Глушец модел на протокол за парцијална опструкција на цревата (во превод на германски јазик)

Резиме

Опструкцијата на цревата е делумна или тотална блокада на цревата што може да предизвика силна болка во стомакот, гадење, повраќање и спречување на преминување на столицата. Овој метод за создавање на делумни интестинални опструкции кај глувците е сигурен при проучувањето на механизмите што лежат во основата на патолошкиот клеточен раст и смрт во цревата.

Апстракт

Вовед

Опструкцијата на дебелото црево е делумна или целосна блокада на тенкото или дебелото црево што спречува варење храна, течност и гасови да се движат низ цревата 1. Поради опструкцијата, блокадата предизвикува задебелување на цревните wallsидови, стеснување на лумен- 2. Опструкција на дебелото црево може да се појави од абдоминална или карлична хирургија што предизвикува абдоминална адхезија на аранжман на ткиво или од нарушувања на ГИ, како што се инфламаторно заболување на цревата (Кронова болест), дивертикулитис, хернија, волвулус, стегање, интусусцепција, запек, импецијација на измет, псевдо опструкција, рак и тумори 3, 4, 5. Цревните блокади во овие случаи често доведуваат до хипертрофија на tunica muscularis на цревата 6 .

PO на луменот предизвикува проширување на цревата и дебелина на мазниот мускулен слој околу опструкцијата како одговор на потребата за понатамошно зголемување на функционалната перисталтика 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13. Modelsивотински модели на интестинална PO беа дизајнирани да ја проучуваат хипертрофијата на мазните мускули кај глувци 7, стаорци 10, заморчиња 11, кучиња 12 и мачки 13, кои постојано развиваат слична хипертрофија во цревните мускулни слоеви.

Тука предлагаме протокол за глувче за интестинална операција на ПО со силиконски прстен. Сигурно примаат ПО операција Глувците произведуваат хипертрофија во туника мускуларис на тенкото црево. Во рамките на хипертрофичните мускули, SMC, ICC, PDGFRα + и невронските клетки се драстично ремоделирани.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Протокол

Следниот протокол е одобрен од Комитетот за грижа и употреба на институционални животни (IACUC) на Универзитетот во Невада-Рено (UNR) Anивотински ресурси и ги исполнува сите институционални етички упатства во врска со употребата на лабораториски животни.

Добијте зрели (стари 4-6 недели) C57BL/6 глувци со тежина од 20-30 g. Ставете ја колонијата лабораториски глувци во централизирана станица за животни во UNR Animal Resources.

(2) делумна хирургија на опструкција

Забелешка: Операциите се вршат во просторија посветена на хируршки интервенции. Сите хируршки инструменти се автоклавирани пред операцијата. Стерилни хируршки наметки и ракавици треба да ги носи цело време персоналот во операционата сала.

3,0 см должина на абдоминална инцизија со скалпел од сечилото бр. 15 за да се осигура дека е засечена само кожата и да се избегне сечење во мускулоперитонеалниот слој во овој момент. Користете форцепс и хируршки ножици, внимателно одделете ја кожата од мускулоперитонеалниот слој без да направите засек, мускулоперитонеалниот слој. Откако слоевите се доволно разделени (приближно 1 см х 4 см), идентификувајте ја линеа алба на мускулоперитонеалната рамнина и пресечете ја

2 см по должината на линеа алба за изложување на интраперитонеалната празнина со микро-форцепс и ножици.

Прецизно лоцирајте го и идентификувајте го додатокот. Полека и нежно извадете го слепото црево од интраперитонеалната празнина со микро-форцепс, донесете ги проксималните дебелото црево и илеумот со додатоците надвор на стерилната завеса. Веднаш навлажнете го цревното ткиво со 0,9% стерилна солена натопена газа и одржувајте ги изложените ткива постојано навлажнети додека се надвор од абдоминалната празнина.

Пронајдете ја и идентификувајте ја мезентеријата помеѓу илеумот и проксималното дебело црево. Направи засек (

3. Постоперативно набудување.

По завршувањето на операцијата, преместете ги животните во инкубатор во просторија за обновување каде што се регулирани температурата и влажноста. По операцијата, следете ги животните на секои 15 мин. Во текот на првиот час, а потоа на секои 30 минути во текот на вториот час додека животните се во инкубатор.
Откако ќе заврши пропишаното набудување, преместете ги животните во нивниот индивидуален кафез и следете ги секојдневно за клинички индикации болка 18 и да се осигурате дека хируршката рана е правилно присутна без знаци на компликации (заздравувањето е дехисенција).

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Резултати од репрезентацијата

Илустрација 1: Делумна интестинална опструкција хируршки предизвикана во модел на глушец. ПО беше хируршки предизвикана. Глувците стари еден месец биле под анестезија, стомакот им бил отворен преку засек, околу илеумот бил ставен силиконски прстен, а отворот бил затворен со шиење. На глувците кои биле подложени на операција им било дозволено да се опорават 8 или 13 дена. Возраста и полот на SO глувците биле оперирани на ист начин како и глувците PO, освен што немало поставување на соодветни прстени. (А) Бруто слики на ГИ тракт кај глувците кои биле подложени на операција за ПО или СО. Слики се на глувци на 8 и 13 дена по операцијата (Б) ГИ-тракт расчленуван од глувци во А. Тенкото црево возводно од прстенот беше проширен на 8 и 13 дена по операцијата по ПО, а фекалните пелети во дебелото црево беа исто така помали и на 8 и на 13 дневна операција од пост-ПО во споредба со 13 дена по ПО SO операции глувци поради делумно опструктивен силиконски прстен. Скалите се 0,5 см. Кликнете овде за поголема верзија на оваа бројка.

