Од Медицинската клиника и Поликлиниката II - Грохадерн

Од Медицинската клиника и Поликлиника II - Грожахарден на Универзитетот Лудвиг-Максимилијанс-Минхен Ком.Директор: Проф. медицински Ефект на A. L. Gerbes на силно намалување на телесната тежина (диета наспроти стомак на ракав) врз воспаление и метаболизам на гликоза кај дебели пациенти со дијабетес тип 2 Дисертација за стекнување на докторска диплома по медицина на Медицинскиот факултет на Универзитетот Лудвиг Максимилијанс во Минхен претставена од Катрин Видински од Минхен 2015

клиника

Со одобрение на Медицинскиот факултет на Универзитетот во Минхен. медицински Клаус Г. Пархофер Ко-известувач: Прив. Доз Д-р Максимилијан Биелохуби Проф. Др. Кристин Мејзингер Ко-надзор од страна на вработениот доктор по наука: д-р. медицински Бенедикт Аулингер Дин: Проф. медицински Дент Рајнхард Хикел Ден на устен испит: 19 ноември 2015 година

Со ова изјавувам наместо заклетва дека ја напишав оваа дисертација на тема ефект на силно намалување на телесната тежина (диета наспроти стомак на ракав) врз воспаление и метаболизам на гликоза кај дебели пациенти со дијабетес тип 2, дека не сум користел никакви други помагала освен наведените и дека ги направив сите наоди кои се преземени од литературата во целост или приближно, обележани како такви и идентификувани индивидуално според нивното потекло со именување на изворот. Јас исто така изјавувам дека дисертацијата презентирана овде не е доставена во иста или во слична форма на друга институција заради добивање академска диплома. Место, датум Потпис на кандидат за доктор

Содржина А вовед. 1 I Дебелина, дијабетес и атеросклероза. 1 II воспаление. 1 III Важни пептиди во генезата на дијабетес и атеросклероза. 4 IV Терапевтски опции. 8 1 Опции за конзервативен третман. 8 2 Опции за хируршки третман. 8 2.1 Рестриктивни процедури. 9 2.2 Рестриктивни процедури со малапсорптивни компоненти. 9 2.3 Малапсорптивни постапки со ограничувачка компонента. 9 V Прашања и цели. 11 Б Материјал и методи. 12 Јас материјал. 12 II методи. 17 1 Клинички-експериментален дел. 17 1.1 Дизајн на студија и учесници. 17 1.2 Постапка и посети. 18 1.3 Операција на стомакот на ракавот и диета. 19 1.3.1 Група на гастрични ракави. 19 1.3.2 Диета група. 20 1.4 Хипергликемични и хиперинсулинемични - евгликемични стеги. 20 1.4.1 Хипергликемиска стегалка. 21 1.4.2 Хиперинсулинемичен - евгликемичен стегач со биопсија на масно ткиво. 22 2-ри дел од лабораторискиот експеримент. 23 2.1 Елиса и фотометриски метод на мерење. 23 2.2 Полимеразна верижна реакција. 23 2.2.1 Екстракција на РНК вклучувајќи варење на ДНаза. 23 2.2.2 Обратна транскрипција - PCR (RT - PCR). 24 2.2.3 Квалитативни PCR. 25 2.2.4 квантитативна PCR во реално време (qrt-PCR). 26 јас

3 хистологија. 28 4 статистичка проценка на резултатите. 28 резултати од Ц. 29 I Основни податоци на учесниците во студијата. 29 II Снабдување со енергија и состав на храна. 30 III развој на БМИ и промена на обемот на половината. 32 IV промена на шеќер во крвта на гладно, HbA1c и лекови. 33 V Проценка на стегите како основа за одредување на инсулинска резистенција. 36 VI Промена на чувствителноста на инсулин. 37 VII Промена на параметрите на воспалението. 40 VIII Анализа на хистолошко масно ткиво. 51 Д Дискусија. 53 Јас внесување на енергија и губење на тежината. 53 II Подобрување на метаболизмот на глукозата. 54 III Промена на воспалението. 56 IV Промена во NT-ProBNP. 59 V Алтернативни објаснувања за подобрување на метаболизмот на гликозата. 60 VI Ограничувања на студијата. 61 Е резиме. 63 F Список на кратенки. 68 G Список на слики. 70 H Список на табели. 72 I Библиографија. 73 Ј Признанија. 83 II

Ниска рестриктивна компонента, која главно се користи кај пациенти со БМИ> 50 кг/м 2 (1, 75). За сите опишани лапароскопски процедури, периоперативната смртност е под 1% и изборот на интервенција зависи од повеќе фактори (на пример, БМИ, возраст, коморбидитети) (1). Заедничко за сите процедури е важноста на блиската постоперативна нега со цел да се обезбеди трајно губење на тежината и да се спречат симптомите на недостаток (1, 75). Сл. 2а: Гастричен појас, земен од (1) Сл. 2б: Стомак на ракав, земен од (1) Сл. 3а: Roux-en-Y Гастричен бајпас, земен од (1) Сл. 3б: Пренасочување на билиопанкреасот со дуоденален прекинувач од (1) 10

