Профил на миозитис - Блот - Синево
ИнформирајÞii општи и препораки за утврдување на профилот на миозитис
Идиопатските воспалителни миопатии се група на состојби кои се карактеризираат со слабост на проксималните мускули на екстремитетите, мускулна атрофија, биохемиски и електромиографски знаци на оштетување на мускулите, хистолошки абнормалности, карактеристични промени на кожата. Тие се јавуваат со инциденца од 0,1-1/100 000 жители/година и се почести кај жените. Оваа група вклучува: полимиозитис, дерматомиозитис, миозитис со инклузивни тела, миозитис поврзан со неоплазија (паранеопластичен синдром) и миозитис поврзан со други болести на сврзното ткиво 6; 7 .
Како и кај системската склероза, специфичните автоантитела играат голема улога во дијагностицирањето и класификацијата на различните варијанти на овие состојби (вклучително и синдроми на преклопување), особено затоа што преваленцата на антинуклеарни антитела е значително мала (40-60%) во споредба со лупусот. системски еритем. Овие автоантитела препознаваат повеќе антигени цели: видови на трансфер РНК (tRNA), аминоацил-т-РНК синтетази, компоненти на честички за препознавање сигнал (SRP), преведувачки фактори, компоненти на комплексот за реконструкција. нуклеозом, но најважни се оние насочени против аминоацил-т-РНК синтетазите (семејство на ензими кои се наоѓаат во сите нуклеирани клетки и има улога на прицврстување на одредена аминокиселина на сопствената tRNA). Присуството на автоантитела е поврзано со одредени подмножества на болеста, со предвидувачка вредност за разни клинички манифестации и за прогноза на болеста 1; 2; 6; 7 .
Антитела против Joо-1 се насочени против ензимот хистидил-т-РНК синтетаза. Ин витро, овие автоантитела се врзуваат за конформациските епитопи на ензимот и ја инхибираат неговата каталитичка активност. Антигенот е во димерична форма и се наоѓа во цитоплазмата; молекуларната маса на под-единиците е 50 kDa. Преваленцата на анти--о-1 антитела кај полимиозитис и дерматомиозитис е 20-40%; автоантитела може да се открие рано, понекогаш претходи на појава на симптоми. Кај децата, анти--о-1 антителата се исклучително ретки. Пациенти со анти-Јо-1 антитела имаат типична тријада на симптоми: полимиозитис (> 90%), полисиновитис (артралгии, неерозивен деформирачки артритис, теносиновитис во 50% од случаите), фиброзен алвеолитис или белодробна фиброза (60%). Може да додадеме и: Феномен на Рејно (40%), треска (20%), „рака на механичар“ (30%). Оваа состојба е позната како синдром на анти-синтетаза. Повеќе од 90% од кавкаските пациенти со анти-Јо-1 имаат HLA алел DR3 1; 4; 6; 7 .
Иако антитела насочени кон други аминоацил-т-РНК синтетази: анти-ПЛ-7 (синтеза против треонил-т-РНК), анти-ПЛ-12 (анти-аланил-т-РНК синтетаза), анти-ЕЈ (анти-глицил-т-РНК синтетаза) и анти-ОЈ (анти-леуцил-т-РНК синтетаза) се многу поретки од анти-Јо-1, тие се поврзани со истите клинички манифестации компатибилни со синтетаза 6. Обично пациентот има само еден вид на анти-синтетаза антитела, но исто така се опишани случаи во кои биле откриени сите 5 автоантитела. Анти-синтетаза синдром реагира умерено на кортизонска терапија. Бидејќи сите синтетази се наоѓаат во цитоплазмата (местото на синтеза на протеини), автоантителата предизвикуваат фин цитоплазматски изглед при индиректна имунофлуоресценција користејќи клетки Хеп-2 како подлога. .
Анти-ПЛ-7 се јавуваат со преваленца од 3-6% кај пациенти со миозитис, особено кај синдроми на преклопување (СЛЕ, системска склероза, интерстицијална белодробна фиброза).
Анти-ПЛ12 се откриваат со преваленца од 3% кај пациенти со миозитис.
Анти-ЕЈ и анти-ОС се јавуваат кај полимиозитис, но исто така и кај синдроми на преклопување 3 .
Антитела против Ми-2 се насочени против нуклеарна хеликаза (комплекс на нуклеарни протеини вклучен во регулативата за транскрипција); се јавуваат кај 15-30% од пациентите со дерматомиозитис (имаат висока специфичност за оваа состојба) и ретко кај пациенти со полимиозитис. Повеќето пациенти со анти-Ми-2 антитела го носат алелот HLA DR7. Формата на болеста е бенигна, со добар одговор на кортизонската терапија 6; 7 .
