Влијание на индуктивната хем оксигеназа (HO-1) врз микроциркулацијата во
1 Од хируршката универзитетска клиника, Оддел за општа и висцерална хирургија на Универзитетот Алберт-Лудвигс-Фрајбург и.бр. Влијание на индуцирана хемоксигеназа (HO-1) врз микроциркулацијата кај пост-исхемија панкреатит I N A U G U R A L - D I S S E R T A T I O N за добивање на докторска медицинска диплома од Медицинскиот факултет на Универзитетот Алберт-Лудвигс-Универзитет Фрајбург и.бр. Презентиран во 2006 година од Мориц Шолтес роден во Ахен
2 2 Декан: проф. Д-р. медицински Ц. Питерс 1-ви рецензент: ПД Др. медицински О. Томуш 2-ри рецензент: проф. Д-р. медицински Б. Дефекти Година на дипломирање: 2007 година
4 4 Оваа работа беше под надзор на д-р. медицински Е. фон Добшуц
5 5 СОДРИНА 1. ВОВЕД АКУТЕН ПАНКРЕАТИТИС МИЦРОЦИРКУЛАЦИЈА ИСХЕМИЈА РЕПЕРФУЗИЈА ХЕМДЕГРАДАЦИЈА ПОДЛОГ ХЕМОКСИГЕНАЗА анестезија и вентилација microsurgical технологија испитување Методи Macrohemodynamics Microhemodynamics Функционална капиларна густина леукоцитите-ендотелијалните лабораторија интеракција параметри Определување на откривање активност HO Северна размачкана анализа Западен анализа размачкана експериментални протокол од тестирање групи Проверка на процедурата за контрола на условите активност исхемија-repaemitis-hemogenase-инхибиции оксигенација-инхибиција активност на исхемија-repemeritis-hemogenase-инхибиторен-оксигеназа-инхибиција на активноста на активноста на исхемија-ре-creatitis-hemogenase-СТА-оксигеназа-оксигенација на панкреасот активност. 35
6 6 4. РЕЗУЛТАТИ MACROHAEMODYNAMICS MICROHAEMODYNAMICS функционална капиларна густина на леукоцитите-ендотелијалните интеракција лабораториски параметри HEMOXYGENASE откривање активност за откривање на северен размачкана Западен размачкана ПРЕГЛЕД ДИСКУСИЈА ДИСКУСИЈА ДИСКУСИЈА северен-размачкана РЕЗУЛТАТИ Влијание на исхемија и реперфузија Макрохемодинамика Микрохемодинамика Леукоцитно-ендотелијална интеракција Израз и активност на хемоксигеназа Влијание на HO макрохемодинамика Микрохемодинамика Леукоцит-ендотелијална интеракција Хемоксигеназа експресија и активност 98
10 10 Овие механизми резултираат во нарушување на микроциркулацијата, што пак доведува до намалено снабдување со енергија на ткивото и со тоа го одржува маѓепсаниот круг (Слика 1). Na + -K + - ATPase Na + -Ca 2+ - Антипорт ATP Na + Ca 2+ протеази XDh O 2 Hyx + XOx исхемија крв-О 2 реперфузија О 2 -радикална пропустливост Едема тромбоза Згрутчување на леукоцити Деградација на оштетување на мембраната на ECM Активирање на микроциркулацијата активирање на леукоцитите Оштетување на клетките Оштетување на ендотелот Ензими Цитокини Слика 1: Маѓепсан круг на оштетување на исхемија-реперфузија: Процесите во исхемија (горе) предизвикуваат оштетување на клетките при рефурзија (подолу), што доведува до понатамошно хипоксично оштетување на ткивото
17 17 2. ЦЕЛ НА СТУДИЈАТА Целта на оваа експериментална студија беше да се истражат ефектите на едночасовната исхемија и двочасовната реперфузија врз микроциркулацијата на панкреасот. Беше испитано дали и како се менуваат условите со текот на времето. Понатаму, треба да се утврди дали и на кој начин егзогената индукција на индуцирана хем оксигеназа (HO-1) влијае на овие односи. Особено, беа испитани функционалната густина на капиларите како параметар на состојбата на нутриционистичко снабдување при рефузија и интеракцијата на леукоцитите-ендотелот како параметар за раната воспалителна реакција. За утврдување на овие параметри беше користен методот на интравитална епифлуоресцентна микроскопија. Влијанието на хем оксигеназата во нејзиниот израз и активност беше потврдено со молекуларна биологија. Работата е поделена на следниве делови: 1. Ефекти на исхемија и реперфузија врз микроциркулацијата на панкреасот без егзогено влијание врз хем оксигеназата 2. Ефекти на индукција на хем оксигеназа врз микроциркулацијата на панкреасот кај пост-исхемичен панкреатит
22 22 Слика 5: Шематски тек на садовите во панкреасните артерии (од HOFFMANN 70)
24 24 Јапонија) се интерпонира и датумот и времето се прикажуваат и снимаат на екранот на мониторот (WV-BM 1700, дијагонала од 41 см, Панасоник, Минхен). Со користење на уредите за зголемување, споменати погоре (микроскоп, CCD камера, монитор), беше постигнато вкупно зголемување од приближно 680x. CCD ZG SVHS IVM TV Слика 6: интравитално микроскопско експериментално поставување: Стаорец со панкреас прикачен на слезината под епифлуоресцентен микроскоп (IVM: интравитален микроскоп, CCD: фотоапарат со уред со полнење, ZG: тајмер, SVHS: видеорекордер, ТВ: монитор) функционален Густина на капиларите Функционална густина на капиларите е должината [cm] на капиларите перфузирани со црвени крвни клетки во однос на областа на областа за набудување [cm²]. Капиларите кои не се перфузирани или биле перфузирани само со плазма, не се вклучени во евалуацијата. За да се визуелизира плазмата, интравенски се инјектираа 0,15 ml флуорецеин изотиоцијанат на говеда албумин (FITC-албумин, А-9771, 0,75%, Сигма-Олдрих Ко, Дејзенхофен, Германија). Откако е возбуден од изворот на светлина, флуорохром флуоресцеинот изотиоцијанат емитира светлина со бранова должина од nm, што преку возводниот филтер создава контрастна слика на микроциркулацијата