Фон Вилебранд болест тип 1 и 3 - генетско испитување - Синево

Општи информации и препораки

ВонВилебрандовата болест (VWD) е предизвикана од недостаток или абнормалност на факторот на vonWillebrand (FVW) и е најчеста наследна хеморагична болест, со преваленца од 1% кај општата популација. Болеста за прв пат се карактеризира со Ерик фон Вилебранд во 1926 година, како автосомно наследна патолошка состојба. VWD е поврзана со квантитативни недостатоци (тип 1 и тип 3) или квалитативни аномалии на FVW (тип 2, со подтипови 2А, 2Б, 2М и 2Н). FVW се синтетизира во ендотелијалните клетки и мегакариоцитите. Неговиот ген се наоѓа на кратката рака на хромозомот 12p13.3, вклучува

178 килобази со 52 егзони, најголемиот егзон, 28, со должина од 1,4 кб 5 и кодира протеин организиран во 4 повторливи домени, вклучувајќи 3 "А", 3 "Б", 2 "Ц" и 4 "Д", кои служат на различните функции на FVW. Доменот А1 ги содржи местата на врзување за тромбоцитите GPIb, ристоцетин и колаген тип VI, доменот А3 содржи место за врзување за колаген I и III, местото за врзување на FVIII се наоѓа во домените D 'и D3, а доменот C1 ја содржи RGD низата способна за интеракција со GPIIb/IIIa тромбоцити 1; 2; 4 .

VWD може да се наследи преку повеќе генетски механизми. Повеќето случаи на типови 1 и 2А, како и типовите 2Б и 2М се автосомно доминантно наследство. Типовите 2Н и 3, како и некои типови 1 и 2А се наследуваат автосомно рецесивно. За автосомно доминантно пренесување, најпогодените лица имаат засегнат родител и секое дете има 50% шанси да ја наследи мутацијата. За автосомно рецесивно пренесување, родителите се задолжителни хетерозиготи (кариери на мутан алел) генерално асимптоматски; при зачнување, секој брат или сестра на заболена индивидуа има 25% шанса да биде засегнат, 50% шанса да биде асимптоматски носител и 25% шанса да не биде ниту погодено ниту носител, а секое дете на погодена индивидуа е задолжително хетерозиготно 3 .

Мутациите и полиморфизмот на генот FvW се наведени во меѓународната база на податоци www.shef.ac.uk/vwf/ .

Адаптирано од Кини и сор. 5 .

Функционални домени на генот на факторот Вон Вилебранд (FVW): а) структура на генот и псевдогенот на FVW; б) пред, про-ФВВ; в) функционални домени и локација на варијантите од типот 2.

Спроведени се студии во семејства со тип 1 VWD што резултирало во идентификување со секвенционирање на 112 кандидатски мутации кои се одговорни за појавата на синдромот. Покрај тоа, пациентите со тип 1 VWD се идентификувани како хетерозиготни носители од тип 3 VWD 9. Објавени се резултати според кои е откриена честа мутација на Tyr1584Cys кај 14% од канадските пациенти со тип 1 VWD и евентуално сличен процент на пациенти во Велика Британија 4 .

Мутациите биле откриени кај 60-65% од пациентите со VWD тип 1, со доминација на мутации на мисии; мутации на промашување со целосно продорен доминантен пренос често се идентификуваат кога нивоата на FVW: Ag и FVW: RCo се 3 .

Мутациите поврзани со VWD тип 1 влијаат на FVW преку различни механизми, вклучувајќи намалена секреција и интрацелуларно задржување поради променет интрацелуларен транспорт на FVW под-единици, зголемен циркулационен клиренс или, во мал број случаи, намален протеински израз како резултат на нула алел. 2, 3 .

Бидејќи приближно 50% од мутациите се наоѓаат помеѓу егзоните 18-28, овие егзони првично се анализираат, но редоследот на целиот ген обезбедува целосни информации.

