Флуктуации на задржување на времето - Дел 1 SHIMADZU DEUTSCHLAND
9 - време на задржување дел 1
10 - време на задржување дел 2
11 - Lifeивот на колоната - Дел 1
12 - Lifeивот на колоната - Дел 2
Најчести видови на откривање кај HPLC се УВ апсорпција, флуоресценција и откривање на индекс на рефракција. Овие типови на откривање не се специфични за супстанциите и во повеќето случаи аналитите се доделуваат преку времето на задржување. Ако времето на задржување варира, може да се појават неточни резултати. Затоа, репродуктивноста на времето на задржување е од голема важност.
Во следното, како и во наредната недела, презентирани се различните влијанија.
1. Влијание на температурата
Како и со многу проблеми во HPLC, и температурата има влијание врз времето на задржување. Колку е поголема температурата, толку е помал вискозитетот на мобилната фаза. Затоа, притисокот на грбот во системот исто така се намалува со зголемувањето на температурата. Како по правило, промената на температурата од 1 ° C резултира со промена од 1 до 2% во времето на задржување. Затоа, поместувањето на времето како резултат на флуктуации на температурата е поголемо за аналити со доцна елуирање. Во следните четири парабени се измерени на различни температури.
Ако го споредите мерењето на 20 и 50 ° C, вкупното време на работа е скоро преполовено. Ова влијание секако може да се искористи и за оптимизирање или скратување на методот, под услов да остане во спецификациите на колоната. Меѓутоа, на многу високи температури, може да се очекува пократок век на траење за повеќето колони.
Меѓутоа, ако треба да се користи температурата за оптимизација, треба да се напомене дека не сите аналити реагираат на ист начин на промена на температурата. Како што е прикажано на примерот десно, тие можат да се однесуваат многу поинаку. Додека аналитите се разделуваат на 20 ° C, сорбната киселина и бензоевата киселина се ко-елутираат на 30 ° C. Ако температурата се зголеми понатаму, низата на елуирање може дури и да се промени. Ако ова не се забележи, тука може да се појават и неточни резултати.
Во најдобар случај, користете печка со колони за да ја одржувате температурата на вашата колона што е можно поконстантна.
1: Сорбинска киселина, 2: Бензоева киселина, 3: Метилпарабен
2. Промена на брзината на проток
Секоја пумпа има одреден број на потрошни делови, кои треба да се заменуваат во редовни интервали. На пример, повеќето клипни заптивки се специфицирани за испумпување на одреден волумен. Ако абењето напредувало премногу, тие можат да протекуваат и на тој начин да влијаат на брзината на проток. Ако времето на задржување варира, неисправната пумпа исто така може да биде проблем.
Најлесен начин да ги проверите пумпите е да ги измерите. За да го направите ова, земете цилиндар за мерење, поврзете капилар на контра притисок директно со пумпата и поставете дефиниран проток. Сега споредете го времето во кое се пумпа одреден волумен со поставената брзина на проток.
Проверувајте ги потрошните материјали на вашиот HPLC во редовни интервали. Чувајте ги и резервните делови подготвени за брзо заменување на неисправните делови.
За жал, сите мерки што доведуваат до стабилизирање на хроматографските услови се од мала помош ако работите со многу робусни методи. Под такви услови, дури и малите промени, на пример, во температурата или во елуентот, имаат големо влијание врз времето на задржување.
Како резултат, примероците честопати треба да се повторат или проценката да се преработи рачно. Ова е голем проблем, особено во регулирана средина.
Подобро е да се инвестира повеќе време во развој на робусни методи. Во ретроспектива, ќе имате помалку напор и повеќе време во рутината, а времето инвестирано претходно ќе се амортизира многу брзо.
Работи што треба да се разгледуваат секој ден:
Општо:
- Изведете редовни тестови за способност
- Проверувајте ги потрошните материјали во редовни интервали
- Документација на времето на задржување, растворање и сл. На референтните решенија
Систем:
- Користете колона печка за контрола на температурата
- Водете дневник за колони
- Одржување на документи
Следната недела, со влијанието на составот на елуентата, колоната и времето на рамнотежа, исто така, има и флуктуации на времето на задржување како тема.