УНИВЕРЗИТЕТНА КЛИНИКА ХАМБУРГ-ЕПЕНДОРФ - PDF бесплатно преземање

УНИВЕРЗИТЕТНА КЛИНИКА ХАМБУРГ-ЕППЕНДОРФ Институт за клеточна и интегративна физиологија на Центарот за експериментална медицина проф. медицински Хајмо Емке Улогата на WNK киназите во регулирањето на електролитниот транспорт во дисталниот нефрон на нокаутираната дисертација на глувчето BKβ1 Да се ​​добие диплома доктор по стоматологија на Медицинскиот факултет на Универзитетот во Хамбург презентиран од Анелен Дитмер од Бухолц и.д.н. Хамбург 2013 година

хамбург-епендорф

Прифатено од Медицинскиот факултет на Универзитетот во Хамбург на: 13.05.2014 година Објавено со дозвола од Медицинскиот факултет на Универзитетот во Хамбург. Испитна табла, претседател: Проф. Др. медицински Испитен одбор Х. Ехмке, втор рецензент: ПД Др. рер. нат Испитен одбор Е.Шведхелм, трет рецензент: ПД Др. медицински Ц. Мејер-Швесингер

Содржина Содржина 1. Вовед 7 1.1 Артериска хипертензија во врска со внесувањето на натриум. 7 1.2 Системи за транспорт на натриум и калиум во бубрезите 9 1.3 Гордонов синдром: Откривање на улогата на WNK киназите во регулацијата на крвниот притисок. 17 1.4 WNK киназите.18 1.5 Ефекти на WNK киназите врз електролитниот биланс. 20 1.6 Цел и пристап во работата. 25 2. Материјал и методи. 27 2.1 Материјал 27 2.1.1 Општа лабораториска опрема 27 2.1.2 Потрошен материјал. 29 2.1.3 Хемикалии. 30 2.1.4 Ензими 31 2.1.5 Биохемикалии 32 2.1.6 Комплет 33 33 2.1.7 Раствори, пуфери 33 2.2 Методи. 36 2.2.1 Диети со калиум кај животните. 36 2.2.2 Заштитни мерки за изолација на РНК. 37 2.2.3 Дисекција на бубрег и изолација на РНК на бубрежната зона. 37 2.2.4 ОД мерење на изолираната РНК на бубрегот 39 2.2.5 Агилен мерење на изолираната РНК на бубрегот 39 2.2.6 Микродесекција 40 2.2.7 РНК изолација на нефронските тубули. 41 2.2.8 Обратна транскриптаза (РТ) . 42 2.2.9 Актин-ПЦР. 43 4

Содржина 2.2.10 Електрофореза со гел од агароза. 44 2.2.11 ПЦР во реално време 44 2.2.12 Статистика. 49 3. Резултати 51 3.1 Споредба на нокаут-глувци од див тип и BKβ1 51 3.1.1 Резултати од анализата на PCR во реално време на пресекот на кортексот . 51 3.1.2 Резултати од анализата на PCR во микроодисекција во реално време 55 3.2 Резултати од диети со калиум. 58 3.2.1 Транспортерот на луминалниот натриум NCC и епителниот натриум канал ENaCβ на диета со калиум 58 3.2.2 Апикалниот калиум канал ROMK на диета со калиум 61 3.2.3 WNK киназите на диета со калиум 62 3.2.4 SGK1 киназата и протеинот GRP58 на диета со калиум. 64 3.2.5 Протеинот CHIF на диета со калиум 66 3.2.6 Транспортерот NKCC2 на диета со калиум. 67 4. Дискусија 68 4.1 Мотивација на прашањето 68 4.2 Глувци од див тип на диета со калиум ... 69 4.2.1 Котранспортер на натриум хлорид (NCC) 72 4.2.2 Епителен натриум канал (ENaC). 72 4.2.3 Луминален калиум канал РОМК 73 4.2.4 Однесување на киназите 75 4.2.5 Други можни алдостеронски цели 79 4.3 Споредба на нокаут глувци од див тип и BKβ1. 82 4.3.1 Резултати од PCR во реално време под нормална диета 82 4.3.2 Резултати од микродисекција 84 4,4 нокаут глувци на калиумска диета ... 85 5

