Одговорот на туморот се одредува според генетскиот профил на пациентот кај пациенти со рак на ректумот

генетскиот

  • предмети
  • апстрактен
  • вовед
  • Пациенти и методи
  • Дизајн на студија и регрутирање на пациенти
  • Радиохемохирургија
  • Проценка на ефективноста на терапијата
  • Тестови за генотипизација
  • Статистичка анализа
  • Резултати
  • Поврзување на TRG со клинички/демографски карактеристики и полиморфизми на герминативната линија преку едноваријална анализа
  • Поврзување на TRG со клинички/демографски карактеристики и полиморфизми на герминативната линија преку мултиваријатна анализа
  • Поврзување на TRG со клинички/демографски карактеристики и полиморфизми на герминативната линија преку анализа на рекурзивно партиционирање
  • дискусија

Видео: Едноставен нов тест на крвта што може да фати рак рано | Myими Лин (ноември 2020 година).

предмети

апстрактен

вовед

Неодамна се покажа дека генетската варијабилност на домаќинот е клучна компонента во персонализацијата на хеморадијацијата на ракот, особено во неоадјувантниот третман на локално напреднат карцином на ректум. 17, 18, 19 Голем дел од фармакогенетските студии се фокусираат на единствен кандидат ген за кој се верува дека е силно поврзан со клиничкиот исход на лекот. Неодамна е избран посеопфатен пристап кој ја зема предвид сложената интеракција на различните метаболички и клеточни патишта вклучени во асоцијативната терапија.

Во оваа студија, користевме пристап базиран на патеки и избравме 25 полиморфизми во 16 различни гени кои играат клучна улога во ракот на ректумот pCRT и особено во зрачењето (XRCC1, XRCC3, ERCC1, ERCC2, RAD51, hMLH1, hMSH2, hOGG1, GSTP1, GSTT1, GSTM1 и GSTA1 гени, флуоропиримидини (гени TYMS и MTHFR) и мултирезистенција (ABCB1 и ABCC2 гени) Ние имаме нивна индивидуална поврзаност со TRG и интеракциите помеѓу овие фактори помеѓу генот и Целта на студијата беше да се идентификува специфичен генетски профил што го прави TRG најчесто признат параметар на одговор на тумор кај локално напредни пациенти со карцином на ректум третирани со pCRT, како и помеѓу ген и околина со користење на анализа на дрво за класификација и регресија (CART) беа предвидени.

Пациенти и методи

Дизајн на студија и регрутирање на пациенти

Помеѓу декември 1993 година и јуни 2006 година, 277 пациенти со умерен и низок примарен ректален аденокарцином подложени на pCRT биле запишани во CRO-Националниот институт за рак во Авиано, Италија (106 пациенти) и Општата болница на Медицинскиот факултет на Универзитетот во Падова, Падова, Италија (171 пациент). Проценката на пациентите пред третманот вклучува целосна клиничка историја и физички преглед, колоноскопија, целосен број на крвни клетки, рендгенски преглед на градите, ултразвук на црн дроб и трансректален ултразвук, карлична компјутеризирана томографија и карциноембрионски тест за антиген. Сите постапки беа прегледани и одобрени од комитетот за институционален преглед на секоја институција учесник, а сите пациенти потпишаа писмена согласност за информирање пред да влезат во оваа студија. Триесет и девет пациенти беа исклучени од студијата затоа што не биле подложени на радикална операција или имале метастатско заболување. Карактеристиките на туморот и пациентот се опишани во Табела 1а.

Радиохемохирургија

Хеморадиотерапија и хируршки третмани се опишани на друго место (Табела 1б). 6, 20 Накратко, на пациентите им беше дадена надворешна терапија со зрачење користејќи линеарен забрзувач од 10-18 МВ. Клиничкиот целен волумен го вклучуваше примарниот тумор со мезоректумот, задните wallsидови на мочниот меур и простатата/вагината и внатрешните карлични нодули. Користена е техника поле или поле во форма на три или четири. Администрирана е доза на зрачење од 45-50,4 Gy (според протоколите за последователно испитување користени во периодот разгледан за анализа) со конвенционална фракционирање од 1,8 Gy на ден за 5 дена во неделата.

