HPLC анализа на оптимизација на методот на витамин Ц и создавање референтна вредност - PDF бесплатно

Од Централната лабораторија во кампусот Либек на Медицинскиот центар на универзитетот Шлезвиг-Холштајн Раководител: проф. med . Seyfarth и медицинскиот факултет на Универзитетот во Либек Дин: Проф. med . Solbach HPLC анализа на витамин Ц: оптимизација на методот и создавање на референтна вредност Инаугуративна дисертација за добивање на докторат од Универзитетот во Либек - од медицинскиот факултет - презентирана од Корнелија арлен Фоке од Бремен Либек 2010 1

оптимизација

1. Известувач: проф. Д-р. медицински икаел Сејфарт 2-ри известувач: Прив.-Доз. Д-р медицински Ден на устен испит Гинтер Еиц: 06.09.2009 година одобрен за печатење. Либек, 6 септември 2010 година го потпиша проф. медицински ернер Солбах - декан на Медицинскиот факултет 2

јаде што е мерливо. (Галилео Галилеј) 3

2.2.8 Студии за стабилноста на примероците. 31 2.2.9 Оптимизирани HPLC методи за одредување на аскорбинска киселина во серумот и плазмата. 32 2.2.10 Истражувања на урината и алкохолот витамин Ц 32 2.3. Валидација на методот. 33 2.3.1 Испити за исправност. 33 2.3.2 Прецизни студии. 2.3.3 Истраги за границата на откривање и квантификација. 34 2.3.4 Истражувања за линеарноста на мерењето. 34 2.4 примена на методи: одредување на референтни вредности и испитувања на кинетиката на витамин Ц. 34 2.4.1 Референтни вредности. 34 2.4.2 Кинетика. 35 2.5 Статистички методи. 35 3. Резултати. 37 3.1 Оптимизација и валидација на методот. 37 3.1.1 Стационарна фаза. 37 3.1.2 Фаза на језивост. 37 3.1.3 Внатрешен стандард. 40 3.1.4 Точност. 40 3.1.5 Прецизност. 41 3.1.6 Граница за откривање. 41 3.1.7 Линеарна зона за јадење. 42 3.1.8 Стабилност на примероците од витамин Ц. 42 3.1.9 Мерење на примероци од урина и CSF. 46 3.2 примена на методи. 47 3.2.1 Определување на референтна вредност. 47 3.2.1.1 Испитување за разлики специфични за возраста. 49 3.2.1.2 Испитување за родово специфични разлики. 51 3.2.2 Кинетика на витамин Ц. 53 4. Дискусија. 56 4.1 оптимизација на методот. 56 4.2 Ограничувања на методот. 58 4.3 Референтни вредности. 58 4.4 Кинетика. 59 4.5 Можни употреби. 60 4.6 Изгледи. 60 5

5. Резиме. 61 6. Додаток. 62 Библиографија. 67 Признанија. 80 биографија. 81 Декларација за независност и декларација за примена. 82 6

Слика Слика Аква дестилирана вода d ден ECD електрохемиско откривање EDTA етилендиаминтетрацетна киселина HPLC течна хроматографија со високи перформанси I.U. меѓународни единици i.v. интравенски кг кг кг телесна тежина л литар ЛДЛ липопротеин со мала густина мг илиграм мин инул мл илитрирач μмол икромол ммол илимол ПА метафосфорна киселина на наноампер бр. Број pavk периферна артериска оклузивна болест PCA перхлорна киселина rp HPLC обратна фаза HPLC RT собна температура видете во табулаторот за SD стандардно отстапување. Револуции на табелата U УВ ултравиолетови V волти VK коефициент на варијација 7

Покрај тоа, преку интерфејс што овозможува систем да се контролира и податоците за мерењето да се снимаат и проценуваат преку компјутер. Сл. 5: Претставување на HPLC систем со подвижна фаза (растворувач), пумпа, систем за вбризгување (инјектор), колона (колона HPLC), детектор (детектор), отпад (aste) и поврзан компјутер за проценка на податоците (податоци) ( http://www.chemistry.nmsu.edu/instrumentation/aters_hplcsystem.gif). Бидејќи соединенијата се задржуваат на цврстата фаза во различни временски периоди (време на задржување), супстанциите може да се идентификуваат, т.е. квалитативна анализа. Во хроматограмот, графичкиот приказ на сигналот на детекторот (y-оска) наспроти времето (x-оска), висината на отклонувањето, т.н. врв, исто така овозможува одредување на концентрацијата, т.е. квантитативна анализа, преку пресметка на висина или површина. Сл.6: Пример за хроматограм. Количината на отклонување (оска y) е исцртана во однос на времето (x-оска) (време на задржување). А и Б покажуваат два врва со различна висина. 20-ти

Систематско испитување на стабилноста на примероците во различни медиуми Создавање референтни вредности за различни возрасни групи Истражување на кинетиката на витамин Ц кај здрави волонтери Покрај тоа, треба да се провери дали оптимизираниот метод е фундаментално погоден и за одредување на витамин Ц во други биолошки течности, особено во урината и цереброспинална течност. 26-ти

2. Материјал и методи 2.1 Опрема, материјали за испитување, хемикалии 2.1.1 Опрема HPLC систем: L-6220 Интелигентна пумпа (Erck Hitachi) D-6000A Интерфејс (erck Hitachi) AS-2000A Autosampler (Erck Hitachi) Degasser (Knauer) L- 4250 УВ-ВИС детектор (erck Hitachi) Амперометриски детектор L-3500A (рецепт за ерк) HPLC колона и заштитна колона: Синерги 4 µm Hydro-RP 80A 150 x 4,6 mm (Phenomenex 00F-4375-E0) SecurityGuard Guard Cartridges, AQ -C18 кертриџ 4 x 3,0 mm (Phenomenex AJ0-7511) HPLC софтвер: odel D-7000 Chromatography Data Station Software HPLC system anager (erck) Систем за филтрирање: Уред за филтрирање со вакуум (илипор) Филтер за ацетат на целулоза 0,2 μm големина на порите ( Sartorius AG 11107-47-N) Други уреди: ултразвучна бања со ph-eter (ettler Delta 345) Vortex ischer aage (ettler Toledo Ag 241) 2.1.2 Серуми, плазми, алкохол и урина Серуми и плазми: За развој и валидација на методот Остаток на серуми и плазми, урина и течности од рутинска анализа на централната лабораторија на У. универзитетска болница 27