Природа - лесно може да се растера со ветер, вода, животни, машини, PDF документ
Документи
ИДЕНТИФИКАЦИЈА НА СТЕПЕНОТ ОД отпор кон волкот (ТРКА Е)
ВО НЕКОИ ГЕНОТИПИ НА СОНЦЕТО
Марија ДУЦА, Алиона ГЛИЈИН, Викторија ПОПЕСКУ
Одделение за растителна биологија Молекуларни маркери поврзани со гените на отпорност на метли, ќе овозможат подобро разбирање на генетскиот детерминизам на
отпорност на метли во сончоглед и олеснете го раниот избор со скрининг на присуството на неколку специфични ДНК-маркери. Обезбедивме анализа на 29 линии на сончоглед со ознака SCAR RTS05 поврзана со сончогледот Or5 locus con-
Отпорност на потомство кон брумерапот што припаѓа на расата E. Идентификација на 650 bp ампликон кај 27 генотипови открива присуство на ген Or5, недостасува овој засилен производ
кај Xenia ♀ и цитоплазматски машки стерилен генотип # 7 укажуваат на подложност на раса Е. Вовед Лупоаја е ангиосперм холопаразит кој паразитира на корените на земјоделските култури како цветот-
сонце, домати, тутун, грав и други [1]. Сончогледот е нападнат од видот Orobanche cumana Wallr., Што предизвикува голема загуба на овошје во земјите од Источна Европа и Медитеранот [2]. До денес, идентификувани се пет физиолошки раси на Оробанш (А-Е) со различно географско [2,3] и генетско [4] потекло. Така, отпорноста кон расата А ја одредува генот Ор; отпорност на раса Б - од генот Or2, кој исто така дава отпор на раса А; отпорноста на раса Ц се одредува со генот Or3, кој дава отпорност на расите A и B и, соодветно, D - Or4 со отпорност на A, B и C, како и на трката E - Or5 со отпорност на A, B, Ц и Д [5 - 7]. Во последниве години, се потврди појавата на трките F и G (во Шпанија). Отпорни F гени се откриени во некои култивирани генотипови и диви форми на сончоглед и се чини дека даваат отпорност на претходно откриени раси (A-E) [2-4, 8-10].
Контролата на овој паразит е тешка затоа што неколку илјади семиња произведени од една фабрика за волци можат лесно да се распрснат од ветер, вода, животни, машини, почва, итн., Семето останува одржливо 10-15 години [11] и хемиски методи, физички и биолошки користени не го отстрануваат целосно паразитот. Алтернатива е употребата на култури отпорни на волци, така што истражувањето продолжува и денес за откривање и воведување гени отпорни на овој патоген во материјалот за размножување [1].
Употребата на техниката RAPD [12] во комбинација со BSA (анализирана анализа на сегреганти) [13] и употребата на молекуларни маркери тесно поврзани со гените на отпорност овозможија идентификување на овие гени кај различни растенија, како што се гените на отпорност на брашно во Laptuca sativa [13], гените отпорност на јачмен на Rhynchosporium secalis [14], 'рѓа [15] и други. По изградбата на RFLP мапата во сончоглед [16] и BSA, беа идентификувани RFLP маркери поврзани со гените на отпорност на брашно PL1, Pl2 и Pl 6 [17-19]. Сите овие три гени се поврзани со истиот сет на RFLP маркери и формираат група на поврзувачка група 1 [19].
Целта на нашето истражување беше да се идентификува присуството на генот Or5 во некои хибриди и сончогледи. Материјал и методи Карактеристично за студискиот објект. Десет цветни хибриди (F1) служеа како растителен материјал-
(Валентино, Ксенија, Изведувач, Оксана, Виталиа, Дрофа, Турбо, Фаворит, Алказар и Олга), родителски линии на четири хибриди (Изведувач, Оксана, Ксенија, Валентино) и 11 генотипови на андростери означени со броеви од 1 до 11, соодветно. Семенскиот материјал е обезбеден од CCŞ „Magroselect” SRL Сорока.
Ин виво културни услови. Растенијата се одгледуваа во саксии со вегетација, на температура од 24-26 ° C, фотопериодичност од 14-16 часа, влажност од 60%. Материјалот беше собран и анализиран во фаза на 6-8 вистински лисја.
Истражувачки методи екстракција на ДНК. Геномската ДНК беше извлечена од лисјата од сончоглед со ДАН-зол [20]. Прочистување
ДНК се правеше постојано со 100% алкохол, потоа со 75% алкохол. Талогот добиен по сушењето се раствори во автоклавирана дестилирана вода. Концентрацијата на ДНК беше утврдена спектрофотометриски.
