Фракционирање на млеко и анализа на некои нејзини компоненти - PDF Бесплатно преземање

1 Универзитет во Келн Институт за зоологија СС 2000/2001 Вежби за напредна обука: Физиологија на животните Б Фракционирање на млеко и испитување на некои од неговите компоненти

2 1. Вовед На овој ден на стажирање се занимававме со млеко од цицачи, испитувајќи само кравјо млеко. Бидејќи млекото од цицачи е единствениот извор на храна за новороденчињата, може да се претпостави дека ги содржи сите неопходни хранливи материи за тој вид. Така, може да се извлечат заклучоци за хранливите потреби на овој вид. За ова, млекото е фракционирано во неговите компоненти. Тоа се протеини (особено казеин), масти, јаглехидрати (особено лактоза), минерали (особено калциум) и витамини. 2. Материјал и методи Оглас 1.3: Примерокот на млеко беше наполнет со 2ml млеко и 2ml вода. Инаку тестовите беа извршени како што е опишано во сценариото. 3. Резултати 1. Одвојување на казеините (изоелектрична точка) 1.0 Кисели врнежи Кога ќе се достигне pH вредност од 4,6, може да се забележи врнежи на казеинот. 1,1 врнежи од сирење: Табела 1: брзина на врнежи од сирење, ml време на сирење [s] страница 2 од 2

3 1.3 Контролен експеримент за врнежи од сирење Составот на контролните серии што се користат е прикажан во табела за појаснување: За да откриете кој јон може да предизвика таложење на млекото Табела 2: Преглед на сериите за контролниот експеримент Бр. Реагенс Ликорион (варено) Забележани врнежи? не да да да не не не да не + додаден реагенс, - реагенсот не е додаден Страна 3 од 3

4 2. Карактеризација на млечниот протеин: Врз основа на познатите мешавини на аминокиселини, бевме во можност да ги доделиме одделните ленти добро во TLC. Според ова, следниве аминокиселини се содржани во казеин: Негов, Арг, Лис, Гли, Сер, Асп, Тр, Глу, Про, Ала, Вал, Мет, Иле, Фе, Леу Бендот на аланин бил толку слаб што овде е дефинитивен Изјава не може да се даде. За валин и метионин, како и за фенилаланин и леуцин, лентите се преклопуваат на таков начин што не е можна јасна идентификација. Можевме да го одредиме следниве AS од примерокот на желатин: Thr, Hypro, Ala, Met/Val, Pro, Phe Во овој случај, идентификувањето на Met и Val врз основа на лентите не беше јасно можно. Според нашиот DC, најважната аминокиселина во желатин во однос на количината би бил треонин. Според структурната формула, сепак, оваа позиција треба да биде доделена на глицин. Страница 4 од 4

5 3. Карактеризација на млечна маст 3.1 Број на јод Бројот на јод е определен од количината на титриран Na 2 S 2 O 3 со употреба на следнава формула: g јод (10ml 0,1 n Na2S 2O3) 0, јод број = 100 g мас Табела 3: Определување на јоден број ml Na 2 S 2 O 3 јоден број [g јод/100 g маснотии] мол јод/100 g маснотии путер 6,3 42,68 0,34 6,4 41,53 0,33 маслиново масло 1,4 99 .21 0,78 1,8 94,6 0,75 Масло од ленено семе 1,7 191,5 1,51 1,3 200,73 1,58 Пример пресметка: 42,68 g јод/100 g маснотија (јоден број) = 0, 34 мол јод/100 гр маснотии 126,9 (молекуларна тежина) страница 5 од 5

6 3.2 Број на сапонификација Бројот на сапонификација е определен од количината на титрирана HCl користејќи ја следнава формула: Табела 4: Одредување на бројот на сапонификација ml HCl сапонификација број [mg KOH/g маснотија] Просечна молекуларна тежина на масните киселини [g/mol] Путер 3, 53 4 3 199,5 281,20 Маслиново масло 5,5 157,5 356, 71 Трибутирин, 49 мг KOH број на сапонификација g маснотија Пример пресметка: (10 ml ml 0,5N HCl) 28 = g специфицирана маст ((10 ml 3,8 ml HCL) ) x 28)/0,8g маснотии = 217mg KOH/g маснотии 217mg KOH/g маснотии x 1/56100 mg/mol = 0,004mol KOH/g маснотии = X 1/X = 258,53g/mol (просечна молекуларна тежина на масните киселини ) Просечен број на двојни врски Бидејќи јодот се приврзува само на двојните врски, јодниот број може да се користи директно за да се одреди бројот на двојни врски. Претпоставуваме дека 1 mol од I 2/100g одговара на 1 mol двојни врски. Табела 5: Број на двојни врски Број на јод [g јод/100 g маснотии] мол јод/100 g масти mol двојни врски/100 g маснотии путер 42,68 0,34 0,17 41,53 0,33 0,16 Маслиново масло 99,21 0,78 0, 39 94,6 0,75 0,37 Пример пресметка: страница 6 од 6