Тип 3, одговорен за 1-5% од случаите на VWD, е најтешката форма, што резултира од целосен недостаток на синтеза на FVW. Хеморагичната болест генерално се дијагностицира во детството, формирањето на хематоми е честа појава, а хемартрозата може да се појави како резултат на ниско ниво на FVIII што се наоѓа во оваа форма на болеста. Кај овие пациенти, нивото на FVW е практично неоткриено, а нивото на FVIII е генерално 1-10 IU/dL, слично на оној на лесна до умерена хемофилија А. Генетската анализа открива хомозиготни или двојни хетерозиготни дефекти на генот FVW, при што се забележани мутации во целиот кодирачки регион на генот (егзони 2-52), вклучувајќи големи или мали бришења на генот, мутации на рамката за читање, мутации на местото на спојувањето. од „вроденост“), промашувања или глупости мутации 2; 4. Целосно секвенционирање идентификувани мутации во 80-90% од случаите на VWD тип 3:

-20% се мутации на мисии лоцирани во домените D1-D2 (егзони 3-11) и D4-CK (егзони 37-52);

-80% се нули алели, лоцирани на ниво на целиот ген, што може да резултира од различни видови мутации и кои не произведуваат функционален протеински производ 3 .

Мутации во рамката за читање и глупости, што доведува до губење на изразување на FVW протеин или синтеза на скратен обележан FVW протеин, се идентификувани во семејства со тип 3 VWD, при што мутацијата во рамката за читање на егзон 18 е одговорна за повеќето случаи на тип 3 VWD кај шведската популација и е честа појава во Германија. Оваа мутација се состои од стабилна mRNA која кодира скратен протеин, брзо деградиран на клеточно ниво 4 .

Идентификувани се широки бришења на гени кај мал број семејства, но тие претставуваат зголемен ризик за развој на алоантитела на FVW по третманот со концентрати на FVW.

Лабораториска проценка на родителите на пациенти со тип 3 VWD може да покаже благ квантитативен дефицит на VWD, но почесто тие се асимптоматски во согласност со автосомно рецесивен начин на пренесување на тип 3 VWD. Интербридирањето е вообичаено кај семејствата со оваа варијанта 2; 4. Сепак, кај некои семејства со глупости и мутации на рамката за читање, идентификувани се хетерозиготи со очигледен VWD тип 1. Мутациите што доведуваат до абнормални FVW под-единици кои се мешаат на доминантно негативен начин со нормалниот алел, особено може да предизвикаат симптоматски VWD кај хетерозиготите 4 .

Тип 2 вклучува квалитативни типови на VWD и може да сочинува до 20-25% од случаите со VWD. Тип 2 е осомничен кога сериозноста на симптомите на пациентот е прекумерна во споредба со нивоата на FVW и FVIII, кога има несоодветно намалување помеѓу FVW: Ag и FVW: RCo или FVIII или кога има истовремен недостаток на FVW и тромбоцитопенија. Во зависност од природата на функционалниот дефект, типот 2 е класифициран во типовите 2А, 2Б, 2М и 2Н 2 .

- Тип 2Б е парадоксално хеморагично заболување кое се карактеризира со зголемена интеракција на FVW со тромбоцити, проследено со зголемена генерација на комплекси на FVW-тромбоцити и нивно чистење од циркулацијата. Многу од овие пациенти имаат лесна постојана тромбоцитопенија, што може да се влоши за време на стрес, бременост, хирургија или десмопресин. Мултимерната анализа открива, како и во типот 2А, отсуство на форми со висока молекуларна тежина и студии за агрегација на тромбоцити предизвикани од ниски дози на ристоцетин, ја нагласуваат зголемената интеракција на FVW со тромбоцитите. Тип 2Б е наследен како автосомно доминантна земја, мала група на мутации на промаши во делот на егзон 28 кој го кодира доменот А1, кој комуницира со тромбоцитниот GPIb, одговорен за сите пријавени случаи 2. 4 групирани мутации помеѓу Arg543 и Arg578 се забележани кај повеќе од 80% од пациентите 4. Мутациите кои влијаат на p.P1266L можат да демонстрираат само зголемено врзување со GP1b, но нема тромбоцитопенија и губење на мултимери со голема молекуларна тежина 3 .