Содржина 4.4.1 Диета со низок калиум кај нокаут глувците BKβ1. 85 4.4.2 Диета со висок калиум кај нокаут глувците BKβ1 . 88 4.5 Изгледи. 90 5. Резиме 93 6. Список на кратенки. 94 7. Список на слики. 98 8. Список на табели. 101 9. Библиографија. 102 10. Признанија. 119 11. CV. 120 12. Доверба . 121 6

Материјал и методи 2. Материјал и методи 2.1 Материјал 2.1.1 Општи лабораториски уреди Табела 1а: Користени општи лабораториски уреди Означување на типот на уред Биланс на анализа на компанијата ISO 9001 Sartorius AG, Göttingen Autoclave 3850 ELC Tuttnauer Systec Ltd., NYујорк, САД Биоанализатор тип 2100 Agilent Technologies, Санта Клара, Калифорнија, САД Електрофореза снабдување со електрична енергија EPS 600 Pharmacia Biotech GmbH, фрајбург стаклена пипета батерија Pipetus Hirschmann Laborgeräte GmbH & Co KG, Еберштат комора за електрофореза политрон хомогенизатор PCR уред Тиристорски контролер TR50 Gene Amp PCR систем 2400 Janke & Kunkel, IK Wilke, NJујорк, САД Перким Елмер, Норвалк КТ, САД ph-метар ph-метар 320 Mettler-Toledo GmbH, Giessen Photometer Ultrospec 3000 Pharmacia Biotech GmbH, Freiburg Pipettes Pipetman P2, P10, P20, P200, P1000 Gilson, Middleton, WI, USA 27

Материјал и методи Табела 1б: Користена општа лабораториска опрема Определување тип на уред Компанија Прецизен биланс 440-33N Готл. Kern & Sohn GmbH, Balingen- Frommern PCR-уред во реално време Светлоско светло на циклус светло на плажа KL 1500 LCD Roche Diagnostics GmbH, Mannheim Schott AG, Mainz Speed ​​Vac Concentrator 5301 Eppendorf AG, Hamburg Thermoblock TB1 Biometra GmbH, Göttingen AG Termomixer AG Табела со УВ-светло - Biometra GmbH, Göttingen Vortexer MS2 Minishaker Janke & Kunkel, IKA-Werke, Wilmington, NJ, САД Центрифуга центрифуга 5417C Eppendorf GmbH, Хамбург центрифуга 5417R Biofuge пико Biofuge stratos Eppendorf GmbH Ham Instruments, Хамбург, Хамбург Остероде 28

Материјал и методи 2.1.2 Потрошен материјал Табела 2: Потрошен потрошен материјал Материјал Ознака на производот Компанија Излезни пипети Серолошки пипети 10 ml сокол, Лабораториски производи Бектон Дикинсон, Френклин Лејкс, NJујорк, САД Совети за пипети Совети за запечатување: 10 μl, 20 μl, 100 μl, 200 μl, 1000 μl Biozym Biotech Trading GmbH, Виена, Австрија Садови за микрореакција 1,5 ml Sarstedt AG, Нимбрехт 2 ml Sarstedt AG, Нимбрехт PCR капилари во реално време PCR цевки 0,2 ml Безбедно-заклучувачки цевки 0,5 ml за агилен светло Капилари на велосипеди (20 μl) Eppendorf AG, Hamburg Eppendorf AG, Hamburg Roche Diagnostics GmbH, цевки Манхајм Cellstar 50 ml Greiner bio-one GmbH, Кремсмунстер, Австрија Цевки за центрифугирање 4 Tubes Sarstedt AG, Нимбрехт 29