ЧЕКОР 1

КОМПЛЕКСЕН СИСТЕМ ЗА Откривање на некои медицински супстанции
ХОРМОНАЛЕН И КСЕОНЕСТРОГЕН, ВО НАНОСКАЛ, ВО ВОДОВИ ИЗВОРИ

GC-MS LC-MS

ЧЕКОР 1

VI. заклучоци

  • Во текот на оваа фаза, активностите се фокусираа главно на презентација на главните супстанции со ендокрино дејство и естроген стероидни хормони.
  • Извршен е преглед на аналитичките техники користени за утврдување, имено: ▪ земање примероци и подготовка на примероци од животната средина; Xtекстракција; ▪концентрација, ▪ изолација и прочистување, како и ▪ определувања на GC/MS
  • Друга насока на студијата е насочена кон ин витро системи за тестирање за естрогенски ефект на хемиски соединенија, имено: ▪имунолошки определувања; ▪ биолошки определувања засновани врз рецептори, ▪ биоактивност-водич за фракционирање и анализа; Обезбедување на квалитет за анализите на ЕАС
  • Во трудот се претставени најкористените методи за анализа на ендокрините активни супстанции: ▪органохлорирани инсектициди; Yполихлорирани и полибромирани бифенили (PCB, PBB), ▪ диоксин и слични соединенија полибромирани дифенил етери (PBDE); Алкилфеноли, алкилфенол етоксилати, фталати; ▪органостански соединенија ▪стероидни хормони ▪фитоестрогени
  • Стратегиите за ин витро тест за естрогенски ефект на хемиски соединенија се користат за испитување храна, примероци од животната средина и водење на специфична инструментална анализа за фракционирање на компонентите и потврда на структурата.
  • И покрај придобивките од биолошките проценки, хемиски видови сè уште ќе бидат потребни за фундаментално истражување за да се идентификува и разбере дејството на некои супстанции, за управување и ублажување на хемикалиите.
  • Меѓу супстанциите за кои постои сомневање дека имаат значително влијание врз човечкиот репродуктивен систем се бифенилите, дибен-зодиоксини, дибензофурани, ДДТ. Бројот на потенцијални супстанции се проценува на неколку стотици. Главно се работи за феноли и бисфеноли. Но, исто така, ароматичните супстанции кои немаат фенолни групи можат да поминат низ метаболизмот на феноли, на пример, деривати на метоксихлор, полихлоробензен, што може да има естрогеномиметичко дејство. Исто така, постојат супстанции кои немаат ароматична структура и се активни (ендосулфан, диелдрин, кепон, токсафен).
  • Така, и хемиските и биолошките анализи се механизам за разбирање на ризикот предизвикан од некои хемикалии во комплексни мешавини на природни или антропогени загадувачи.
  • Некои размислувања од прегледот на овие податоци од идниот истражувачки материјал вклучуваат [1]:
  • приоритет за проучување на контаминирани области, процеси на третман, биоакумулација на мешавини на POP кај цицачи и EAS преку човечка исхрана.
  • подобра интеграција на методите за тестирање за различни класи на EAS.
  • неколку процедури и техники за автоматско и селективно извлекување и концентрација (на пр. колони за имуно-афинитет)
  • методите исто така мора да вклучуваат метаболити на ксенобиотици како потенцијални ЕАС,
  • зголемување на употребата на методи на ЛК/МС на штета на оние засновани на ГЦ/МС кои бараат дериватизација. Ова ќе бара подобра техника на структурна потврда отколку тандемска масена спектрометрија и веројатно поголема употреба на изотопски обележани соединенија како внатрешни стандарди за да се поправат матричните ефекти.
  • развој на биоаналитички алатки каде сепарацијата, спектроскопијата и биолошкото откривање се поврзани за да се обезбедат информации за хемиските ефекти и својства, вклучително
  • квантитативните корелации помеѓу биореспонцијата и хемиските податоци се моќни алатки, но бараат резервирани размислувања за збунувачки фактори.
  • поголема усогласеност со принципите на осигурување на квалитетот во смисла на валидација на методот, повторна верификација на работата, рекалибрација, тестови за потврда и меѓулабораториски студии.

