Определување на факторот Rh - Синево

Генерални информации

Едно лице се смета за Rh позитивно ако неговите еритроцити го изразуваат антигенот Д, а терминот Rh негативен се однесува на отсуство на антиген Д. Отсуството на Д антиген се наоѓа кај 15-17% од индивидуите во белата популација и е поретко кај другите популации. Кај белата популација, отсуството на антиген Д се должи на бришење на RHD генот, додека кај азиската и црната популација е поврзано со генска деактивација отколку со бришење. .

Некои еритроцити кои изразуваат антиген Д, бараат продолжена инкубација со анти-Д реагенс за аглутинација. Овие еритроцити се сметаат за Д позитивни антигени и се опишани како слаби Д, претходно наречени Д у (во помалку од 1% од случаите). Слабиот фенотип Д се смета дека се јавува преку еден од следниве три механизми 5:

а) наследување на RHD ген кој кодира протеин D со ослабен антигенски израз: тој е почест кај црната популација и е поврзан со Dce хаплотипот, а кај белата популација е поврзан со DCe или DcE хаплотипот.
б) интеракција на генот Д со други гени: индивидуи со ген Д во транс-позиција во однос на генот Ц (на пр .: Dce/Ce) покажуваат ослабен израз на генот Д.

Поединци со слаб Д фенотип од еден од овие два механизма не формираат алоантитела по изложеност на Д-позитивни еритроцити.

в) наследување на ген кој кодира антигенски Д комплекс на кој му недостасуваат некои епитопи, исто така наречен делумен Д; овие лица можат да произведат анти-Д ако се трансфузираат со Д-позитивни еритроцити. Од нив, D VI има најмал број на епитопи и овие луѓе имаат најголем ризик од имунизација, но значително помал од негативните Д лица 3 .

Донаторите со низок Д треба да се сметаат за Rh (D) позитивни; важно е тие да не бидат означени како Rh-негативни, бидејќи слабиот антиген Д може да предизвика имунолошки одговор ако се трансфундира на Rh-негативна индивидуа 1; 3; 5. Личности со слаб Д може да се трансфузираат со Rh-позитивна крв (освен Д VI), а на бремените жени не им е потребна анти-Д 2 имуноглобулинска профилакса; Ако се користи соодветен анти-Д моноклонален реагенс, повеќето антигени детерминанти претходно класифицирани како D u не треба повеќе да се разликуваат од Д во рутински услови. .

Нул Rh-фенотип се јавува кога еритроцитите не изразуваат Rh-антигени со најмалку два можни механизма: наследување на ген кој кодира абнормален Rh-поврзан гликопротеин со нормални RHD и RHCE гени или наследство на мутација на R-поврзаниот RHCE ген негативно. Rh-нулта фенотип е поврзан со структурни аномалии на еритроцити со стоматоцитоза и хемолиза. Овие лица формираат алоантитела кои комуницираат со сите освен со еритроцитите. .

Антителата против Rh се јавуваат со алоимунизација, по некомпатибилни трансфузии во Rh системот или во бременоста. Исклучително ретко, природните антитела можат да се појават во Rh системот, без познати антигени стимули (анти-Е, анти-Ц w), во повеќето случаи клинички ирелевантни 1; 3. Исто така, кај хемолитични имунолошки анемии, автоантителата често имаат активност против Rh-1 .

Повеќето анти-Rh антитела се IgG, особено IgG1 и IgG3 (нецелосни аглутинини), иако некои може да бидат IgM, и обично не го активираат комплементот 5. Врзувачките антитела слични на IgM се обично минливи и се јавуваат на почетокот на имунизацијата 1. Најчести се анти-Д антителата, кои можат да предизвикаат хемолитичко заболување на новороденото и тешки реакции на хемолитична трансфузија. Нивната фреквенција значително се намали со анти-Д профилакса кај Rh-негативни бремени жени со Rh-позитивен фетус. Анти-C, c, E, e антителата се поврзани со хемолитична болест на новороденчето и благи трансфузиски хемолитички реакции 5 .

Rh-печатење на еритроцити се изведува со моноклонални анти-Д серуми кои реагираат во солен раствор и содржат и човечки IgM (што не ја детектира категоријата Д VI) 3 и поликлонални антитела на IgG, а последните може да се користат и во тестот за антиглобулин Д слаб 2. Албумин на човечки или говеда се додава на подготовката на анти-Rh серумот, кој ја модифицира диелектричната константа на медиумот и ја фаворизира аглутинацијата на Rh-позитивните еритроцити 1 .

Препораки за утврдување на Rh фактор

пред трансфузија;
пред инвазивна или хируршка процедура потенцијално поврзана со компликации на крварење за кои може да биде потребна трансфузија;
антепартален и постнатален имунохематолошки мониторинг на мајка и дете;
на крводарителите.

Рутинското тестирање на крвта не означува определување на други Rh антигени, освен Rh факторот D. Определувањето на целосниот Rh фенотип е индицирано кај крводарителите, треба да се земе предвид при трансфузија кај девојчиња и жени во менопауза, кај хронично трансфузирани пациенти и кај приматели со неправилни анти-еритроцитни антитела 3 .

Обука на пациентот - не е потребна претходна обука; информации за третмани со инфузија со макромолекуларни раствори извршени пред утврдување, трансфузиите во последните 120 дена се корисни 4 .

Примерок собрани - а) капиларна крв од пулпата на прстот; б) венска крв 4 .

Контејнер за берба - б) правосмукалка без додатоци или активирачки гел (црвена или безбојна капа); за автоматска метода: 4 ml вакутајн што содржи EDTA (темно-виолетов капак) 4 .