Слика 2: Мазен мускулен слој модифициран во моделот на хируршки глушец. Претставничко боење со H&E на пресеци на илеум од цревни PO SO и без глувци што не држат (НЕ). Слоевите на мазните мускули (СМ) и мукозните (Му) се подебели PO глувци на 8 и 13 дена по операцијата после PO, отколку забелешките и без глувци. Скалите се 50 μm. Кликнете овде за поголема верзија на оваа бројка.

Слика 3. Динамичко клеточно ремоделирање при хипертрофија на мазните мускули како резултат на делумна опструкција на цревата. Претставнички конфокални слики со ласерско скенирање на пресеци на хипертрофичен илеален дел од PO, т.е. и без глувци. -Потеини кои бојат со антитела (црвено) на MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα + клетки) или PGP9.5 (NC, невронски клетки), Co обоени со DAPI (сино). SMC во мукозните мускули (MM), кружни мускули (CM) и надолжни мускулни слоеви (LM), како и PDGFRα + клетки во длабоки мускулни плексуси (DMP), регионот на Ауербах (MY) и субсерозалниот регион (SS) пораснаа во хипертрофичен илеум на 8 и 13 дена пост-ПО хирургија на МКС во ДМП, МО и СС, Ауербах плексус (МП), субмукозен плексус (СП), субсерозален НЦ (СС) и ентерични моторни неврони (ЕМН) беа амортизирани. Решетките за скали се 50 μm. Кликнете овде за поголема верзија на оваа бројка.

Слика 4. Резултати од силиконски прстени кои се премногу големи, премногу мали или не се на место на дебелото црево. (А) нема да се појави хипертрофија на мазни мускули во илеумот ако прстенот е преголем за да предизвика запек. Прстенот направи малку или без блокада на илеумот. (Б) цревна исхемија се јавува во илеумот кога прстенот е премал. Прстенот измисли скоро целосна блокада на илеумот, што може да го оштети ткивото и да доведе до рана смрт пред да се развие хипертрофија. (C) Хипертрофија на мазни мускули во цревата се развива поради лажен прстен. Прстенот на дебелото црево беше оштетен од содржината на луменот (измет) што се движеше надолу, оштетувајќи ја мезентеричната васкулатура и предизвикувајќи масовно крварење во цревата. Кликнете овде за поголема верзија на оваа бројка.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.

Дискусија

Покажавме дека глувците кои примаат операција на цревата ПО, постојано и репродуктивно развиваат цревна хипертрофија на мазните мускули, што имитира интестинална опструкција на човекот. Операции за интестинална опструкција се развиени за разни животни како што се глувци 7, стаорци 10, заморчиња 11, кучиња 12 и мачки 13. Моделот на глувче на интестинална опструкција има време, цена, големина и фенотипски предности во однос на другите модели на поголеми животни. Развојот на хипертрофија кај глувци или стаорци трае само 10-14 дена 10, во споредба со 2-4 недели кај заморчињата, кучињата и мачките 11, 12, 13. Трошоците за купување и одржување на глувци се исто така огромна финансиска корист во споредба со другите модели. Покрај тоа, глувците се мали и лесни за употреба за операција на ПО. Што е најважно, глувците кои примаат ПО операција постепено и опширно развиваат хипертрофија во тенкото црево, додека другите поголеми животни развиваат помалку обемен раст.

Овој протокол за операција на ПО се смета за голема операција за глувци. Сите хируршки инструменти и материјали треба да се стерилизираат пред употреба, а операцијата треба да се изврши во чиста околина на посебна операциона сала за да се минимизира загадувањето, што може да доведе до инфекција и воспаление кај глувците. Покрај тоа, треба да се даде ослободувач на болка за глувци по операцијата. Имаме верзија на бупренорфин со бавно ослободување, која е ефективна до 7-8 ч-22. Покрај тоа, по операцијата, глувците имаат потешкотии во џвакањето и голтањето на цврста храна. До 5 дена по операцијата, на глувците им беше дадена мека храна (цврста диета со малку вода додадена за омекнување на храната) и се префрлија на нормална цврста храна по 5 дена.

Нашата операција на цревната ПО обезбедува ин виво модел на хипертрофија за интестинална опструкција во која SMC, ICC и PDGFRα + клетките се невообичаено преобликувани. Овој модел на ПО е исто така идеален за разбирање како ентеричните неврони се менуваат со ПО и како се одразуваат главните моторни активности во тенкото и дебелото црево 23. Овие клетки можат да се обноват динамично под патолошки услови, како и под култивирани услови 15, 16. Забележавме дека овие клетки кај SO глувците се однесуваа малку поинаку од вообичаените глувци без операција (Слика 2) и слика 3) Повеќето интестинални опструкции се јавуваат преку абдоминални адхезии развиени по операцијата што доведува до хипертрофија на мазни мускули 3, 4, 5, 21. По операцијата SO, исто така, откривме дека SMC, ICC и PDGFRα + клетките се малку хипертрофични во тенкото црево, во споредба со (Слика 3), што укажува на тоа дека самата хирургија може да предизвика хипертрофија на цревните мазни мускули. Ако е така, SO операцијата не е целосна негатива за операцијата на PO. Не и SO треба да се користат како споредба со PO цревата.

Сумирајќи, најдовме ефективен, временски, сигурен и повторлив PO хируршки протокол кај глувци кои произведоа силни интестинални пречки. За време на развојот на попреченоста, SMC, ICC, PDGFRα +, како и невронските клетки динамички се преобликуваат во различни ткивни слоеви и локации. Овој in vivo модел на опструкција нуди нови сознанија за нашето знаење за тоа како се случуваат фенотипски промени во опструираното црево на клеточно ниво.

Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.