-Тип 2М се карактеризира со недостаток на тромбоцитно-зависна функција на FVW, што не се припишува на недостаток на мултимери. Она што го разликува типот 2М од типот 2А е дека мултимерната анализа е нормална. Тип 2M е наследен како автосомно доминантна земја, со мутации во регионот на егзон 28 кои го кодираат А1 доменот на FVW, менувајќи ја протеинската конформација, во алтернативна област на типот 2B 2. Рекурентна мутација, Arg1205His - VWD 2M Виченца неодамна е пријавена во европски семејства, карактеризирана со ниско ниво на FVW: Ag и присуство на мултимери со поголема од нормалната молекуларна тежина („супернормална“). Болеста првично беше дијагностицирана како VWD тип 1 кај пациенти во регионот Виченца Италија 1; 4; 8 .

-Тип 2Н (порано наречен тип Нормандија) вклучува мутации кои влијаат на интеракцијата на FVW со FVIII, што резултира во „автозомна хемофилија“, со нивоа на FVIII помеѓу 5 и 30 IU/dL, остатокот од лабораториските параметри, соодветно FVW: Ag и FVW: RCo, нормална граница. Идентификувани се 37 мутации 4, повеќето вклучуваат егзони 18, 19 и 20 кои кодираат голем дел од врзувачкиот домен на FVIII и многу помал дел во егзоните 17 и 24-27 3. Овој тип се наследува автосомно рецесивно, па затоа заболените пациенти мораат да наследат од своите родители два 2N алели или еден 2N алел од едниот родител и VWD тип 1 од другиот родител 2. Повеќето индивидуи се сложени хетерозиготи за мутација на мусцент и мутација што резултира со нула алел, поретко се сложени хетерозиготи за 2 мутации мутации и дел се хомозиготни за мутација на мисица, особено p.Arg854Gln, што се јавува кај 1% од кавкаското население 3 .

Генетското тестирање не е генерално потребно за да се утврди дијагнозата на vWD, но може да обезбеди дополнителни информации во врска со патогенезата, одговорот на третманот со дезмопресин, генетското советување или ризикот од формирање на алоантитела. .

Генетското тестирање е особено корисно за диференцијација на тип 2Б тип 2Б, како и за дијагностицирање на тип 2Н VWD, соодветно кај пациенти со блага умерена хемофилија А со нетипично наследство или со краткотрајно преживување на инфузирана FVIII, што не е предизвикано од специфични инхибитори. или намалена активност на FVIII кај жени без семејна историја на хемофилија А. Првично, пациентите треба да бидат тестирани за мутации во генот FVIII, а кога тие се отсутни, треба да се испитаат егзоните на FVW 3; .

Тестирање на носачи на членови на семејство во ризик за автосомно рецесивно VWD е можно откако ќе се идентификуваат предизвикувачките мутации во семејството 3 .

Пренатална дијагноза за ризични бремености (обично тип 3) е можна со анализа на ДНК извлечена од фетални клетки добиена со амниоцентеза на 15-18 недела од бременоста или од хорионски ресички на 10-12 недела од бременоста, доколку мутација/мутациите на предизвикувачот во семејството се/се познати или, ако мутациите не се познати, дијагнозата може да се обиде со анализа на генетска врска со користење на широк панел познати полиморфизми во генот FVW, доколку структурата на семејството е доволна, резултатите може да се добијат побрзо отколку идентификацијата на мутациите во двата алела 3; 4 .

Примерок собрани - крвта ќе дојде 6 .

Контејнер за берба - вакутаин кој содржи ЕДТА како антикоагуланс 6 .

Количината собрана - колку што дозволува вакуумот 6 .

Причини за одбивање да се обиде - употреба на хепарин како антикоагуланс 6 .

Стабилност на тестот - 7 дена на 2-8ºC 6 .