Антитела против Ку се насочени против антигенот на нуклеоларниот протеин од типот хетеродимер, составен од две подединици со молекуларна тежина од 70 и 80 kDa, соодветно, компонента на ензимскиот комплекс на протеинска киназа зависна од ДНК. Овој комплекс игра важна улога во клеточните процеси поврзани со превод, поправка на ДНК и преуредување на гените вклучени во синтезата на имуноглобулини, како и рецептори на Т-клетки. Анти-Ку антителата се наоѓаат во широк спектар на болести на сврзното ткиво, кај особено се преклопуваат синдромите на склеродерма-миозитис, но исто така и СЛЕ (3-10%). Појавата кај индиректната имунофлуоресценција е од грануларен тип (забележан); Опишана е и поврзаност со алелот HLA DQw1. Преваленцата на анти-Ку антитела кај автоимуните болести е променлива, при што етничката припадност е важен елемент. На пример, случаи на СЛЕ поврзани со анти-Ку антитела се пријавени во Северна Америка и Европа, но не и во Јапонија. Примарен Сјогренов синдром, како и примарна пулмонална хипертензија, се други клинички состојби кои обично се поврзани со анти-Ку.
Антитела против PM-Scl се насочени против нуклеоларниот комплекс составен од 11-16 полипептиди, чија функција сè уште не е утврдена 6. Антителата се откриваат во над 90% од случаите на синдром на преклопување на склеродерма-полимиозитис (склеродерматомиозитис), но само кај
8% од сите случаи на миозитис и
3% од сите случаи на склеродерма 5. Прогнозата е релативно поволна кај оваа група на пациенти. Тоа е поврзано со HLA DR3 и антинуклеарни антитела со хомоген нуклеоларен изглед кај имунофлуоресценција 2; 6. Двете главни автоантитела се откриваат одделно во лабораторијата: анти PM-Scl100 и анти PM-Scl75 3 .
Анти-СРП („Честичка за препознавање на сигнал“) реагира со 54 kDa компонента на SRP комплексот што посредува во транспортот на новосинтетизираните протеини до ендоплазматскиот ретикулум. Тие се опишани кај пациенти со полимиозитис и дерматомиозитис (до 4% од случаите), особено кај црни жени. Анти-СРП се маркери за некротизирачка миопатија карактеризирана со силна проксимална и симетрична акутна слабост на скелетните мускули поврзани со болка во мускулите; срцевиот мускул е исто така засегнат. Болеста е поврзана со зголемена стапка на смртност и слаб одговор на кортизонска терапија 6; 7 .
Анти-Ro52 се насочени против антиген 52kDa и се опишани како неспецифични автоантитела поврзани со ревматски и неревматски заболувања. Тие се 100% присутни кај мајки на фетуси или новороденчиња со вроден атрио-вентрикуларен блок или неонатален лупус 6. Одреден процент на пациенти со полимиозитис/дерматомиозитис имаат Anti-Ro52 во комбинација со анти-аминоацил-т-РНК синтетаза антитела (особено анти--о-1) 1; 2 .
Обука на пациентот - à jeun (на празен стомак) или после јадење (после јадење) 3.
Примерок собрани - венска крв 3 .
Контејнер за берба Vacutainer без антикоагуланс со/без одвојувачки гел 3 .
Потребна е обработка по бербата - одделете го серумот со центрифугирање 3 .
Волумен на примерок - минимум 1 ml сер 3 .
Причини за одбивање да се обиде
Стабилност на примерокот - одвоениот серум е стабилен 14 дена на 2-8 ° C и долго време на -20 ° C. Не одмрзнувајте/замрзнувајте 3 .
Метод - имуноблот. Антигените што се користат се природни (Jo-1) и се комбинираат.
Лентите се состојат од мембрански чипови фиксирани со разни прочистени антигени: Mi-2, Ku, PM-Scl 100, PM-Scl 75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12, EJ, OJ, Е-52.
Во првиот чекор, лентата натоварена со прочистени антигени се инкубира заедно со разредениот серум на пациентот. Доколку во серумот се присутни специфични антитела, тие ќе се врзат за соодветните антигени на лентата. По чекор за перење, лентата се инкубира со алкален фосфатаза обележан човечки анти-IgG конјугат. Коњугатот ќе се прикачи на IgG делот од комплексот антиген-антитела. Откако ќе се измие, неврзаниот конјугат е отстранет, се додава раствор за боење (ензимски супстрат) - систем за откривање на ензими во колориметар. Доколку е присутен врзаниот конјугат, ензимската реакција ќе генерира производ во темно сина боја во опсезите окупирани од специфични антитела. Така, лентите визуелизирани на ниво на лента се резултат на врзување на специфични антитела кон индивидуалните антигени на ниво на лентата.
На секоја лента има внатрешна контролна лента. Појавата на интензивна реакција на бојата на ова ниво потврдува дека сите фази на тестот за имуноблот се извршени правилно 3 .
Конечното толкување на резултатите од тестот се врши со помош на софтвер (по скенирање на лентите) кој, во зависност од интензитетот на сигналот, дава резултат за секоја лента на лентата, како што следува:
ОЦЕНУВАЕ НА СИНГАЛОТ
Интензитет на сигналот
Референтни вредности