Хемотерапијата се состоеше од флуоропиримидин (главно 5-флуороурацил (5-FU)) сам или во комбинација со други лекови (платински деривати, иринотекан или гефитиниб). Ралтитрексд се користеше наместо 5-FU кај подмножество на пациенти (Табела 1б). Варијациите во предоперативната терапија биле поврзани со (а) времетраењето на третманот (во првите неколку години од студијата, 5-FU болус во комбинација со ниски дози на леуковорин и РТ со надворешен зрак, 45 Gy во 25 фракции и подоцна 5-FU- Се пријавил Болус). FU беше администриран со континуирана венска инфузија и надворешен млаз (RT, 50, 4 Gy во 28 фракции); б) вклучување на пациентите во потенцијалните клинички студии.

Проценка на ефективноста на терапијата

Радикалната природа на хируршката интервенција и поставувањето на тумори, нодули и метастази се пријавени според класификацијата на Американскиот заеднички комитет за рак на тумори, јазли и метастази (ТНМ). 21 Целокупната преостаната област на туморот беше испитана за хистопатолошки преглед и хистопатолошко стадирање на тумор по терапија со зрачење (ypT). Мезоректалниот хируршки маргинален статус и промените на лимфните јазли беа опишани во патолошките извештаи. Патолошкиот одговор на туморот на предоперативната терапија се засноваше на методот опишан од Мандард и сор. 22 за карцином на хранопроводот: TRG-1, патолошки комплетен одговор; TRG-2, присуство на остаток на клетките на ракот дисперзирани од фиброза; TRG-3, фиброза што расте од остаток на клетките на ракот; TRG-4, остаток на клетките на ракот, кои растат од фиброза; и TRG-5, нема регресивни промени.

Тестови за генотипизација

Геномската ДНК е извлечена од периферната крв со помош на комплет за подготовка на шаблонот Високо чиста PCR (Roche Diagnostics GmbH, Манхајм), пакет за таленти (Талент, Трст, Италија), мини комплет QiaAmp DNA (Qiagen, Валенсија, Калифорнија, САД) Комплет за ткива DNeasy (Qiagen) за екстракција на ДНК од туморско ткиво вградено во парафин во 49 примероци. Позитивните контроли беа вклучени во анализите.

Пиросеквенционирање (Биотажа, Упсала, Шведска) беше искористено за анализа на: ABCB1 -3435C> T (rs1045642), ABCB1 -1236C> T (rs1128503), ABCC2 -24C> T (rs2273697), ABCC2 -1249G> A (rss7176) * Б (rs3957357), RAD51 -135G> C (rs1801320), hMLH1 -676A> G (rs1799977), hMSH2- GIVS12-6T> C (rs2303428), hOGG1 -1245C> G (rs1052133 T (rs86) > T (rs1799782), ERCC2 -35931A> C (rs13181), ERCC2-23591G> A (rs1799793). ПЦР-засилувањата беа извршени во градиент на Eppendorf Mastercycler со TaqGold DNA полимераза (AB Applied Biosystems, Warrington, UK). Детали пиросеквенционирање, низи на прајмери ​​и услови на PCR се достапни на барање.

Пред-дизајнирани тестови за генотипизација на Taq Man SNP со Applera TaqMan Universal Master Mix се користеа на ABI 7900HT (AB Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) според упатствата на производителот за да се разликуваат следниве SNP: ERCC1 -8092C> A (rs3212986), ERCC1 -19007T> C (rs11615), XRCC1 -28152G> A (rs25487), XRCC3 -4541A> G (rs1799794), GSTP1-313A> G (rs947894), GSTP1 -5C> T (rs11894 -67118 T-T) ), MTHFR -1298A> C (rs1801131).

Нулта генотипови GSTT1 и GSTM1 и TYMS 28bpVNTR (rs34743033) беа анализирани со PCR заедно со електрофореза на гел од агароза. 23, 24

TYMS del6bp1494 (rs16430) беше анализиран со полиморфизам на должината на фрагментот со ограничување на PCR. 24

Проценката на хаплотипот е извршена со употреба на Фаза 1.0, која е достапна на веб-страницата за третман на фармакогенетика на астма (http://www.pharmgat.org/).

Статистичка анализа

Поврзување на TRG со клинички/демографски карактеристики и полиморфизми на герминативната линија преку мултиваријатна анализа

Според моделот на логистичка регресија, полиморфизмите hOGG1 -1245C> G и MTHFR -677C> T беа значителни предиктори (P T задржа само еден незначителен тренд на поврзаност со TRG во мултиваријантната анализа (P = 0,057) (Табела 7).

