Матрикс металопротеинази и нивни инхибитори во текот на експерименталниот хроничен

Матрикс металопротеинази и нивни инхибитори во текот на експерименталниот хроничен панкреатит.

матрикс

Металопротеинази на матрицата и нивни инхибитори во текот на експерименталниот хроничен панкреатит. урна: nbn: de: gbv: 28-diss2010-0068-5

5 тези 48 6 Список на кратенки 51 7 Литература 52 8 Признание 66 9 Декларација за независност 67 3

Слика 1: Клетките функционираат под влијание на протеолитички активни ММП. (А) Деградација на ECM и миграција на клетки. (Б) индукција на пролиферација или апоптоза. (В) Модулација на медијатори и нивни рецептори. (Г) Активирање на понатамошни протеази со расцепување на нивните проензими или нивниот инхибитор (Ву и Верб, 2000). 3 Матрикс металопротеиназите се група од над 20 познати цинк-зависни протеази. Овие се во состојба да ги разградат основните компоненти на вонклеточната матрица, како што се колаген, ламинин, фибронектин или еластин. Поради нивната структура од различни домени, ММП може да се поделат во четири групи: матрилизин, ММП со домени слични на хемопексин, ММП со трансмембрански домени, ММП со домени слични на фибронектин. Сите ММП имаат регион потребен за лачење, се во латентна состојба и имаат каталитички регион кој содржи активно место за врзување на цинк. 53 Сепак, класификацијата на ММП се заснова на поделба на семејства што ги сумираат подлогите на ММП (Таб. 1). 52 13

Ова исто така важи и за про-ензимите. Преклопувањето на специфичноста се објаснува со 50% низа хомологија на TIMP-1 и TIMP-2. 58,61 Како резултат на активноста на ММП зависи од односот на ММП и ТИМП во ткивото. Промените во оваа рамнотежа водат или до значително зголемена протеолитичка активност на ММП 59 или до зголемена фиброгенеза. 60 Име TIMP-1 TIMP-2 TIMP-3 TIMP-4 Функција Инхибира Pro-MMP-9 и други активни MMPs Инхибира Pro-MMP-2 и активен MMP-2 Не е дефинирано Не е дефинирано Табела 2: Инхибитори на ткиво на металопротеинази на матрица ( TIMP) и нивните функции Слика 2: Каскада на активирање на матрикс металопротеиназите од страна на катепсин и плазмин. Автоматско активирање на Pro MMP со активни MMP и MT MMP 1. Инхибиција на деградацијата на матрицата од страна на TIMP. (Еванс и сор. 1999) 61 15

Должина на ампликонот TIMP 2: 453 bp TIMP 2 Antisense CAA CAG GCG TTT TGC AAT GCA GA должина: 23 bp CCC ATT GAT GCT CTT CTC TGT GA должина 23 бп вектори pqr2 и pqr3 од Graham M.A. Велс, Neures Limited, Велика Британија. 2.1.3 Бафери и раствори Комаси Блу раствор DBTC раствор DEPC-H 2 O 1 дел глацијална оцетна киселина (50 ml) 3 делови изопропанол (150 ml) 6 делови H2O (300 ml) Додадете 0,25 g Comassie Blue до 100 ml (1,25 g). Растворете го DBTC со 96% етанол во два дела. Потоа се меша со три дела глицерол. Инкубирајте 1 L dh 2 O со 1% DEPC преку ноќ. Потоа деактивирајте го DEPC со автоклавирање. Еозин 2,5 g еозин (индекс на боја бр. 45380) 500 ml H 2 O HBSS + FCS Mayers Hematoxylin PBS (солен раствор на фосфат) Полиакриламид електрофереза ​​пуфер 50 ml HBSS и 15 ml FCS 4%, ставете го на мраз. Следното се раствора во 750 ml вода: 50g алуминиум сулфат (KAl (SO 4) 2 12H 2 O) 1g хематоксилин (индекс на боја бр. 75290) 0,1 g натриум јодит (NaIO 3) 1,0g лимонска киселина 50g хлорохидрат Ad H 2 O до 1000ml 120mM NaCl 170 mm NaH 2 PO 4 3 mm KCl 26 mm KH 2 PO 4, pH 7,2 3,03 g (0,025 M) Трис 14,1 g (0,152M) глицин 1,0 g (0,1%) SDS на 1000 ml со H 2 O пополнети. Тампон P1, Qiagen 50mM Tris ph 8,0 10mM EDTA Rnase A (400μg/ml) Тампон P2, Qiagen 200mM NaOH 1% SDS Буфер P3, Qiagen 2,55M KAc ph 4,8 тампон QBT, Qiagen 750mM NaCl 50mM МОПС 15% етанол ph 7,0

Бафер QC, Qiagen Buffer QF, Qiagen Stop Solution Subfrat Buffer TAE Buffer 1L 1M NaCl 50mM MOPS 15% Ethanol Ph 7,0 1,25M NaCl 50mM MOPS 15% Ethanol ph 8,2 25mg Orange G 2.5g Ficoll 400 EDTA 0.5M 50mmol/l Tris ph8 + 5mmol/l CaCl2 242 g Tris 57 ml оцетна киселина 96% 100 ml EDTA 0,5M ph8 до 1000 ml H 2 O дистрибуиран. Трис пуфер Tris-HCl 1 M во DEPC-H 2 O, pH 7,4 раствор на Тритон 2,5% 10 ml Тритон + 490 ml H2O 2.1.4 Медиуми за бактериска култура Бактерискиот сој што се користеше беше Escherichia coli соединение DH5 од Gibco BRL (Еггенштајн, Германија) . Културни медиуми за раст на бактериите се добиени од Difco Laboratories, Детроит, САД. Ампицилин LB агар плочи Додадете 100 mg/l ампицилин во агарните плочи LB. ЛБ агарски плочи Лурија Бертани (ЛБ) - екстракт од 5g квасец од средна големина 10g триптичен пептон 10g NaCl аква дест. 15g агар H 2 O преобразувајте на 1l 5g екстракт од квасец 10g триптичен пептон 10g NaCl аква дест. Прилагодете се на pH 7,4 H 2 O повторно. Со 1 N NaOH. до 1 l тампон за трансформација 10% (wt/вол) полиетилен гликол 1500 30mM MgCl 2 во LB-медиум 2,1,5 комплети Qiagen Miniprep Qiagen Maxiprep QIAquick Spin RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Германија Qiagen, Hilden, Германија Qiagen, Hilden, Германија Qiagen, Хилден, Германија 20