Тест за татковство Анатомија и физиологија

Тестот за татковство е генетски тест кој одредува дали индивидуата е или не е биолошки татко на дете. Генетскиот доказ за татковство е многу корисен, особено во судската медицина. Постојат и тестови за мајчинство, многу помалку користени, што се бараат особено во случаи на породилно отсуство, чедоморство или посвојувања. Во минатото биле користени различни методи за утврдување на татковство, како што се анализа на антигени во крвни групи, анализа на ХЛА антиген, анализа на антиген на леукоцити или анализа на разни протеини и ензими, но сите овие не дадоа сигурни резултати.

Дефиниција на тест за татковство

Тестот за татковство е лабораториска анализа на 16 ДНК секвенци лоцирани на различни хромозоми, за да се утврди сигурноста дека индивидуа е биолошки татко на детето. Потребни се биолошки примероци од наводниот татко и детето, анализирајќи 16 маркери или ДНК секвенци од секоја, а ДНК анализата е единствената што обезбедува сигурност при утврдување на степенот на сродство. Примероците добиени од двете лица се споредуваат со анализа на секој маркер одделно и воспоставување на комплементарност помеѓу маркерите од детето и маркерите од таткото. Ако се земат примероци и од мајката, степенот на специфичност на тестот ќе се зголеми, но тоа не е нужно потребно, тестот има специфичност од 99,9% и во случај на собирање на два примерока, еден од претпоставениот татко и еден од дете Тестот може да се направи и пред породувањето и после породувањето.

Во Романија, трошоците за тест за татковство се помеѓу 750 (се тестира мајка, претпоставен татко и 1 дете) и 1.500 RON (се тестира мајка, двајца претпоставени татковци и две деца), во зависност од методот на тест, собраниот биолошки примерок и бројот на анализирани примероци.
Резултатот е достапен за 3 - 7 работни дена од испраќањето на тестовите во лабораторијата, но може да потрае и подолго, во зависност од техниката што ја користи лабораторијата што ја прави анализата.

Исто така, може да се утврди братство (сродство помеѓу 2 или повеќе деца) и утврдување на степенот на сродство помеѓу детето и разни членови на семејството (тетки, чичковци, баби и дедовци). Исто така, може да се утврди ДНК профилот на поединецот, и едниот и другиот нуклеарен профил на ДНК и исто така Митохондријална ДНК како и Испитување на хромозоми за воспоставување на сродство помеѓу машки лица (татковско сродство).
Тестирање на близнаци на зигоза се прави со употреба на истите методи како тестот за татковство и може да утврди дали близнаците се монозиготни (идентични) или дизиготи.

Пренатално тестирање

1. Амниоцентеза.

2. Биопсија на хорионски ресички.

Овозможува рано тестирање, почнувајќи од 10-13-та недела од бременоста. Тоа вклучува берба на мал дел од плацентата од матката. Тоа е инвазивна процедура што може да се изврши трансверзално (пристап од вагината, поминување низ грлото на матката до матката) или транссабдоминално со помош на фина и тенка игла, под ултразвучно водство. Хоријалните ресички се израстоци на фини ткива во прстот на ракавицата што излегуваат од wallидот на матката. Тие имаат генетски материјал идентичен со генетскиот материјал на фетусот. Компликациите се претставени со трансвагинално крварење по процедурата и прекин на мембраните на плацентата. За тестот потребно е да се соберат 2-3 мм ткиво.

И амниоцентезата и биопсијата на хорионски ресички се рутински тестови кои се вршат пренатално, не само за да се утврди татковство, туку и за да се утврдат аномалии на генетскиот материјал и да се утврди дијагноза на генетски болести и хромозомски абнормалности, дијагноза што може да се избере за абортус (абортус) терапевтски). Биопсијата на хорионска вилус има предност во овој поглед, бидејќи може да се изврши побрзо, почнувајќи од 13-та недела од бременоста. Бербата, како во случај на амниоцентеза, така и во случај на биопсија на хорионски ресички, ќе се изврши само од гинеколог и само под ултразвучно водство.

3. СНП микро-низа (микро-низа со единечен нуклеотиден полиморфизам)

е неинвазивна технологија за утврдување на татковство со анализа на циркулирачката фетална ДНК извлечена од мајчината крв. Тестот може да се изврши почнувајќи од 10-та недела од бременоста. Се анализираат ДНК на фетусот, ДНК на мајката и ДНК од претпоставениот татко. Анализирани се 317 000 генетски маркери претставени со нуклеотиди и се утврдува татковство врз основа на нивната комплементарност. Точноста на овој тест е 99,9% и има тенденција да ги замени инвазивните тестови како што се амниоцентеза и биопсија на хорионски вили.

