ЗНАЧЕЕТО НА NLRC5 ОТКАУВА MOЕ ОД ЛУЕ ВО РАЗЛИЧНИ МОДЕЛИ НА ИЗВОЛУВАЕ ВО МЕСТО

Клиника за интерна медицина I (директор: проф. Д-р Штефан Шрајбер) на Универзитетскиот медицински центар Шлезвиг-Холштајн, Кампус Кил на Универзитетот Кристијан Албрехтс во Кил, ВАMPНОСТА НА НОВИОТ МУСЛИ НА NLRC5 ВО РАЗЛИЧНИ МОДЕЛИ ЗА ИНФЛАЛМАЦИЈА НА ПОВИЗНАТА ИМУНОСТА СИСТЕМА Факултет за Кристијан-Албрехт-Универзитет Зи Кил претставен од НИКОЛИНА ЛАРА БАТЧЕР од Кил Кил 2012 година

nlrc5

1. Известувач: проф. Д-р. Розенстиел 2-ри известувач: проф. Д-р. Грасл ден на усното испитување: 18 декември 2013 година Одобрено за печатење, Кил, 13 ноември 2013 година потпишан на проф. Лауди

Со ова изјавувам дека дисертацијата на тема Значењето на глувчето Nlrc5 во различни модели на воспаление на вродениот имунолошки систем, освен совети од мојот докторски супервизор и другите мои академски наставници, е моја работа во однос на формата и содржината и дека, освен оние во Јас не користев други помагала наведени во Ги обележав сите пасуси во буквална смисла или содржина како такви. Исто така, потврдувам дека ја приложив приложената дисертација само во оваа и во ниту една друга докторска постапка и дека на оваа докторска постапка не и претходеа какви било на крај пропаднати докторски процедури. Место, датум, потпис

i Содржина Список на кратенки и поими техника. iii Список на бројки. v Список на табели. v 1 вовед. 1 1.1 Воспалително заболување на цревата. 1 1.2 Студии за генетска асоцијација во областа на хронични воспалителни болести. 3 1.3 Автоинфламаторни заболувања. 4 1.4 Вродениот имунолошки систем и рецепторот за препознавање на обрасци. 5 1.4.1 Генски асоцијации на рецепторско семејство како нод со хронични воспалителни болести. 7 1.4.2 Семејството на рецептори слично на Нод. 8 1.5 Издание. 11 2 Материјал и методи. 13 2.1 Материјал. 13 2.2 Глувци. 13 2.3 Експерименти со глувци. 14 2.3.1 Подготовка на глувци. 14 2.3.2 Ендотоксин шок. 14 2.3.3 Колитис предизвикан од ДСС. 15 2.4 Изолација на ткиво/клетки на глувци. 17 2.4.1 изолација на ДНК од опашките на глувчето. 17 2.4.2 Макрофаги добиени од коскена срцевина (BMDM). 17 2.4.3 Бели дробови. 19 2.4.4 Стимулација. 19 2.5 Молекуларни биолошки методи. 20 2.5.1 РНК изолација од ткиво. 20 2.5.2 синтеза на ЦДНА. 21 2.5.3 Обратна верижна реакција на полимераза транскриптаза (RT-PCR). 21 2.5.4 Електрофореза со гел од агароза. 22 2.5.5 PCR во реално време. 23 2.5,6 ЕЛИСА. 23 2.6 Хистолошки методи. 24 2.6.1 Подготовка. 24 2.6.2 HE боење. 24 2.7 Статистика. 25 3 резултати. 26-ти

ii 3.1 Nlrc5. 26 3.1.1 Геномска организација на глувчето Nlrc5. 26 3.1.2 Профил на изразување на Nlrc5. 27 3.1.3 Регулирање на Nlrc5 со Интерферон-γ. 27 3.2 Потврда за нокаут. 28 3.3 Базален фенотип на глувчето избришано со Nlrc5. 29 3.3.1 Базална хистологија на цревните органи. 29 3.3.2 Базални лабораториски вредности. 32 3.4 Модели на провокација. 33 3.4.1 Ендотоксин шок. 33 3.4.2 Стимулации од LPS in vitro. 35 3.4.3 Колитис предизвикан од натриум декстран сулфат (ДСС). 36 4 Дискусија. 42 4.1 Глушецот избришан од Nlrc5. 42 4.2 Изразување и индукција на глувче Nlrc5. 43 4.3 Бришењето на Nlrc5 штити во моделот на акутно воспаление. 44 4.4 Засилено воспаление на глувчето избришано со Nlrc5 во колитис предизвикан од ДСС. 47 4.5 Дихотомно дејство на Nlrc5 кај различни модели на воспаление. 49 4.6 Изгледи. 53 5 Резиме. 55 Библиографија. 56 Додаток Користени материјали. 61 Признанија. 63 CV. 64

