Можни употреби на проточна цитометрија со употреба на FACS - LABOKLIN GMBH; КЛИНИЧКА лабораторија
Кратенката FACS се залага за ѓлуоресценцијаакултивиран вел сorting. Ова е посебна форма на проточна цитометрија во која клетките обележани со флуоресценција можат да се измерат и анализираат. Клетките течат во проток на течност низ ласерски зрак и се одредуваат големината на клетката, внатрешната структура и релативниот интензитет на флуоресценцијата. Постојат антитела означени со флуоресценција, достапни за бројни типови на клетки, особено лимфоцити, кои се насочени против имунофенотипските карактеристики на површината (кластер на диференцијација, скратено „ЦД“) на клетките. Користејќи ги овие ЦД-маркери, клетките сега можат поблиску да се испитаат и идентификуваат. На пример, цитотоксичните Т-клеточни лимфоцити се позитивни на CD3 и CD8, но негативни на CD21 и CD4.
Овој преглед се користи во рутинска дијагностика, особено во хематологијата. Бидејќи материјалот за испитување мора да биде во течна форма, примероците од крв се особено соодветни. За да се обезбеди значаен резултат, важно е клетките да бидат недопрени, па испитувањето треба да се изврши што е можно поскоро, во рок од најмногу 3 дена. На ЛАБОКЛИН уредот FACS се користи за разни важни прегледи.
1. Тромбоцитни антитела
Зголемениот имуноглобулин (претежно IgG) на површината на тромбоцитите доведува до предвремена фагоцитоза на тромбоцитите од страна на макрофагите со последица на тромбоцитопенија. Оваа имунолошки посредувана тромбоцитопенија (ИМТ) може да биде примарна или секундарна. Ретката примарна форма е предизвикана од автоантитела насочени против епитепите специфични за тромбоцитите. Секундарната тромбоцитопенија со посредство на имунитет, е поврзана со разни лекови, инфективни агенси (бактерии, вируси, протозои или хеминти), неоплазија и други имунолошки посредувани болести.
Примарниот ИМТ се забележува претежно кај кучиња, двапати почесто кај женски отколку кај машки, во сите возрасни групи, но најчесто кај животни на средна возраст. Предрасположени раси се Кокер Спаниел, минијатурна и играчка пудлица, староанглиско овчарско куче (Бобтеил), златен ретривер и германско овчарско куче.
Измерениот број на тромбоцити е обично помал од 30 G/l со примарниот IMT отколку со секундарната форма.
Дијагностиката може да се изврши со употреба на FACS со помош на откривање на анти-тромбоцитни антитела. Се спроведува двојна инкубација за откривање на IgG врзан за тромбоцити. Нивото на антитела од 30% се проценува како позитивен доказ за IMT. Материјалот за примерок (ЕДТА целосна крв) не смее да биде постар од 3 дена за да се постигне проценета имунолошка боење. Испитувањето мора да се започне пред почетокот на имуносупресивната терапија, во спротивно ќе се појават лажно-негативни резултати. Понатамошни дијагностички опции се дијагностичка терапија со кортизон и откривање на мегакариоцитна хиперплазија во коскената срцевина.
2. Статус на клеточен имунитет
Клеточниот имунолошки статус вклучува комплетна крвна слика, како и одредување на релативниот и апсолутниот број на периферни лимфоцити: Б клетки, вкупни Т-клетки, како и ЦД4 + (Т-помошни клетки) и ЦД8 + клетки (цитотоксични Т-клетки).
Имунофенотипизацијата на крвта се заснова на селективно препознавање на антигените на површината на клетките со флуоресцентни моноклонални антитела обележани со боја, користејќи проточна цитометрија (FACS). Испитувањето на клеточниот имунолошки статус е индицирано ако клиничките симптоми сугерираат на примарно или секундарно нарушување во клеточниот имунолошки систем.
Кај кучињата, утврдувањето на имунолошкиот статус може да биде корисно при дијагностицирање на пиодерма, демодикоза, системски лупус еритематозус и лајшманијаза и вродени дефекти на Т-клетките. Следните прегледи може да се користат во терапија со лекови за контрола и прилагодување на дозата.
Кај коњите, се користи за разјаснување на чести и пролонгирани инфекции.
Одредувањето на имунолошкиот статус игра посебна улога во инфекцијата со вирусот на имунодефициенција на мачки (FIV).
Вирусот предизвикува хронични, постојани инфекции со прогресивен тек на болеста. Инфекцијата на имунокомпетентни клетки постепено го исцрпува имунитетот.
Вирусот покажува изразен тропизам за Т-лимфоцитите и макрофагите. Функциите на Т-лимфоцитите се главно погодени од оштетувањето, при што преовладуваат квантитативни и квалитативни дефекти во популацијата на Т-помошните клетки. Прво, зголемувањето на ЦД8 + клетките доведува до процентно намалување на бројот на ЦД4 + клетки. Бројот на ЦД8 + клетки останува зголемен во текот на асимптоматскиот период на инфекција и се намалува само релативно кратко пред да се развијат клинички симптоми. На почетокот на инфекцијата се заразуваат главно ЦД4 + клетки; тука се наоѓаат најголемите количини на вирус. Како што напредува инфекцијата, апсолутниот пад на ЦД4 + клетките доведува до намалување на количникот ЦД4 +/ЦД8 +.
Хуморалната имунолошка одбрана покажува оштетување на нејзината функција релативно доцна. Намалување на бројот на Б-клетки обично се случува само во последната фаза. Количината на вирус во крвта повторно се зголемува значително, но одговорот на антитела повеќе не се случува.
Создавањето на имунолошки статус може да обезбеди проценка на прогнозата во присуство на примарен или секундарен имунолошки дефицит.
3. Диференцијација на леукемијата
Со лимфоцитоза од> 30 G/l или со лимфопролиферативна болест (леукемија, лимфом фаза V) потврдена со клонално тестирање (PARR) со минимален број на леукоцити> 5 G/l, диференцијација на леукемија може да се изврши со употреба на FACS. Со користење на ЦД маркери за идентификување на клетките, овој преглед може да се искористи за класифицирање на акутна или хронична леукемија (ЦД34: маркер на матични клетки), што може да обезбеди важни информации за прогнозата и изборот на терапија. Понатаму, неопластичните клетки можат да се поделат на Б-клетки и Т-клеточни лимфоцити и под-типови.