Постнатално тестирање

Задолжителни примероци за анализата што треба да се изврши се оние собрани од детето и претпоставениот татко. Не е задолжително да се тестира примерок од мајката, но неговото присуство ја зголемува сигурноста на резултатот и веројатноста за потврда на татковството.

Методи за тестирање

1. Реакција на полимеризација со синџири

PCR техника
Тоа е метод со кој ДНК секвенцата се засилува ин витро. Природната ДНК се подложува на процес на репликација или синтеза, при што се синтетизира нова ДНК секвенца со користење на мајчинска ДНК секвенца, наречена матрица. PCR врши репликација на ДНК во лабораторија. Ова резултира во поголеми количини на дадена ДНК секвенца, која потоа може да се анализира. За реакција се неопходни:
- примероците на ДНК што треба да се анализираат (од претпоставениот татко, мајка и дете), да се применат (наречен образец ДНК)
- ДНК полимераза
- прајмери (олигонуклеотиди)
- реакција тампон
- Јони на магнезиум

Реакцијата вклучува термичка денатурација на образецот на ДНК со ослободување на двојниот спикс, прицврстување на прајмерите и полимеризацијата. На крајот на првиот циклус на полимеризација (засилување) се добива двојно количество ДНК во споредба со количината на ДНК на шаблонот. Се вршат помеѓу 25 и 40 циклуси на засилување. Минималната количина на шаблонска ДНК за успех на реакцијата е 500 нанограми нуклеарна ДНК. Користените буквари се вештачки и мора да бидат комплементарни на 5 'и 3' краја на ДНК-регионот што треба да се засили. ДНК полимеразата што се користи за реагенси се добива од термофилни микроорганизми и мора да биде термостабилна за да ги издржи температурите на кои се изведува верижната реакција на полимеризацијата (100 степени Целзиусови). Најчесто се користи ДНК полимераза Taq, или Так Пол, добиени од микроорганизмот Термус Акватикус. Taq Pol ги издржува сите три температурни чекори на кои се врши PCR, имено: 90 - 95 степени Целзиусови за денатурирање на ДНК образец и одвиткување на двојна спирала, 55 - 60 степени за прицврстување на прајмери на секоја од двете нишки на ДНУ на денатуриран образец и 72-75 степени за реакција на полимеризација.

Фази на верижната реакција на полимеризација:
а.Денатурација на двојно-влакно ДНК
Се прави на температура над 90 степени, за 20-30 секунди, со расклопување на двојно-насукана ДНК во две комплементарни нишки на образецот, на кои потоа ќе се прицврстат букварите. Затоа, на крајот од овој чекор, две слободни едножични ДНК-жици ќе резултираат во реакциониот медиум.
б. Спојување на едножични ДНК-буквари
Трае 20-40 секунди, за кое време температурата се спушта на 55-60 степени. Резултатот е хибридна двојна нишка ДНК.
в.Продолжување на буквари
ДНК полимеразата ќе се поврзе со хибридниот двонасечен ДНК ланец со читање на редоследот на шаблонската ДНК-влакно и издолжување на букварите врз основа на правилото за комплементарност помеѓу азотните бази.

Фази на засилување:
- Експоненцијално засилување - двојно зголемување на количината на ДНК на крајот од секој циклус на полимеризација
- Израмнување - Кога ќе се потрошат реагенсите, реакциите ќе продолжат побавно
- ПЛАЕТО - осиромашување на реагенсите

2. Полиморфизам на должината на фрагментот со ограничување

Техниката вклучува фрагментација на ДНК секвенца со употреба на a ензими за ограничување. Резултирачките фрагменти се одделуваат според нивната должина со електрофореза со гел од агар, а потоа се пренесуваат во специјална мембрана со постапката Southern Blot. Сите примероци од мајката, претпоставениот татко и детето се анализираат со ист метод и се споредуваат според комплементарноста на ДНК секвенците со иста должина. Методот RFLP се смета за златен стандард за генотипизирање, но е ограничен со фактот дека ДНК од примероците што влегуваат во тестот мора да биде со исклучителен квалитет за да може да се оддели на фрагменти. Времетраењето на тестот е исто така многу долго, се движи од 3 недели до 3 месеци, додека PCR-тестот трае помеѓу 3 и 9 дена.

Тестот за татковство претставува единствениот метод да се елиминира неизвесноста во врска со утврдувањето на биолошки татко на дете, да се биде генетски тест со 100% точност во елиминирање на лица кои не одговараат на статусот на биолошки татко и 99,9% точност при утврдување на индивидуа со статус на биолошки татко. Резултатот е објавен за околу една недела по приемот на примероците, но дури и во Романија има лаборатории кои работат итно испраќајќи го резултатот по 8 часа.