. purpureus M. ruber M. sangiuneus
Литература страна 19 6 Методи за откривање на цитринин Во споредба со другите микотоксини има само малку податоци за појава на цитринин во храната. Ова делумно се должи на неговите аналитички особености, при што нестабилноста на токсинот за време на подготовката на примерокот и силно флуктуирачките стапки на закрепнување предизвикани од него (Вилсон, 1994), како и изразеното опаѓање при откривање на хроматографијата може да се покажат проблематични (Дик, 1988). До денес, откривањето на цитринин главно се спроведуваше со употреба на тенок слој хроматографија (TLC) (Blanc et al., 1995a, b, Martins et al., 2002, Gimeno, 1984), течна хроматографија со високи перформанси (HPLC) со УВ (Phillips et al., 1980) или детекција на флуоресценција ( Лепом, 1986, Рајнхард и Зимерли, 1999б, Шнавеис и сор., 2001) и гасна хроматографија (ГЦ) (Шу & Лин, 2002). и се користат имуноанализи на ензими (ЕИА) (Абрамсон и сор., 1996, 1999 година, Дитрих и др., 1998, 1999 година, Врабчева и сор., 2000 година, Шмид, 2002 година).
Материјал и методи страница 20 C Материјал и методи 1 Материјал 1.1 Примерок материјал Во оваа работа беа испитани главно жито и производи од жито, како и овошни и сокови од зеленчук. Покрај тоа, беше анализирана индивидуална азиска храна. Примероците се добиени од трговците на мало со храна. Ceитарки Анализирани се вкупно 380 примероци за присуство на цитринин. Од нив, 279 биле производи од жито/жито и 69 биле производи од пченка/пченка. Покрај тоа, испитани се 19 производи од леќата/леќата и 13 примероци од ориз. Сокови од овошје и зеленчук Од 98-те анализирани сокови, 34 биле јаболко, 27 портокал, 7 грозје, 8 ананас, 4 круши, 7 банани, 3 праски, 4 мултивитамини, 3 домати и 1 сок од мандарина. Азиска храна 2 примероци вино саке и 2 сосови хои-грев, како и азиска паста за зачини, беа испитани за присуство на цитринин. Микролошки безопасен материјал за примерок беше искористен за развој и потврдување на методите за откривање. Вештачката контаминација на материјалот од примерокот се случи со стандардни раствори на цитринин.