СТАНА 2

V. Заклучоци

Ксенобиотиците содржат широк спектар на хемиски структури со естрогенски својства претставени во првиот извештај за истражувањето. Оваа разновидност го отежнува предвидувањето на естрогеноста на ксенобиотиците само врз основа на структурата.

Постоечките естрогенски супстанции во животната средина ги елиминираат луѓето и животните или во нивната природна состојба или во форма на естрогенски деривати на глукуронски киселини и сулфати.

Целта на овој чекор е да се воведе, прилагоди и развие и оптимизира за сегашна употреба комбинација на аналитички и биолошки метод. .

Биолошкиот метод in-vitro тест за откривање на естрогенски супстанции ќе се комбинира со тенок слој хроматографска аналитичка техника (HPTLC).

Биолошкиот тест познат како Sumpter Test беше наменет да се модифицира на ниво на дејство на хроматографската плоча под услови на нејзино претходно условување. Во оваа смисла, плочите ќе имаат слој од клетки од квасец во лиофилизираната фаза, условени со коплимер и бакарни јони, по можност од ацетат.

Целта е да се има при рака скрининг тест на композициите и изолираните супстанции достапни во секое време без потреба да се постигне оптималниот момент во еволуцијата на културата на квасец. Тестовите сега се изведуваат или со потопување или со прскање на примерокот што треба да се испита со култура на квасец во поволна фаза на еволуција. Оттука, честопати контрадикторните резултати и недостатокот на репродуктивност, особено во квантитативните определби.

Исто така, хроматографијата со тенок слој со високи перформанси овозможува проценка на методите на елуирање во согласност со својствата на супстанциите што треба да се одделат, уживајќи во добра репродуктивност. Цврстите потпори се со голема разновидност, со што е можно да се опфатат широк спектар на опции.

Супстанциите може да се зачуваат на хроматографската плоча, со што е можна употреба на други методи за откривање FT-IR, RES, според методите развиени во други апликации во рамките на нашиот тим.

Со масена спектрометрија и нуклеарна магнетна резонанца, сепот носи доказ, по правилна обработка, за структурната идентификација на супстанциите со ендокрино дејство.

Во иднина, комбинацијата на овој хроматографски тест со автобиографско откривање ќе биде проследена со соседниот тест за виталност што ќе може да обезбеди информации во врска со цитотоксичноста на испитаните супстанции.
Преку овој тест, ќе се добијат информации во врска со количината, идентитетот и цитотоксичното биолошко дејство на супстанциите или компонентите во испитуваните мешавини.

Бидејќи фазата на раст, во која се наоѓаат клетките на квасецот, е важен параметар, се препорачува да се подигне крива на раст на културата за секој експеримент. Клетките мора да бидат во фаза на множење непосредно пред експоненцијалната фаза на раст кога се депонираат на хроматографската плоча.
По околу 5 часа инкубација на плочата, клетките достигнуваат експоненцијална фаза на раст.
Корелацијата помеѓу оптичката густина и логаритмот на бројот на клетката е линеарна до оптичката густина од 1,2. Тогаш е можно да се добие за ист број на клетки различна оптичка густина.Затоа, инкубацијата и еволуцијата на културата не треба да надминуваат DOmax = 1,2

Оптимизацијата на тестот мора да се изврши со оптимизирање на секој параметар.
Прскањето на плочките доведе до диференцирано навлажнување на почетокот на употребените плочки од силика гел.
Потопувањето на плочите е пожелно бидејќи обезбедува еднообразно мокрење.

Таложењето е тестирано со употреба на Ndiisopropylacrylamide кополимер со акрилна киселина во различни мономерни односи за да се промени вискозитетот за да се подобрат карактеристиките на адсорпција и стабилност на квасец.
Дополнителната импрегнација беше извршена со раствор на бакар ацетат со цел да се овозможи изведување на некои тестови за мерење во иднина со електронска резонанца на центрифугирање, што ќе овозможи добивање на некои информации за локалната динамика и форми на комплексија во рамките на тестот.
Со цел да се избегнат погрешни толкувања поради токсичноста на некои растворувачи, беа тестирани растворувачи и мешавини на растворувачи кои се користат за елуирање или екстракција на примероци. Од нив, толуенот и ДМФА покажаа токсичност за културата на квасец. Со цел да се избегне употреба на органски растворувачи во елуирање и за подобра подготовка на хроматографските плочи за инкубација, тестирањето на обратна фаза хроматографски плочи ќе биде продолжено. (RP-18W F254). Во оваа ситуација, елуирањето може да се изврши во водни медиуми, тампонски раствори.

