SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP супстрат комплет - PDF бесплатно преземање
ПРИРАЧНИК ЗА КОРИСНИК СЕРВАЛИСТИК EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP супстрат комплет (Cat.-Бр. 42586) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 Д-69115 Хајделберг Телефон + 49-6221-138400, Факс + 49-6221-1384010 е-пошта: [email protected] http://www.serva.de
Содржина 1. СЕРВЕЛАТСКА ЕОСУЛТРА 2 1.1. Општи информации 2 1.2. Компоненти на комплетот 2 1.3. Услови за складирање 2 2. ВРШЕЕ НА ДЕТЕКЦИЈА 3 2.1. Важно на почетокот 3 2.2. Потребни, не испорачани материјали и решенија 4 2.3. Шема за откривање вестерн блот 5 2.4. Протокол 5 3. РЕШЕНИЈА НА ПРОБЛЕМИ 7 4. ИНФОРМАЦИИ ЗА НАРАЧКА 8 Ver 03/12 1
1. SERVALight EosUltra 1.1. Општи информации SERVALight EosUltra е високо чувствителен хемилуминисцентен супстрат за откривање на конјугати од рен пероксидаза (HRP), на пр. обележани антитела на имуноблоти. Интензитетот на сигналот на подлогата овозможува откривање на антиген во долниот опсег на фемтограм (10-15). Предности: Откривање на филмови или со системи за документација погодни за хемилуминисценција, на пр. ProXima C16Phi +, Isogen Многу кратко време на изложеност и/или поголеми разредувања на антитела поради оптимизирани, силно-интензивни сигнали SERVALight EosUltra не е погоден за употреба во дијагностика или други клинички апликации, туку само за истражување и развој. SERVALight е произведен од Cyanagen Srl. Cyanagen Srl е предмет на следните патенти на САД и ЕУ US 7803573, EP 1962095, US 7855287, како и веќе поднесени и важечки патенти за други земји. 1.2. Компоненти на комплетот мачка. - бр. SERVALight EosUltra Luminol Solution SERVALight EosUltra Peroxide раствор 42586.01 10 ml 10 ml 42586.02 50 ml 50 ml 42586.03 100 ml 100 ml 1.3. Услови за чување Чувајте го комплетот на 2 8 C. Ако се чува на препорачаната температура, може да се користи барем додека: видете ја ознаката. 2
2.3. Шема на инкубација за блокирање на трансферот на гел за електрофореза за откривање на вестерн блот 1. Инкубација на антитела 2. Антитела SERVALight EosUltra откривање на инкубација 2.4. Протокол (1) Отстранете го размачкувачот од апаратот за размачкување и блокирајте го на собна температура (20-60 мин) или на 2-8 C преку ноќ. (2) Отстранете го блокирачкиот реагенс и додадете го првиот работен раствор на антитела во соодветно разредување. Инкубација 1 час на собна температура или преку ноќ на 2-8 C со тресење. (3) Последователно миење на мембраната со пуфер за перење (5 мин). Повторете го чекорот на миење 4-6 пати. Поголемите волуменски тампон или бројот на чекори за перење може да помогнат во намалувањето на позадината. (4) Додадете соодветно разредување на конјугатот HRP. 1 час инкубација на размачкување на собна температура со тресење. (5) Повторете го чекорот (3). (6) Пред откривањето, решенијата за откривање треба да бидат на собна температура. (7) Подгответе го работниот раствор на подлогата со мешање на еднакви пропорции на раствор на пероксид со раствор на луминол. Треба да се користи 0,1 ml работен раствор на cm 2 мембрана. 5
(8) Работниот раствор е стабилен 24 часа на собна температура. (9) 5 мин инкубација на размачканата мембрана со работен раствор на подлогата. (10) Трансфер на заштитениот фрагмент (на пример, завиткајте го во фолија без воздушни меури) во филмската касета со протеинската страна нагоре и вметнете го филмот. Тука треба да работите во соодветна темна соба. Филмот треба да остане сув за време на изложеноста. ВАORTНО: Вишокот на подлогата треба да се отстрани од формулата. Филмот треба да се стави внимателно, бидејќи поради интензитетот на сигналот, дури и мало лизгање на филмот/размавта може да доведе до заматени или неточни сигнали. (11) Пред сè, се препорачува време на изложеност од 60 секунди. Во зависност од јачината на сигналот, соодветното време на изложеност за оптимален интензитет на сигналот може да се избере. (12) Потоа се развива изложениот филм. (13) Како алтернатива на развојот на филмот, откривањето може да се изврши и со употреба на соодветни системи за документација, на пр. ProXima C16 Phi +, Изоген. (14) Доколку е потребно, дамката може да се отстрани по откривањето и повторно да се наполни со антитела. 6-ти
4. Информации за нарачки на мембраните Кат. Имобилон (PVDF), 26,5 см x 3,75 м, големина на пора: 0,2 μm (1 ролна) 42574 флуоробинд (PVDF), 10 x 10 см, големина на пора: 0,2 μm (20 листови) 42573 флуоробинд (PVDF) ), 25 см х 3 м, големина на пора: 0,2 μm (1 ролна) 42571 Протеински стандард SERVA Western Blot Protein Standard 39256 реагенси помеѓу 20 37470 Реагенси за откривање/комплети Хемилуминисценција реагенс за рен Пероксидаза 42582 SERVALight Поларис CL HRP WB Подлога комплет 4 Комплет за подлоги Eos CL HRP WB 42585 SERVAL Light Helios CL HRP WB Подлога за подлоги 42587 8