Количината собрана - б) колку што дозволува вакуумот 4 .

Причини за одбивање на доказите - силно хемолизиран примерок 4 .

Стабилност на примерокот - тестот се изведува веднаш, ако тоа не е можно, примерокот се чува 48 часа на 2-8 ° C; за автоматскиот метод, примерокот на крв има стабилност од 7 дена на 2-8 ° C 4 .

Потребна е обработка по бербата - по целосна коагулација на собна температура, серумот и тромбот се отстрануваат. Од преостанатите црвени крвни клетки, 40% суспензија се подготвува во сопствената плазма или во солена вода. За методот на аглутинација на картата, се подготвува суспензија од 5% црвени крвни клетки во специјален медиум за суспензија 1; За автоматска метода, примерокот на крв ќе се центрифугира за да се добие плазма и ќе се вметне во анализаторот (плазмата ќе остане над црвените крвни клетки) 4 .

Метод на определување - следниве методи се изведуваат во лабораториите во Синево:

- хемаглутинација на плочата со анти-Д IgM моноклонален реагенс 4. Определувањето се врши со два различни типа на моноклонални антитела, а тестот вклучува автологна контрола (албуминозна контрола - еритроцитите на пациентот се тестираат со околината во која се содржани моноклонални АЦ), како и контролната група О црвени крвни клетки, Rh позитивни и Rh негативни 1; 3 .

- аглутинација и гел-филтрација на картички со микротреќи кои содржат гел импрегниран со антиген специфичен реагенс за еритроцити (што се утврдува морски или хумани моноклонални антитела) - директен тест на групата АБО и одредување на Ag RH1 (D) и Ag RH 1,2,3 (DCE).

Позната група за контрола и Rh крв се користи при секое испитување на примероците 4 .

- автоматски метод на хемаглутинација на плочи за бунари (во Централната лабораторија во Синево)

Работните плочи (Erytype S) содржат 12 тест ленти со по 8 бунари (1 лента = комплетен ABO тест и Rh фактор). За определување на Rh, се користат 2 суви моноклонални анти-Д IgM серуми, поставени два од бунарите на лентата 4. .

Интерпретација на резултатите

За методот на хемаглутинација на плочата

Приматели на крв и новороденчиња:

Rh (D) позитивен ако се добијат јасно позитивни резултати (> = 2 +) и со анти-Д тест серуми и контролата на автомобилот е негативна;
Rh (D) негативен ако се добијат јасно негативни резултати и со анти-Д тест серумите, без оглед на резултатот од тестот за автомобил.

Потребно е дополнително тестирање доколку се добијат слаби резултати (3 .

Кај дарителите, ако почетниот тест за Д е негативен, треба да се изврши втор тест за откривање на слаб Д (ова не е потребно кај примателите на крв, кои треба да се трансфузираат со Rh негативна крв). Исто така, утврдувањето на присуство на слаб Д кај бремени жени го елиминира непотребниот анти-Д имуноглобулин третман. Пред да го означиме пациентот како слаб Д, мора да се осигураме дека тој неодамна бил трансфузиран со Rh-позитивни еритроцити 2 .

За методот на аглутинација на картичката, позитивната реакција се потврдува само ако контролната микротрепка е негативна. Позитивната реакција се проценува во зависност од дисперзијата на аглутинатите во микротурот од + до ++++, како што следува: - позитивен резултат (++++); - слаб позитивен резултат (+ до +++); - негативен резултат (-).

Интерпретација на резултатот во микроцевката RH1 (D)

Позитивен резултат во микро цевката RH1 (D) укажува на присуство на антиген RH1 (D) на површината на испитаните еритроцити. АБО/RH картичките што се користат во лабораторијата не дозволуваат откривање на сите слабо имуногени Д антигени ниту делумно RH1 фенотип категорија VI (D VI)

За овие посебни антигени мора да се извршат дополнителни тестови.

Интерпретација на резултатот во микротурот RH1,2,3 (DCE)

Позитивен резултат во цевката RH1,2,3 (DCE) укажува на присуство на RH1 (D) и/или RH2 (C) и/или RH3 (E) антиген на површината на црвените крвни клетки што треба да се тестираат. .

Откако ќе се случи реакцијата на аглутинација, секој бунар на работната лента се проценува и фотографира автоматски од анализаторот, резултатите се толкуваат на следниов начин:

Позитивна реакција - присуство на аглутинација (интензитетот се проценува од 1+ - 4+)
Негативна реакција - нема аглутинација
Неубедлива реакција - реакцијата +/- ќе ја толкува лекарот

Сите добиени слики и резултати ги проверува и потврдува лекарот 4 .

Граници и мешање

Лажни позитивни реакции (позитивна албуминозна контрола) 1

црвени крвни клетки во ролни/ролни (миелом, макроглобулинемија на Валденструм) - утврдувањето се враќа по миењето на црвените крвни клетки;
полиаглутинареа;
хемолитична анемија со врели автоантитела (присуство на IgG антитела на површината на црвените крвни зрнца) - групата е обновена со реагенс од кој се отстранува албумин, кој содржи анти-Д врзива способни за аглутинација на црвените крвни клетки во солена суспензија (анти-Д солен раствор).

хемолитична анемија кај новороденото (блокада на Д-антигени места од страна на мајчини антитела) 1;
индивидуа со слаба Rh D - можна слаба и доцна аглутинација; овие случаи се упатуваат на специјализирана служба, каде што слабата определба на Д се прави со употреба на индиректен анти-глобулински тест со анти-Д IgG (нецелосен поликлонален) 1; .