Техничка информација
Неинвазивни пренатални тестови се вршат за да се потврди или исклучи присуството на нарушувања на феталниот хромозом.
Историја на неинвазивно пренатално тестирање:
| 1997 година | откривање на слободна ДНК на фетусот, |
| 1997 година | неинвазивно утврдување на полот на фетусот со користење на откривање на низи на Y-хромозоми, |
| 1998 година | квантитативна анализа на слободната фетална ДНК во циркулаторниот систем на мајката, |
| 1998 година | неинвазивно утврдување на фетусот RhD статус, |
| 1999 година | демонстрација на брза елиминација на слободната фетална ДНК по раѓањето, |
| 2000 година | неинвазивно тестирање на ДНК насочено кон наследни моногени вродени нарушувања (ахондроплазија), |
| 2008 година | пилот студии кои се фокусираат на неинвазивно откривање на фетални анеуплоидии, |
| 2009 година | прва примена и потврда на концептот заснован на потенцијалот на NGS (секвенционирање на новата генерација) при откривање на фетална трисомија 21, |
| 2010 г. | разновидноста на фрагментација на ДНК кај мајката и фетусот - детално, |
| 2010 г. | детални геномски карти на фетусот, утврдени неинвазивно, |
| 2011 година | комерцијални неинвазивни пренатални тестови, достапни за прв пат, |
| 2012 година | комплетната секвенца на геномот на фетусот, добиена неинвазивно |
| 2015 година | Анализата на тестот ТРИЗОМИ беше пошироко користена заедно со варијантата ТРИСОМИ + тест, дизајнирана за откривање на дополнителни хромозомски абнормалности. |
Принципот на тестот
Нашиот скрининг тест се заснова на анализа на целата геномска низа на слободна фетална ДНК, изолирана од периферната крв на бремена жена. Податоците добиени со анализа на секвенционирање со ниска покриеност се проценуваат со помош на единствен математички алгоритам, проверен според постапката објавена од Бријанчи и сор. (2012). *
* Бјанки ДВ и др. Откривање на анеуплоидија на фетусот во геном со редослед на ДНК на мајчината плазма. Акушер гинекол. 2012 година мај; 119 (5): 890 - 901.
Клиничко значење
Целта на тестот ТРИЗОМИЈА е откривање на вообичаени видови на трисомија на фетусот во раните фази на бременоста за да се минимизира потребата за амниоцентеза. *, што претставува одредени ризици од губење на бременоста следејќи ја постапката за земање примерок од амнионска течност.
И покрај многу високата чувствителност и специфичност во откривањето на видовите на трисомија што се следат, анализите Тест ТРИЗОМИЈА, тест ТРИЗОМИЈА XY и тест ТРИЗОМИЈА + се разгледуваат - како и сите други неинвазивни пренатални тестови - наместо форми на скрининг, а не дијагностички методи.
Во пракса, ова значи дека секој позитивен резултат од тестот ТРИЗОМИЈА мора да биде потврден со инвазивен метод кој вклучува фетален генетски материјал (амнионска течност или хорионски ресички) што ќе биде генетски анализиран (видете ги упатствата).
Негативен резултат на тест ТРИЗОМИЈА исклучува присуство на фетална трисомија 21, 18 и 13. Како по правило, негативниот резултат од тестот не треба да се потврдува со инвазивен метод (види референци).
* Бјанки ДВ и др. Откривање на анеуплоидија на фетусот во геном со редослед на ДНК на мајчината плазма. Акушер гинекол. 2012 година мај; 119 (5): 890 - 901.
Препорака од докторот
Поднесување за да се влијае на тестот ТРИЗОМИЈА може да го направи секој гинеколог или специјалист за клиничка генетика.
Поднесување за да се влијае на ТРИСОМИ XY тестот може да го изврши секој гинеколог или специјалист за клиничка генетика.
Поднесувањето да влијае на тестот ТРИЗОМИЈА + може да го изврши медицински генетичар.