Поврзување на TRG со клинички/демографски карактеристики и полиморфизми на герминативната линија преку анализа на рекурзивно партиционирање

Рекурзивната партиција беше искористена за понатамошно разјаснување на односите меѓу генот и генот и опкружувањето помеѓу добрата реакција (TRG2) и не-одговорите (TRG4). Анализата овозможи да се идентификуваат 10 подгрупи на пациенти според генотипови и клинички/демографски карактеристики со различен степен на веројатност за развој на TRG TR2 (Слика 1). На слика 1, секое поле се нарекува „јазол“ и претставува подмножество на набудувањата во целиот сет на податоци. Бидејќи недостасува еден елемент на податок во комбинацијата на генотип, збирот на набудувања во ќерските јазли е 186 наместо 187 како што е наведено во матичниот јазол. Секој (неразделен) терминален јазол се идентификува со единствена комбинација на генотипови на маркери, а се пријавува процентот на пациенти кај кои се јавува TRG2 во секој терминален јазол.

според

Застапеност на картичката со комбинацијата на обележувачи што значително го предвидува TRG. Фракциите покажуваат пациенти со TRG = 1-2 во споредба со вкупниот број на пациенти (пациентите со TRG = 3 беа исклучени од оваа статистичка анализа) и TRG = 1-2 проценти во загради. Темно сивите кругови претставуваат крајни јазли со голем ризик од TRG = 1–2; светло сиви кругови претставуваат терминални јазли со среден ризик од TRG = 1-2; Плоштадите претставуваат крајни јазли со мал ризик од TRG = 1–2.

Сите 25 испитани полиморфизми на герминативната линија, како и клиничките и демографските карактеристики беа вклучени во моделот. Првиот јазол на дрвото е одреден со полиморфизмот hOGG1, кој разликува две групи: -1245CG или -1245GG наспроти -1245CC. Пациентите со генотипови hOGG1 -1245CG или -1245GG понатаму се поделени врз основа на ERCC1 -8092C.> Полиморфизам, Група 1 (77% шанса да добијат еден или два TRG за генотип -8092CC) и Група 2 ( 31% од одговорот за генотипови -8092CA или -8092AA). За пациенти со генотип hOGG1 -1245CC, другите разликувачки полиморфизми биле MTHFR -677C> T, ABCB1 -3435C> T, ERCC1 -8092C> A, XRCC1 -28152G> A, ABCC2 -1249G> A и XRCC3 -4541A> G. Es беше откриено дека полот на пациентот исто така делува како дискриминатор, со поголем процент на TRG TR2 кај машки пациенти. Крајните јазли беа поделени во три ризични групи врз основа на стапката на случаи: ниската (стапка)

Во оваа студија решивме да користиме систем за класификација во три точки (TRG TR2, TRG 3 и TRG4) со цел да ги поделиме пациентите во подгрупи со значително различни прогнози според претходните студии. 13 Со два генетски маркери, пронајдена е значајна диференцијација помеѓу добри (TRG сиромашни 2) и лоши (TRG4) одговори, додека никој од анализираните полиморфизми не беше во можност да ги идентификува средните одговорите на TRG 3, иако имаше значителен тренд во трите групи беше утврдено со тестот χ 2. Овој истражувачки наод може да ја поддржи граничната состојба на овие пациенти или од хистопатолошка или од прогностичка гледна точка, иако понатамошните студии за потврда може подобро да ја разјаснат оваа тема.

Сумирајќи, нашите резултати покажаа дека треба да се спроведат полигенетски студии засновани на патеки за да се потенцира генетскиот ефект врз сложените фенотипови како одговор на туморот на третманот. Важна улога играат два полиморфизма поврзани со поправка на ДНК (hOGG1) и пат на фолати (MTHFR). Нашите податоци исто така сугерираат дека ефектите од интеракциите од повисок ред треба да се земат предвид при проценка на одговорот на туморот на pCRT кај пациенти со рак на ректумот. Способноста да се идентификуваат пациенти со различна можност за реакција, може да им помогне на клиничарите да ја прилагодат терапијата со употреба на поконзервативни процедури, како локална ексцизија, наместо радикална хирургија. Ова е особено важен проблем за pCRT кај карцином на ректум бидејќи јасна придобивка од третманот во моментов е ограничена од високата варијабилност кај пациентите.