PCR реакција. Засилувањето е извршено со специфични буквари SCAR - RTS05, синтетизирани врз основа на почетниот фрагмент од полимерот RAPD - OPJ18_650. Нуклеотидната низа на СКАР маркерот (Алфа ДНК, Канада) е следна:
СТУДИРАМ ОБВИНИ НА ООН И ТАТ СИ СЕ
Весник за наука на Државниот универзитет во Молдавија, 2008 година, бр. 2 (12)
F (5´-TGGTCGCAGATGGACGTGTGGGTG-3´), R (5´- GTCGCAGAGAGTGAGAGAGAGTGT-3´). Реакцијата на засилување е извршена во волумен од 25 μl, содржи дестилирана вода, 5X PCR пуфер, мешавина
на dNTP нуклеотид (2 mM), Taq-полимераза 1u/μl (Германија), прајмер 50 bp и AND - 6 μl. Засилувањето е извршено со употреба на автоматски термоцикл (Корбет, Австралија) со следниве услови: I) денатурација: 94ºС - 4 мин. (циклус); II) 45 циклуси, 1) денатурација: 93 ° C - 1 мин., 2) ренататурација: 63 ° C - 1 мин., 3) издолжување: 72 ° C - 4 мин.; III) специфично издолжување: 72ºC - 6 мин. Електрофореза на производи за засилување се изведуваше во 1,4% агарозен гел во TAE пуфер подолго време.
еден час на 80 V. Гелите беа визуелизирани во УВ-камерата и беа фотографирани. Големината на засилените ДНК фрагменти се спореди со стандардниот маркер (скала од 100pb ДНК, Промега, САД).
Резултати и дискусии Повеќето податоци во литературата потврдуваат за доминантниот моноген детерминизам на отпорност на расите А - Е
на волци [3,10,21,22]. Сепак, некои референци откриваат посложено наследување на карактерот, вклучително и два доминантни гени [8], еден рецесивен [23], двојна рецесивна епистакса [24] или дури и квантитативно наследство. Најновите студии сугерираат дека отпорноста кон волците се одредува со квантитативни и квалитативни полигенски механизми [25,26]. Идентификувањето на генетскиот детерминизам на отпор се повеќе се заснова на употреба на специфични ДНК молекуларни маркери [26], вклучително и молекуларни маркери поврзани со генот Or5, кои даваат отпорност на расата Е [27], користејќи го методот BSA [13].
До денес, идентификувани се RAPD маркери (UBC120_660) и SCAR маркери (RTS05, RTS28, RTS40, RTS29 и RTS41) поврзани со Or5 и развиена е мапа на групата за поврзување на генот Or5, во близина на 22,5 cM дистално е RAPD маркер и, од 5,6 cM до 39,4 cM проксимални, 5 SCAR маркери. Оваа група за поврзување беше ставена во групата за поврзување 17 (LG17) од картата CARTISOL RFLP [27]. Танг (2003), користејќи ја истата метода (БСА), го постави генот Or5 во теломерниот регион на групата за поврзување 3 (LG3) по мапирањето на SSR маркерите [28], со најблискиот обележувач на SSR мапиран на 6,2 cM проксимално на Or5 гени.
Во овој труд беа проучени 29 генотипови на сончоглед со цел да се истражи генот Or5. Поаѓајќи од резултатите добиени од Лу и сор. (2004), следејќи ја анализата на БСА, откриле дека еден од најблиските SCAR маркери е маркерот RTS05, мапиран на растојание од 5,6 cM проксимално до генот Or5; Во нашето истражување го користевме овој маркер со почетниот фрагмент од RAPD прајмерот - OPJ18_650 со производ за засилување од 650 bp.
ИЗВЕДНИК ОКСАНА КСЕНИЈА ВАЛЕНТИНО
Фотографија 1. Резултати од засилување на ДНК со специфичниот маркер SCAR (RTS05) во различни семејства на сончоглед: М - молекуларни маркери; Ц - контрола без ДНК.
Анализирајќи ги добиените резултати (Фото. 1) на групите генотипови (хомозиготни татковски линии и F1 хибрид), кои ги сочинуваат хибридите Ксенија, Изведувач, Валентино и Оксана, како резултат на реакцијата на засилување со споменатиот пар специфични буквари, присуството на производот на 650 б.п. кај сите генотипи, освен мајчината линија на хибридот Ксенија. Податоци што ни овозможуваат да претпоставиме дека овие генотипови го поседуваат генот Or5 и неговиот недостаток во мајчиниот генотип Ксенија - дека оваа линија е подложна на расата Е.
Идентификација на локусот поврзан со генот Or5 е извршен и на 11 андростерилни линии и 10 хибриди од сончоглед (Фотографии 2 и 3). Ампликонот со 650 bp е добиен во андростерилните линии 1-3, 8-11 и во хибридите Performer, Oxana, Xenia, Turbo, Favorit, Alcazar и Olga.
Добиените резултати покажуваат дека споменатите линии и хибриди имаат отпорност на расата Е волци. Во 4-6 андростерилни линии и во хибридите Валентино, Виталиа и Дрофа, ампликонот со 650 bp е слабо обележан, а во андростерилната линија број 7 недостасува.
Според податоците од литературата [2] во врска со директната врска помеѓу гените на отпорност (Or1 - Or7) присутни/отсутни кај видот Helianthus annuus L. и кај расите (A - G) на Orobanche cumana Wallr. во споредба со седумте постојни раси на волци (Таб. 1-3).