Чувствителност и специфичност
Неинвазивните пренатални тестови (НИПТ) генерално се карактеризираат со висока чувствителност и специфичност. Анализите на ДНК на фетусот обезбедени од различни лаборатории обично се разликуваат во некои технички детали. Овие детали се рефлектираат во неколку клучни параметри, особено:
- стапка на откривање на трисомични фетуси - Стапка на откривање (Д-Р),
- лажно позитивна стапка - Лажно позитивно оценување (FPR).
Чувствителноста на NIPT (неинвазивни пренатални тестови) на трисомиите 21 и 18 зависи од специфичните лабораториски параметри и видовите тестови што ги користат, обично се движат од 90 до 100% со лажно позитивна стапка од 0, 1%. *
Чувствителноста на NIPT (неинвазивни пренатални тестови) во однос на трисомија 13 е помала (79 - 92%). Евентуалното паѓање на тестот може да биде предизвикано од технички причини или од фактот дека бременоста со 13 трисомии се случува многу ретко. Од овие причини, лажно позитивната стапка се проценува на помалку од 0,1%. *
НИПТ (Неинвазивни пренатални тестови) - Откривање на хромозомски нумерички аномалии (анеуплоиди) - Безбедност
| Проба | Даунов синдром | |
| DR (n (%)) | RPF (n (%) | |
| Chiu et al., 2011 година | 86/86 (100) | 3/146 (2.1) |
| Ерих и сор., 2011 година | 39/39 (100) | 1/410 (0,24) |
| Паломаки и сор., 2011 година | 209/212 (98,6) | 3/1471 (0,20) |
| Бјанки и сор., 2012 година | 89/90 (98,9) | 0/410 (0,00) |
| Спаркс и сор., 2012 година | 36/36 (100) | 1/123 (0,81) |
| Ашор и сор., 2012 година | 50/50 (100) | 0/297 (0,00) |
| Нортон и сор., 2012 година | 81/81 (100) | 1/2888 (0,03) |
| Вкупно | 590/594 (99,3) | 9/5745 (0,16) |
Тест ТРИЗОМИЈА -
Чувствителност и специфичност
| Т21 | > 99% | 90,97-100% | > 99% | 97,78-100% | 39 |
| Т18 | > 99% | * | > 99% | * | 5 |
| Т13 | > 99% | * | > 99% | * | 2 |
н - вкупен број на тестови за валидација
- број на позитивни примероци
НО - интервал на доверба
* 95% CI неоценето поради недостаток на докази
Број на примероци без резултати за неинвазивни пренатални тестови: ***
Анализирајќи 164 примероци од бремени жени со нормални фетуси и 39 примероци од бремени жени со фетуси со трисомија 21, студијата за валидација сугерира дека просечната пропорција на ДНК на фетусот кај примероците добиени од бремени жени чиј фетус страда од трисомија 21 е 16% (види сина крива на графикон 1). Со оглед на овој процент на фетална ДНК во крвниот систем на мајката, веројатноста да се добие неубедлив резултат е
1: 3 x 10 13 и веројатноста да се добие лажен негативен резултат (т.е. погрешни резултати) е помала од 1: 9 × 10 18 .
ТРИСОМИ тестот го зголеми процентот на фетална ДНК во проценетите примероци
Поради уникатниот метод на анализа, не беа откриени пропорции на фетална ДНК под 7,5% во анализираниот сет примерок. Подобрена со сопствениот математички алгоритам, чувствителноста на тестот е толку голема што, дури и во случај на помали концентрации на фетална ДНК, анализата на тестот ТРИЗОМИЈА може да открие буквално сите случаи на трисомија.
Веројатноста да имате неубедлив резултат во примерок со најмал процент на фетална ДНК во студијата (7,5%, видете црвена крива) е:15 1:15, а веројатноста да имате лажен негативен резултат е помалку од 1: 740.