Следниве опции за тестирање се достапни:

-VWD тип 1 и 3 - комплетно секвенционирање на сите гени егзони (стапката на откривање на мутација е 60-65% за тип 1 и 80% за тип 3);

Граници и пречки

Тековната класификација не го ограничува VWD како резултат на мутации лоцирани во генот FVW. Евалуацијата на целиот ген не може да го идентификува постоењето на мутација во случаи на очигледна VWD. Така, невозможноста за идентификување на предизвикувачка мутација не ја исклучува дијагнозата на VWD.

Нормалните варијанти на генот FVW се многу чести, со моментално познати околу 150 нормални варијанти. Овој зголемен степен на полиморфизам, заедно со големата големина на генот и присуството на делумен псевдоген (лоциран на хромозомот 22q и одговара на егзоните 23-34) може да го отежне целосниот редослед на генот и да ги толкува податоците 3; 8. Покрај тоа, генетските дефекти од квантитативни недостатоци на FVW се дистрибуираат низ целиот ген, што ја комплицира проценката.

Тромбоцитен тип VWD е резултат на мутации во GP1BA, но се манифестира фенотипично како VWD тип 2B.

Стекнат синдром фон Вилебранд е лесна до умерена хеморагична болест која не е предизвикана од мутација на генот FVW, најчесто забележана кај луѓе над 40 години без историја на крварење и е поврзана со различни состојби: лимфопролиферативни синдроми, парапротеинемии, болест автоимун, антифосфолипиден синдром, зголемена протеолиза на FVW како резултат на конформациските промени предизвикани од зголемени сили на триење (аортна стеноза, дефект на вентрикуларен септал), изразена тромбоцитоза, отстранување на FVW од циркулација поради врзување на клетките на туморот (тумор на Вилм или одредени болести на лимфопролот), намалена синтеза на FVW (хипотироидизам), лекови (валпроична киселина, ципрофлоксацин, грисеофулвин) 3 .

1. Кастаман Г, Тосето А, Родегиеро Ф. „Болест на Вилебранд“. Во Практична хемостаза и тромбоза, O’Shaughnessy D, Makris M, Lillicrap D eds, Blackwell Publishing, 2008, 53-54.

2. Фридман К, Роџерс Г. „Наследни нарушувања на коагулацијата“. Во Клиничката хематологија на Винтробес, Грир Ј, Форстер Ј, Лукенс Ј, Роџерс Г, Парескевас Ф, Глејдер Б, 11-то издание, Липинкот Вилијамс и Вилкинс, 2004, 1392-94.

3. Гудев А, Jamesејмс П. „Болест на фон Вилебранд“. GeneReviews, полица за книги NCBI.

4. Johnонсен Ј, Гинсбург Д. „Болест на фон Вилебранд“. Во Вилијамс Хематологија, Лихтман М, Бејтлер Е, Кипс Т, Селигсон У, Каушански К, Прчал Ј., 7-то издание, Мекгроу-Хил Медикал, 2006, 1929-37.

5. Кини С, Боуен Д, Каминг А, Енајат С, Гудев А, Хил М. „Молекуларната анализа на болеста Винбранд: упатство од лабораториската мрежа за генетика на хемофилијата во Домот на хемофилијата во Велика Британија“. Хемофилија, (2008); 14: 1099–111.

6. Лабораторија во Синево. Специфични препораки за употребената технологија за работа, 2010. Ref Type: Каталог.

7. Клиника Мајо, Медицински лаборатории Мајо. Референтни лабораториски услуги за здравствени организации. von Willebrand Болест 2N (подтип Нормандија), Крв. www.mayomedicallaboratories.com. 2010. Ref Type: Интернет комуникација.

8. Интернет наследство на Менделијан во Ман, Институт за генетска медицина МекКусик-Нејтанс, Медицински факултет на Универзитетот Johnон Хопкинс. „Болест на Фон Вилебранд“.

9. Раџив К.Прути, МББС, „Практичен пристап до генетско тестирање за фон Вилебранд“, Зборник на трудови на клиниката Мајо (мај 2006 година) 81; 5: 679-691.