Вчитување на тампон ДНК 6x 10mM Tris (ph 7,6), 0,03% (w/v) бромофенол сино, 0,03% (w/v) ксилен цијанол, 60% (v/v) глицерин, 60 mm EDTA PBS 10 x ( ph 7,4) 1,37 M NaCl, 26,8 mm KCl, 81 mm Na 2 HPO 4, PBS 1x (ph 7,4) разредувач на реагенс (ph 7,4) TAE 1x TAE 50x гелови агарозен гел (1 %) 14,7 mm KH 2 PO 4 10% (v/v) PBS (10x) 10% (v/v) PBS (10%), 1% (w/v) BSA 2% (v/v) TAE (50x) 2 M Tris, 1 М глацијална оцетна киселина, 0,05 М EDTA агароза LE во TAE 1x, комплети етидиум бромид За употребените комплети, испорачаните раствори и пуфери беа користени според протоколот на производителот. RNase-Free DNase Set Qiagen, Hilden, Германија RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Германија SuperScript III Систем за синтеза на први влакна Инвитроген, Карлсруе, Германија Ензим При употреба на ензими, се користеа растворите и баферите препорачани и доставени од производителот. АмлиТак злато ДНК полимераза применети биосистеми, Карлсбад, САД (5U/μl) Деоксирибонуклеаза I, засилување инвитроген, Карлсруе, Германија одделение (1U/μl) Taq ДНК полимераза, рекомбинантен инвитроген, Карлсруе, Германија (5 U/μl) PCR прајмер ( Eurofins MWG Operon, Ebersberg) Низа на прајмери ​​(5-3) GAPDH (hm) напред агрегатgcttttaactctggt GAPDH (hm) обратна ccccacttgattttggaggga 13

Анализи на експресија на гени на TaqMan (применети биосистеми, Карлсбад, САД) Референтен редослед на генот (човекот) Број на нарачки TNF алфа NM_000594.2 Hs00174128_m1 MCP-1 NM_002982.3 Hs00234140_m1 IL-6 NM_000600.3 Hs00985600100000090000000000000000000000000000000000000010007001000700100070010006009007001000700100070010007000000000000000000000090070090090000000000000000900000090010007000000000000009001000700000000000000900000000000000140900000000000000000000001409000000000000000000000000000014090000001 FN1 Фибронектин NM_002026.2 Hs00365052_m1 адипонектин NM_001177800.1 Hs00605917_m1 RBP4 NM_006744.3 Hs00198830_m1 Vaspin (Serpina12) NM_173850.2 Hs005451801_m1, повикување NM73850.2 Hs005451801, повикување NM7451801, референтен број САД, NM7Bsequenzin системи, референтен број беше доделен на LightCycler-Bsequenzin, USA_genieds101, САД, NM7Bsequenzin мерено во клиничка хемија во болницата. Отсекогаш биле користени комплети Елиса за примероци од плазма кај луѓето. Параметар Производител нарачка број TNF-a ултрасензитивни R & D Quantikine KHC3014 лептин R & D Quantikine DLE00 MCP-1/CCL2 R & D Quantikine DCP00 на адипонектин R & D Quantikine DRP300 Resistin R & D Quantikine DRSN00 Фибронектин Abcam AB1088948 NT-ProBNP DRIN4150R6 Quantikine RD400 R&D Quantikine HS600B 14

2.2.2 Обратна транскрипција - ПЦР (РТ - ПЦР) Бидејќи РНК не може да функционира како образец за ДНК полимеразата, таа прво мора да се препише во ЦДНА (копија ДНК) (обратна транскрипција). Ова е направено со користење на системот за синтеза на прволинички SuperScript III за RT-PCR од производителот Invitrogen. Обратната транскрипција беше комбинирана со PCR за да се засили cdna. Пристапот 1 беше искористен за денатурација на РНК и е прикажан во Табела 2. Бидејќи изолираната концентрација на РНК од маснотијата за биопсија беше многу мала, 8 μl одговараа на максималното количество на достапна РНК. По инкубација 5 минути на 65 ° C и ладење 1 минута на мраз, беше додадена втората серија, чии компоненти се наведени во Табела 3. Потоа започна програмата RHRT PCR, како што е наведено во Табела 4. Табела 2: Мешавина на реакција (едноставна) за РНК денатурација РНК примерок дигестиран со ДНаза 8 μl Случаен хексамерен прајмер 1 μl dntp s (10 mm) 1 μl 10 μl Табела 3: Мешавина на реакција (едноставна) за мешавина на cdna синтеза 10 x RT Буфер 2 μl MgCl 2 (25mM) 4 μl DTT (0,1 M) 2 μl RNaseOUT 1 μl SuperScript III RT 0,5 μl вода третирана со DEPC 0,5 μl 10 μl 24

Таб. 4: Програма на PCR за обратна транскрипција во PCR термоциклер Температура Времетраење Чекор 25 C 10 мин. Анлење 50 C 50 мин. Синтеза на ЦДНА 85 Ц 5 мин. Престанок 4 Ц крај 2.2.3 Квалитативен ПЦР Да се ​​докаже успешна транскрипција на ДНаза варена Извршена е квалитативна ПЦР за РНК во ЦДНА. Како референца беше наведен хуман GAPDH (глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназа). Користени се Taq ДНК полимеразата (рекомбинантна, 5U/μl) од Инвитроген и реагенсите содржани во комплетот (Таб. 5). Програмата PCR беше спроведена во термоциклерот PXE 0.2 (корпорација Thermo Electron) и може да се најде во табела 6. Таб. 5: Серија реакции (едноставна) за стандарден PCR (контролен GAPDH) 10x PCR пуфер 2 μl мешавина од dntp (10mM) 0,4 μl MgCl 2 (50mM) 0,6 μl прајмер за 1 μl прајмер rev 1 μl шаблон cdna 1 μl Taq ДНК полимераза (5U/μl) 0,2 μl ddh 2 O 14 μl 20 μl 25