Производство на формулации за честички за рекомбинантни протеини со користење на флуидизиран кревет - PDF
1 дисертација за добивање на докторска диплома на Хемиски и фармацевтски факултет на Лудвиг-Максимилијанс-универзитит Минхен Производство на формулации на честички за рекомбинантни протеини со помош на флуидизиран кревет Матијас Ганц од Вирцбург 2007 г.
8 СОДРИНА 1. Вовед Производство на протеински честички Флуидизиран кревет Параметри на уредот Параметри на процесот Сушење на сушење на протеини во флуидизиран кревет Алтернативни процеси за производство на протеински честички Сува спреј Замрзнување на замрзнување Спреј замрзнување на прскање Врнежи Суперкритични флуиди Х-зраци спектроскопија на фотоелектрон во аптека Основи Квалитативни методи на анализа Квалитативни методи на анализа човечки интерлеукински супстанции за флуидизиран кревет обработува други супстанции 24
9 СОДРИНА 3.2. Системи на процеси GPCG-1 систем Мини-Глат систем Аналитички методи Карактеризација на рил SE-HPLC за анализа на агрегати RP-HPLC за анализа на сродни видови RP-HPLC за анализа на електрофиреза на оксидиран метионин гел (SDS-страница) Ласерска дифракција Карл-Фишер полариметрија DSC XPS УВ спектроскопија Мерење на површината на BET Резултати и дискусија Компаративни тестови во различни системи Тестови во системот GPCG-1 Тестови во системот Mini-Glatt Резиме Оптимизација на системот Mini-Glatt Спуштена млазница Изменет материјал и држач за млазницата 53
10 СОДРИНА Дополнителен оптимизиран контејнер за материјали Мини-Глат систем со микро комплет Резиме на стабилност на формулациите рил-11 Материјали за преноси и раствори за прскање без стабилизирање на адитиви Материјали за преноси и раствори за прскање со додаток за трехалоза MCC-Сфери и раствори за прскање со додаток PS80 Влијание на додаден шеќер во комбинација со 0,02% PS Резиме XPS производи на рил-11 Спектри на носачки материјали, треалоза и рил Анализа на XPS на носачи со рил-11 обложување Вчитување Пресметка на покриеноста заснована на анализата на XPS Евалуација на моделите Резиме литература 125
11 Кратенки Врзувачка енергија БЕТ Брунауер, Емет и Телер БСА говедски серумски албумин DMSO диметил сулфоксид DSC диференцијално скенирање калориметрија FD притисок на флуидализација FD притисок на флуидизација GPCG-1 Глат со честички Гранулатор-1 IR инфрацрвена инфрацрвена KAD конфигурација со намалена млазница LDH lactul lactate Национален институт за стандарди PS80 полисорбат 80 rhgh рекомбинантен хормон за раст на човекот rhil-11 рекомбинантен човечки интерлеукин-11 RP-HPLC обратна фаза HPLC RS сродни видови SD притисок во распрскувач SDS натриум додецил сулфат SE-HPLC хроматографија со исклучок на големина
21 1 ВОВЕД 10 Постигнати 40nm (Thiering et al., 2000a). Понатамошен развој на врнежите е прскање на протеинскиот раствор во сад со суперкритична течност, поради површината создадена при атомизација, протеинските честички се појавуваат за неколку секунди. Со оваа технологија, може да се произведат честички со еднаква форма и дистрибуција со тесна големина (Palakodaty et al., 1999; Yeo et al.; 1993). Во технологијата на суперкритична течност, својствата на протеинските честички, како што се дистрибуцијата на големината на честичките и морфологијата, зависат од температурата и притисокот на суперкритичната течност (Јунг и сор.; 2001). Недостатоци се сложениот процес и високата цена на постапката.
33 2 ЦЕЛ 22 3) Последователно, ќе се испита влијанието на различните преносни материјали и разни додатоци на раствор на распрскувач како што се шеќер, сурфактанти или антиоксиданти врз физичката и хемиската стабилност на рил-11 и за време на процесот и за време на складирањето. Со нерастворливи MCC сфери, влијанието на адитивите на растворот за прскање ќе се испита независно од ефектите на растворливост на носачот. 4) Подобро разбирање на површинската покриеност на носачот со протеинска или протеинска матрица може да обезбеди важни објаснувања за протеинските нестабилности, бидејќи протеините можат да се денатурираат на површините. Со помош на XPS, треба да се испита дистрибуцијата на рил-11 на површинските/блиските површински слоеви на формулациите на честички протеини.