Следно, ќе се развие протокол за одделување на супстанции во примероци од реална вода за универзална употреба, како за води со големо оптоварување со неорганска природа, тешки метали, така и за една со оптоварување од органска природа. Преовладувачката ориентација ќе биде во насока на површински води, како извори на одржување на подземните води за водоснабдување, така и директни извори на вода за пиење, органски состав до вода во мрежата, третирани со хлорирање.

Естронот (Е1) и Естриол (Е3) може да се детектираат до концентрации од 10 µg/L (E1) и 2 mg/L, бис-фенол-A (Bis-A)> 30 mg/L со директно нанесување на подлогата хроматографски без обработка на примероци.

Користејќи адсорбентни касети, границите на откривање можат значително да се намалат за приближно 103-106 пати.
Со калибрирање на нивниот капацитет на задржување, ќе биде можно да се направат квантитативни проценки во однос на откриеното ниво на ксено- и естроген.

Тестот е корисен при скрининг на разни извори на вода за квалитативно идентификување на присуството на ксеноестрогени.

Отпадните води ќе бидат цел во следните фази каде главно ќе се изучуваат можностите за нивно третирање.

Зачувувањето на примероците е важно затоа што стабилноста на естрогенот е ограничена во повеќето ситуации во животната средина, како што се отпадните води. Подготовката на примерокот е често многу непогодна, а од друга страна квалитетот на прочистувањето на примерокот е важен при изборот на аналитички методи за тестирање. Естрогенските стероиди до одреден степен се елиминираат во форма на соединенија, и од страна на луѓето и од животните. Евалуацијата на метаболитите и соединенијата за деградација е актуелна тема во истражувањето на метаболомиката ширум светот.

Неколку методи на аналитичко одредување се препорачуваат во литературата за анализа на естроген во околината.

Методи засновани на УВ, GC-FID или HPLC техники не се препорачуваат поради ниска чувствителност и селективност.

Едностепена хроматографија на масена спектрограф (GC-MS или LC-MS), како и употреба на имунохемиски техники се минималните потребни методи кои обезбедуваат сигурни резултати. Може да се види дека и GC-MS и LC-MS се користат дури и во случај на комплексни одредувања за вредностите на LOD = 0,3 -5 ng/L.

Препорачани структурни техники за карактеризација на естроген се LC-MS-MS или GC-MS-MS и NMR на високо-чувствителни нуклеарни сонди прилагодени на мали количини што можат да бидат изолирани, покажувајќи чувствителност и чувствителност од 0,1 ng/L (LOD) = 0,1 ng/l). Директните методи со граници на откривање помали од 0,1 ng/L содржина на естроген сè уште не се комерцијално достапни. Овие примероци може да се проценат, бидејќи вклучуваат неколку фази на истражување при подготовка на примероци, веројатно со употреба на инструменти тројно-квадропол.

Имунохемиските методи се исто така многу чувствителни (за граници за откривање на ЛОД = 0,05 - 850 ng/L) барем за анализа на примероци на отпадни води и ефлуенти од постројки за третман на вода, но селективноста е мала во споредба со инструментите како што се трипл-четворка. Исто така, имунохемиските методи претставуваат проблеми поврзани со ниската селективност и пречките произведени од други соединенија присутни во примероците подложени на анализа. Поради овие ограничувања, имунохемиските методи не се препорачуваат сами како метод за анализа, но мора да се удвојат или комбинираат, преку внимателно избрана стратегија, со определувања на LC-MS-MS или GC-MS-MS или дури и со „едноставни " БЛАГОДАРАМ.

ЧЕКОР 3

VI. заклучоци

ЧЕКОР 4

V. ЗАКЛУЧОЦИ