А5 - Карактеризација на активноста на пептидите и олигосахаридите во млекото во однос на

проект менаџер
Проф. Г. Ерхард, проф. Д-р. Ц.Кунц

активноста

Вработен
Д-р С.Кунц, ПД Др. С. Рудлоф, д-р. C. Вајман,

Карактеризација на активноста на пептидите
Протеините што се наоѓаат во млекото (αS1-казеин (CSN1S1), αS2-казеин (CSN1S2), β-казеин (CSN2) и κ-казеин (CSN3), α-лакталбумин (LAA) и β-лактоглобулин (ЛГБ)) различни генетски варијанти кои имаат ефект врз соодветните секвенци на аминокиселини, а со тоа и врз пептидите кои произлегуваат од расцепувањето. Во зависност од варијантата на млечниот протеин, може да се појават други или евентуално нови биоактивни пептиди, чиј антихипертензивен ефект треба да се провери. Примероците на млеко од раси кои се јавуваат во Германија прво ќе се карактеризираат во полиморфните протеински системи со употреба на изоелектрично фокусирање. Во следното, различните варијанти на млечни протеини се анализираат во силициум диоксид за да се идентификуваат биолошки активни пептиди, исто така, земајќи ја предвид постојната база на податоци со некои многу ретки варијанти кај раси на говеда, загрозени од истребување (види слика 1). Со цел да се провери биолошката ефикасност на идентификуваните пептиди, тие потоа се тестираат во различни ин витро системи.

Предавања
Ерхард, Г. (2004): Генетски варијанти во млеко - важност за размножување на животните и исхрана на луѓето. Универзитетска конференција на Факултетот 09 на ЈЛУ Гисен на 10 декември 2004 година.
Caroli, A., Erhardt, G. (2005): Варијанти на млечни протеини за одгледување животни и исхрана на луѓето.
13. Конгресо Интернационале Дела Фе.Ме.С.П.Рум, 01.09.-03.09.2005 година, Валензано, Бари, Италија.
Ерхард, Г. (2005): Важноста на млечните протеини за одгледување на животни и исхрана на луѓето. Колоквиум „Молекуларни генетски и физиолошки карактеристики во сточарството“, 23.03.2005 година, Дамерсторф.

Вмрежување на МЕУ и надворешна соработка
Употреба на „платформата метод MEU, стабилни изотопи и клеточна биологија“;
Соработка со работната група на професорот Јержи ziиуба од Одделот за хемија на храна/Универзитет за земјоделство и технологија Олстин (Полска)

Соработка помеѓу Институтот за размножување животни и генетика на миленичиња и проф. Мејсел, Институт за хемија и технологија на млеко на Федералниот истражувачки центар за исхрана и храна (BfEL)

Почетната супстанца за истрагите беше колострумот од крави од различни раси. Овие беа германскиот Холштајн Ред Холштајн (А), германскиот Холштајн Црн Холштајн (Б), Jерси (Ц) и германски Флеквие (Д).

За да се изолираат олигосахаридите од млекото на различните раси на крави, млекото прво беше обезмастено, одвоено од протеините и отстранета лактоза (филтрирање со гел). Останатата фракција претставуваше олигосахаридна фракција и понатаму се карактеризираше по фракционирање во системот за размена на анјони, со пулсна аммерометриска детекција (HPAEC-PAD). Слика 2 ги прикажува хроматограмите HPAEC-PAD на фракциите на олигосахарид од различни раси.

Со помош на т.н. Proteoplex Microarray (MERCK), утврден е панел од 12 цитокини како одговор на 6-часовна инкубација со олигосахариди на кравјо млеко во концентрација од 10 mg/ml. Со цел да се идентификуваат можните клеточни цели на ефектите предизвикани од олигосахарид, се утврди нивото на изразување на целните протеини како што се NF-κB со користење на квантитативна RT-PCR и активирање на клеточни протеински кинази со употреба на т.н. ProteomeProfiler (R&D).
Кога го испитавме изразот на цитокин, можевме да покажеме дека пред сè, секрецијата на факторот стимулирачки за колонијата гранулоцити-моноцити (ГМ-ЦСФ) и секрецијата на интерлеукин-8 беа значително зголемени. Оваа зголемена секреција беше поврзана со зголемување на изразот на NF-κB и активирање на протеинските кинази p38 и PKB во сите случаи.
Наспроти позадината дека секрецијата на IL-8 е процес зависен од NF-κB и ова и преку изразување на GM-CSF, како и преку активирање на протеински кинази кои го таргетираат неактивниот NF-κB комплекс, ова се чини дека е случај можен механизам за демонстриран ефект на олигосахариди на кравјо млеко.

Вмрежување на МЕУ и надворешна соработка
Употреба на „платформата Меу Метју стабилни изотопи и клеточна биологија“ за функционални студии.

Предавања
Кунц Ц (2004): Генетски варијанти во млеко - важност за размножување на животните и исхрана на луѓето. Универзитетска конференција на Факултетот 09 на ЈЛУ Гисен

Кунц Ц (2006)
Олигосахариди во човечко наспроти млеко од говеда - потенцијални здравствени придобивки.
Состанок „Меѓународна федерација на млечни производи“, Брисел

Кунц Ц (2006)
Млекото го прави тоа? - Од рана детска исхрана и болести во староста.
Универзитетска конференција на одделот 09