34 3 МАТЕРИЈАЛ И МЕТОДИ 23 3 МАТЕРИЈАЛ И МЕТОДИ 3.1 МАТЕРИЈАЛИ НА РЕКОМБИНАНТЕ ХУМАНЕЗЕН ИНТЕРЛЕУКИН-11 За сите експерименти замрзнат воден раствор на големо со приближно 15mg/ml рил-11, 6мм натриум монофосфат, 4мм натриум дифосфат беше употребен 300м Вајт Биофарма, Андовер, САД). За некои експерименти, глицинот на најголемата формулација беше отстранет со дијализа против фосфат пуфер раствор (10mM, ph = 7). Користена е цевка за дијализа од типот Spectra/Por 7 со MWCO 3000 од Spectrum Medical Industries Inc., САД. ПОМОШНИ СУПСТАНЦИИ ЗА ИСПЕРИЕНТИ ЗА ТЕЧЕН КРЕВЕТОТ Табела: Помошни средства за тестови со флуидизиран кревет Опис на супстанцијата Опис на снабдувањето MCC-Spheres (Cellets 100) 98,2% = μm Pharmatrans Sanaq AG MCC-Spheres (Cellets 200) 98% = μm Pharmatrans Sanaq AG Sacrose RFF шеќер Südzucker Trehalose дихидрат Georg Breuer GmbH Д-Манитол (Pearlitol 200SD) 98,% EP Roquette D-Mannitol (Pearlitol 300DC) 98, Глицин ЕП Рокет 99,0-101% Рексим (Дегуса) Динатриум хидроген фосфат хептахидрат Мерк, Дармштат Натриум дихидроген фосфат монохидрат Мерк, Дармштад метионин Флука, Букс, Швајцарија
35 3 МАТЕРИЈАЛ И МЕТОДИ ДРУГИ СУПСТАНЦИИ Таб: Понатамошни супстанции Опис на супстанцијата Извор на снабдување Ацетонитрил HPLC квалитет, Фишер Научен,> 99,9% Лестершир, Велика Британија Амониум нитрат> 99% Грусинг, Филсум Колоиден Комплет за боење Обојувач А и Б Инвитроген, Карлсруех лилидит de Häen, Seelze Mark12 TM Молекуларен стандард за инвитроген, Карлсруе гел електрофореза метанол HPLC квалитет,> 99,8% Мерк, Дармштат Метионин Флука, Букс, Швајцарија Морфолиноетаносулфонска киселина (МЕД)> 99,5% Сигма, Стеинхајм натриум хлорид ACS,> 99%, Квалитет на електрофореза на натриум додецил сулфат Steinheim,> 99% Рот, пелети на натриум хидроксид во Карлсруе без> 99% Merck, Дармштад содржи MOPS, NuPAGE МОПС кои работат со Tris Base, SLS, тампон EDTA Invitrogen, Карлсруе содржи Глицерол, Tris Base LS, Tris NuP; ЕДТА, Инвитроген, Карлсруе Бафер Серва Блау 250, Фенол Рот, Васер НуПАГ агенс за редукција О, 5М ДТТ Инвитроген, Карлсруе ПС80 Криле HP, Крода со висока чистота, Неттета л трифлуороцетна киселина Сигма, Штајнхајм
36 3 РАСТЕНИЈА ЗА ПРОЦЕС НА МАТЕРИЈАЛИ И МЕТОДИ РАСТЕНИЈА GPCG-1 За да може визуелно подобро да се следи процесот, тестовите беа извршени како стандардни во горниот аранжман за прскање, користејќи млазница со две супстанции со внатрешен дијаметар од 1 mm. Торбите за филтрирање на ткаенината се тресат со употреба на двокоморен метод. Стандардните параметри се наведени во табулаторот. Таб: Стандардни параметри GPCG-1 Експерименти: Параметри на процесот, раствор за прскање, материјал за носење Параметри за контрола на процесот Вредност (единица) Флуидирање на брзината на воздухот 1,5 m/s Млазница за притисок на прскање 1,9 бари Течност на прскање на прскање 2,8 g/min Температура на влез 30 C Интервал на тресење (филтер) на секои 10 секунди (асинхрон ) Формулација на прскалка течност рил-11 2,5 мг/мл фосфат пуфер 10mM, ph = 7,0 глицин 300mM количина на прскалка течност 250g количина на носач материјал 300g
37 3 СИСТЕМ ЗА МАТЕРИЈАЛ И МЕТОДИ МИНИ-ГЛАТ На почетокот на развојот, процесите беа извршени во конфигурацијата на спреј за дно без употреба на колбаси. За прскање беше искористена млазница со две течности со внатрешен дијаметар од 0,5 mm. Флуидизацијата на носачкиот материјал и атомизацијата на растворот за прскање се одвиваа со компримиран воздух од куќната линија (6 бари). Компримираниот воздух беше прилагоден со помош на редуктор на притисок во системот. Температурата на воздухот што флуидира може да се прилагоди со загревање во системот. Стандардните параметри се наведени во табулаторот. Табела: Стандардни вредности Тестови на мини-Глат: Параметри на процесот, раствор за прскање, материјал за носење Параметри на контролата на процесот Вредност (единица) Притисок на флуидирање 0,5bar Притисок на прскање 0,5bar Стапка на проток прскалка течност 0,36 g/min Температура на проток на прскање 0,36g/min Температура на производот 32 C Интервал на испуштање (филтер) 10s Притисок на удар (филтер) 1 бар Течност за прскање на вода -11 4 mg/ml фосфатски пуфер 10mM, ph = 7,0 глицин 300mM количина на прскалка течност 15g количина на носач материјал 20g