iv RIG RLR RNA Rpm RPMI-1640 RT-PCR сирна SD SEM Tab. TAE Taq TH TLR TMB TNF Tube Well WT ген предизвикан од ретиноична киселина Ген индуциран од ретиноична киселина (RIG) како рецептор Рибонуклеинска киселина се врти во минута Меморијален институт во Росвел Парк, специфичен клеточен културен медиум Обратна верижна реакција на транскриптаза-полимераза Мала мешачка рибонуклеинска киселина Стандардна девијација Стандардна грешка на просечната табела Трис-Ацетат-ЕДТА Термофилус акватикус Т-помошна клетка Рецептор на патарина-тетраметилбензидин Фактор на некроза на тумор Пластичен сад за реакција Добро во реакционата плоча глувче од глувци или глувци како што е честа Англиски термини со закосени букви во ова дело. За попрецизна диференцијација, гените се напишани и со курзив, за разлика од протеините, а малите букви се користат за компонентите на глувците и големите букви за човечките суштества. Во оваа работа, најмногу се користи тековната номенклатура на комитетот за генетска номенклатура на организацијата за човечки геном од 2008 година. Исклучок е терминот рецептор сличен на нод, кој се користи за доменот на врзување со нуклеотиди и семејството што содржи богат со леуцин, поради неговата популарност.

Вовед 12 беше спроведен тест за ендотоксин шок во кој интерлеукин-1 игра голема улога. Од друга страна, се користеше сложениот модел на експериментален колитис, кој вклучува и акутна фаза со механизми за заздравување на рани и хронична фаза со стимулација на адаптивниот имунолошки одговор. Следниве прашања беа испитани во оваа теза: Може ли акутна или хронична инфламаторна реакција in vivo да се модифицира со генетски дефицит за Nlrc5? Како бришењето на Nlrc5 влијае на одговорот на цитокинот во акутната и хроничната инфламаторна реакција? Како структурната сличност на Nlrc5, со другите рецептори слични на Nod, познати по нивната поврзаност со одредени болести, влијае на неговата улога во вродениот имунолошки систем?

Материјал и методи 25 секунди 70%, 80% и 90% изопропанол, потоа 2 x 5 минути 100% изопропанол). Ова беше проследено со 3 минути хилол како органски растворувач и покривање во еукитт со лизгање на капакот. 2.7 Статистика Податоците се проценети со помош на програмата GraphPad Prism, софтвер GraphPas, Ла Jола, САД. Оваа програма потоа беше искористена за создавање на графикони.

Резултати 30 испитани промени. Островите Лангерханс се претставиле непроменети, меѓутоа, ако вредностите на креатинин кај глувците избришани од Nlrc5 се намалат, бубрезите исто така биле испитани поблиску, а гломерулите и тубулите не се променети. Генерално, глувците избришани од Nlrc5 покажаа хистолошки без никакви релевантни промени во однос на споредбената група на глувци од див тип.

Резултати 31 слезина Nlrc5 -/- глушец од див тип на глушец (C57BL/6) бели дробови лимфни јазли на дебелото црево панкреасот на бубрезите Сл. 7: Базална хистологија на глувчето избришано од Nlrc5 и глувчето од див тип боењето на ХЕ не покажа релевантни разлики.

Резултати 40 се важни. По обработката на cdna, изразот на избраните цитокини беше измерен со користење на PCR во реално време. Со 0,0024 релативни единици, изразот на интерлеукин-1β се зголеми за 1,7 пати кај глувците избришани со Nlrc5 (глувци од див тип: 0,0014). Изразот на интерлеукин-18 (1,8 пати), KC (1,4 пати) и интерферон-γ (1,7 пати) е исто така прикажан во дебелото црево на глувците избришани од Nlrc5 во споредба со дебелото црево на глувци од див тип. Глувците се зголемија по 30 дена DSS колитис. Спротивно на тоа, TNF-α беше регулиран редовно. Се покажа дека содржината на ЦДНА од 0.0006 кај глувците избришани од Nlrc5 е 0,6 пати помала отколку кај глувците од див тип (0,0011) (Слика 15). Интерлеукин-12 покажа стабилен израз.