7 42,68 g јод/100 g маснотии = 21,34 g I 2/100 g маснотии 21,34 g I 2/100 g маснотии/126,9 (молекуларна тежина) = 0,17 mol I 2/100 g маснотии = 0, 17 mol двојни врски/100 g маснотии 4. Содржина на калциум и фосфат Содржина на калциум: Табела 6: Определување содржина на калциум Киселина сурутка Сурутка од сурутка ml EDTA 7,5 3,2 ml EDTA 7,8 3,4 ml EDTA 7,9 3,8 Просечна вредност 7,73 3, 47 mmol EDTA 0,08 0,03 Количината на EDTA во mmol одговара на содржината на Ca 2+ во mmol/5 ml сурутка. Содржината на Ca 2+ во ммол/л млеко може да се пресмета од средните вредности на соодветните резултати. Пресметка: (mmol Ca 2+ x ml сурутка -1) x 2000 бидејќи 5 ml сурутка одговара на 2,5 ml млеко. Од овие резултати, количината на јони на калциум во 100 ml млеко може да се пресмета со употреба на молекуларна тежина на калциум (40,08 g/mol). Страница 7 од 7

8 Табела 7: Конверзија: калциум во млечна киселина млечна сурутка сурутка ммол Ca2 +/l млеко 30,93 13,87 mg/100 ml млеко 123,98 55,58 Пример пресметка: 0,08 mmol EDTA/5 x 2000 = 30,93 mmol Ca 2 +/л млеко 30,93 mmol Ca 2+/l млеко * 40,08 (молекуларна тежина)/10 = 123,98 mg/100 ml млеко Содржина на фосфат: Следниве вредности на фосфат се утврдени од линијата за калибрација за нашите три примероци на прегради од киселина: Табела 8: Одредување на содржината на фосфатот со употреба на линијата за калибрација Примерок Extincti ml фосфат мг фосфат мг фосфат/L на 1 0,1286 1,1 0,15 136,36 2 0,1482 1,25 0,17 136,0 3 0, 1386 1,2 0,16 133,34 Фактор на конверзија:

8.55 4-та дискусија 1.0 Врнежи во киселина На pH 4,6 може да се забележат врнежи на казеин. На овој ph казеинот ја достигнува својата изоелектрична точка. Нето-полнежот на целата молекула е неутрален при оваа pH вредност, па затоа станува нерастворлив во вода и таложува. Изоелектричната точка определена на овој начин одговара на соодветната pH вредност од литературата. 1.1 Врнежи од мрежи Со врнежи од сирење, врнежите од казеин се активираат на различни начини. Лабораторијата осигурува дека мицелите на казеин се уништени и казеинот натаму се таложи (обично е присутен во колоидно растворена форма во млеко.) По додавање на 1 ml раствор од лен, казеинот се таложи по 210 секунди. Во вториот примерок, откако беа додадени 2 ml, врнежите се случија по 55 секунди, што одговара на страница 8 од 8

10 3.2 Број на сапонификација Според нашите резултати, маслиновото масло содржи најдолги масни киселини, трибутиринот содржи масни киселини кои се скоро 2 пати пократки, додека путерот има малку поголема вредност од трибутиринот. 4. Содржина на калциум и фосфат Содржина на калциум: Содржината на калциум во млечната сурутка е значително помала од онаа во киселната сурутка. Ова се совпаѓа со резултатите од експериментот, дел 1.3, каде што бевме во можност да демонстрираме потрошувачка на јони Ca ++ за активноста на ензимот на рене. Спротивно на тоа, не е потребен калциум за кисели врнежи, така што содржината на калциум е скоро иста како и на почетокот на експериментот. Содржина на фосфат: Со мало отстапување имаме содржина на

136mg фосфат/л млеко може да открие. Истрагата е спроведена на преградата со киселина, т.е. на супернатантот на млекото фракционирано со кисело таложење и центрифугирање. Страница 10 од 10

11 Користена литература:! # "% $ & ('*), + $ .- 0/21),), + $"% $: 9 KLM # NOQPSRTJUVXWZY [\ S] ^ _ # `ba cdcea [f gjfbhjijkml фон pq r% str5uv wbijwxwzy

wj J C ƒj ƒjˆ Š Œ Ž: J Ž% Z S Ž # š œ ž. oÿ J m J J š z 5 «ªB%. % ² ²j³µ%. ¹ 0ºCºJž »2¼½¾¼ ÁÀÂCÃ À Ç.Ç5ÀE» ÊÌÊ5ÊÌÊÇÆ¼ Í ÏCÏJÍoÐ ÑJÒmÓ ÍoÔ Õ: Ö% Øt 5ÙËÚ ÛšÑCÛxÛQÜ% ÝÞÁÛjßáàJàJâ Страна 11 од 11