Анализата на примероци од бремени жени со здрави фетуси (сина крива) сугерира дека веројатноста да се добие неубедлив резултат е: 1: 161, а веројатноста да се има лажен негативен резултат е помала од 1: 30 000.
За да се минимизира ризикот од лажно негативни или лажно позитивни резултати кај бремености со мал дел од фетусот, резултатите од нашата анализа се проценуваат во посебна област што дефинира неубедливи резултати - т.н. „сива зона“. Графиконот 2 ја покажува оваа област во сива боја. Ако анализираниот примерок спаѓа во оваа област, анализата мора да се повтори. За овој тест, нов примерок од крв мора да се земе 14 дена по претходниот примерок.
*** Hudecova I, Sahota D, Heung MM, Jin Y, Lee WS, Leung TY, Lo YM, Chiu RW. Фракции на ДНК на фетусот во мајчината плазма кај бремености со ниски и високи ризици за фетални хромозомски анеуплоидии. 2014 28 февруари; 9 (2): e88484. дои: 10.1371/журнал.поне.0088484
Евалуација на податоците засновани на прилагоден алгоритам
Добиени со употреба на анализа на секвенционирање на ДНК на фетусот низ целиот геном, податоците од индивидуалните тестови се проценуваат со употреба на комплексни математички модели. Множествата на податоци варираат од лабораторија до лабораторија и исто така зависат од користената постапка. Целта на евалуацијата е да се пресмета она што се нарекува З-резултат (графикон 4).
ТРИСОМИ тестот користи напреден алгоритам за проценка на податоци (MUL).
Во споредба со другите методи на пресметка што ги користат нашите конкуренти, напреден сопствен алгоритам се користи за евалуацијата на податоците во случај на анализа на тестот ТРИЗОМИЈА ни овозможува да добиеме повисока просечна вредност на Z резултатот во споредба со оценетите примероци.
Повисоката просечна вредност на Z резултатот во позитивните примероци добиени со употреба на напредниот прилагоден алгоритам при изведување на тестот ТРИЗОМИЈА автоматски се рефлектира во попрецизна дистрибуција на вредностите на негативните и позитивните резултати, што на крајот доведува до намалување на сивата зона (преклопувачка област) - област што не ни дозволува недвосмислено да процениме дали резултатот од тестот е всушност позитивен или негативен.
Интервенции
Бидејќи анализата Тест ТРИЗОМИЈА, тест ТРИЗОМИТЕСТ XY и ТРИЗОМИЈА + се класифицирани како скрининг тестови наместо дијагностички методи, може да се појават лажно позитивни и лажно негативни резултати. Затоа, позитивниот резултат секогаш мора да се потврди со соодветен дијагностички метод, односно со генетски преглед на амнионската течност или со земање и испитување на примерок од хорионски ресички.
Негативен резултат апсолутно не ги исклучува сите видови на следени трисомии. Во некои бремености може да има природни околности/феномени (плацентален мозаицизам, синдром на близнаци што недостасуваат, мутации на точки, други видови генетски или епигенетски механизми или присуство на туѓа ДНК во крвта на мајката) што може да предизвика лажни резултати.
Во некои ретки случаи, недвосмислен резултат не може да се утврди. Овие резултати се сметаат за неуспешни/неубедливи. **** Неуспехот може да биде предизвикан од технички или биолошки причини. Во повеќето случаи, овие неуспеси се предизвикани од несоодветен квалитет на биолошкиот примерок, несоодветна берба или несоодветни услови за транспорт.
Најчеста биолошка причина за неуспех на тестот е релативно нискиот процент на фетална ДНК во споредба со количината на мајчината ДНК. Ако процентот на фетална ДНК е помал од 4%, точноста на тестот значително се намалува (Графикон 5). Според резултатите од објавените студии, фреквенцијата на примероци со низок процент на фетална ДНК варира помеѓу 1,5 и 6,1%.
Резултатите од тестот со фетален ДНК сооднос под 4% не се толкуваат.