Двојно директно вбризгување на крв во Цистерна магна како модел на субарахноидално крварење

Резиме

Во овој протокол, опишавме стандардизиран модел на субарахноидална хеморагија (САХ) со двојно вбризгување на автологна целосна крв во магната во цистерната. Високиот степен на стандардизација на процесот на двојно вбризгување претставува среден до акутен модел на САХ со релативна сигурност на смртност.

цистерна

Апстракт

Вовед

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Протокол

Сите постапки беа спроведени под надзор на Х. Кастел во согласност со Францускиот етички комитет и упатствата од Директивата 2010/63/ЕУ на Европскиот парламент и на Советот за заштита на животните што се користат за научни цели. Овој проект е одобрен од локалниот CENOMEXA и националните етички комитети за истражување и тестирање на животни. Машки глувци C57Bl/6J Rj (vанвие) на возраст од 8-12 недели беа сместени под стандардни контролирани услови на животната средина: 22 ° C на 1 ° C, 12 часа/12 часа светло/темно циклус и вода и храна без ограничување.

1. Поставете хирургија на САХ и подгответе се за инјектирање

Подготовка на 2-то животно (машки глувци стари 8-10 недели C57BL/6J)

3. Индукција на САХ

4. Постоперативно следење и крај на експериментот

  1. Веднаш по операцијата, изолирајте го и поставете го глувчето со чир на декубитус со прекривачко ќебе на грб во отворена кутија додека се опоравувате.
  2. Измерете и набудувајте го однесувањето на секој глушец до жртвата секој ден (на пр. Д7 пост-операција).
  3. Значително губење на тежината (> 15% од тежината) е класично забележано меѓу крајните точки на човекот. „Извиткано држење на грбот“, бавни движења, поклонување, абнормално формирање глас од повреди и/или значително агресивно однесување се исто така важни знаци на страдање на животните. Ако се појави некој од овие знаци или комбинација на знаци, следењето на животното ќе се зголеми за неколку часа по нивното појавување. Ако благосостојбата на животното се влоши или не се подобри во рок од 48 часа, се смета дека е достигнато неподносливо страдање и се прави евтаназија.
  4. За време на изборот, жртвувајте глувци со анестезија со обезглавување и соберете мозок за понатамошна анализа.
  5. Евтаназија (обезглавување) по изофлуранска анестезија (5%).

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Резултати од репрезентацијата

САХ церебрален вазоспазам
Како што велат Ел Амки и сор. 22 покажува базиларна артерија (БА), средна церебрална артерија (МЦА) и предна церебрална артерија (АЦА) CVS беше присутен во моделот САХ со двојна интрацистерна инјекција на крв во АЦА, МЦА или БА од Д3 до Д10 пост-операција. Накратко (Слика 2А), по жртвувањето на глувчето и обезглавувањето, мозоците беа собрани и пост-фиксирани во 4% параформалдехид (PFA) и потоа замрзнати на -80 ° C пред да се исечат на 20 м попречни парчиња со криостат. Боење со хематоксилин и еозин се користеше за БА (интерауларен е 0,40 мм; Брегма -3,40 мм), МЦА (интераура 2,58 мм; Брегма -1,22 мм) и АЦА (интерауларен е 4,90 мм; Брегма 1,10 mm) за да се овозможи идентификација на CVS преку систематско снимање на слика на обоени стакла со помош на микроскопска камера. За да се процени отсуството или присуството на макроскопски CVS, беше пресметан односот на областа на луменот до дебелината на wallидот за секоја обоена артерија. Колку е помал односот, толку е потежок CVS. На пример, CVS се случи во БА во мозоците САХ во споредба со лажните мозоци на глувчето (Слика 2Б)), но исто така и во другите големи церебрални артерии (МЦА, АЦА, податоците не се прикажани 22).

Дискусија

Во овој контекст, моделот е сличен на клиничката SAH физиопатологија во однос на CVS поврзан со SAH. Општо, CVS се јавува по 1 час кај стаорци 40 и по 3 дена кај глувци 17 во МЦА и БА во моделот на ендоваскуларна перфорација. Во моделот на инјекција на крв во прехијазматска цистерна, инциденцата на CVS е прикажана помеѓу два дена 49 и осум дена 37 кај стаорци. Во моделот на двојно вбризгување во цистерна магна кај стаорци, CVS развил помеѓу 10 минути 29 и 3 дена 31. Ние сме први што го опишавме кинетичкиот изглед на CVS во глувчешки модел на SAH со двојно вбризгување, воспостави CVS во главните церебрални артерии (ACA, MCA и BA) 3 дена и опстојуваме до 10-тиот ден по SAH 22, близу до тоа што е забележано кај пациенти со САХ. Овој последен модел може да се дефинира како квалификуван модел на САХ, доволно ригорозно без смртност, за да се овозможи проучување на механизми и терапевтика што е насочена кон ЦВС.

Друг неконтролиран параметар во САХ моделот беа можните варијации во просечниот артериски крвен притисок (MABP) предизвикани од прекумерно брза постапка на инјектирање крв 27. Всушност, МАБП обично се крева акутно по експерименталниот САХ за да се одржи притисокот на церебралната перфузија, а потоа се спушта на почетната линија потоа. Во моделот САХ, инјектиравме крв или aCSF (приближно 10 л/мин) со мала стапка за да ги избегнеме овие варијации на МАБП. Во врска со невробиолошките настани во овој модел што ги имитира оние забележани кај луѓето, претходно покажавме дека моделот на двојно вбризгување на крв во SAH предизвикува долготрајно CVS, микротромбоза и оштетување на мозокот што го оштетува мозокот, вклучително и неисправна параваскуларна дифузија од ден 3 до 10 ден видов 22. Сепак, неодамнешните податоци што опишуваат дека CSD е вклучен во ДСИ 13 поврзан со САХ, силно го поддржуваат спроведувањето на овој вид студии во моделот на двојно вбризгување на глувчето. Ова треба да овозможи научни достигнувања во врска со позитивните ефекти од новите терапии насочени кон ЦСД.

Како заклучок, би сакал да кажам дека двојното вбризгување на целата артериска крв во моделот цистерна на магна е совладан модел кој обезбедува лесен начин за имитирање на човечката физиопатологија на SAH, вклучувајќи CVS, микротромбоза, васкуларно воспаление, невролошки дефицити и стапка на смртност. Тој претставува потврден модел за тестирање на нови терапевтски пристапи за третман на морбидна смртност поврзана со САХ.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.