Ортотопски ендометријален карцином со ретроперитонеална лимфаденопатија направен од ин виво
Резиме
Овој протокол обезбедува стандардизиран метод за одгледување на VX2 клетки во културата и создавање на ортотопски VX2 модел на ендометријален карцином со ретроперитонеални метастази на лимфните јазли кај зајаци. Ортотопските модели на ендометријален карцином се важни за пред-клиничка истрага на нови модалитети за дијагностицирање на метастази во лимфните јазли.
Апстракт
Ракот на ендометриумот е најчеста гинеколошка малигност во Северна Америка и инциденцата се зголемува во целиот свет. Третманот се состои од операција со или без адјувантна терапија во зависност од зафатеноста на лимфните јазли, утврдена со лимфаденектомијата. Лимфаденектомијата е морбидна процедура која нема терапевтски придобивки кај многу пациенти, и затоа е потребен нов метод за дијагностицирање на метастази во лимфните јазли. Потребен е сигурен модел на ендометријален карцином со ретроперитонеални метастази во лимфните јазли за да се тестираат нови агенти за сликање. Моделот на ендометријален карцином VX2 е широко опишан во литературата; Сепак, постојат значителни разлики во методот на поставување на моделот. Покрај тоа, не се пријавени студии за употреба на култивирани VX2 клетки за да се изгради овој модел, бидејќи досега биле користени само клетки пропагирани ин виво. Ние претставуваме стандардизиран хируршки метод и постоперативен метод за следење за воспоставување на моделот на рак на ендометриумот VX2 и извештај за првата употреба на култивирани VX2 клетки за создавање на овој модел.
Вовед
Неколку групи пријавиле употреба на VX2 за моделирање на ендометријален карцином со ретроперитонеални метастази со висока пријавена стапка на успех 36, 51, 52; Во сегашната литература, сепак, постојат значителни разлики во методот на градење на моделот. Дози на клеточна суспензија се пониски од 4 x 10 5 клетки/рог на матка 51 и високи до 5 x 10 9 клетки/матка рог 37, 53 се пријавени без стандарден консензус за потребната доза на клетките VX2. Исто така, пријавени се различни начини на вакцинација, вклучувајќи микрохируршка имплантација на тумори во миометриумот на матката 36, вбризгување на VX2 клеточна суспензија 37, 44, 52, 53, а во некои случаи и додавање на конци на рогови на матка пред да се изврши невиулација 52 Конечно, ниту една група не пријавила употреба на култивирани VX2 клетки за да се создаде овој модел. Значи, целта на оваа студија е да демонстрира успешен стандардизиран метод на моделирање на VX2 и да се пријави првата употреба на култивирани VX2 клетки за моделирање на ендометријален карцином со ретроперитонеални метастази кај зајак.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Протокол
Длабоко затворање на абдоминалниот Wallид: Идентификувајте го врвот на перитонеалниот засек и фатете го перитонеумот, мускулот на ректусот и фасција со ткивна форцепс. Сите студии на животни беа спроведени во Центарот за ресурси на животни (АРЦ) одобрени од Универзитетската здравствена мрежа и во согласност со одобрените протоколи за употреба и нега на животни (AUP # 3994/# 4299). Клеточната линија VX2 е изведена од Др. Лабораторијата на Акен на здравствената мрежа на Универзитетот победи.
1. Изградба на ин витро VX2 клеточна линија
2. VX2 клеточна култура и формирање на клеточна суспензија
3. Поставување на хируршки модел
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Резултати од репрезентацијата
Со помош на нов агент за сликање, Порфисо, беа идентификувани 81 лимфни јазли интраоперативно и хируршки отстранети за хистолошка анализа. 74 лимфни јазли беа леви карлични лимфни јазли, 5 беа десни карлични лимфни јазли и 2 беа десни пара-аортни лимфни јазли. Лимфните јазли отстранети од зајаци со ин виво размножени VX2 тумори биле значително поголеми и понекротични отколку оние отстранети од зајаци со култивирани VX2 тумори со просечен волумен од 0,99 cm 3 (опсег 0,12-3,89 ) во споредба со 0,59 cm 3 (0,01 - 2,92) (p = 0,037). Зајаци со тумори размножени ин виво, исто така, имале поголеми некротични тумори на матката од зајаци со култивирани клеточни тумори со просечна должина од 5,6 см (4-6,8 см) и просечна ширина од 5,2 см (3,3-9 см) наспроти 3,6 см (2-5 см) или 4,56 см (3-7 см). Конечно, моделите на зајаци од VX2 клетки размножени in vivo имаа повеќе екстра-нодални абдоминални метастази отколку зајачки модели од култивирани клетки со 91% од сите метастази пронајдени кај зајаци размножени in vivo.
| Тип на модел | Ин виво модел на тумор VX2 | Културен модел на тумор VX2 |
| Број на успешни модели | 16 | 5 |
| Број на испробани модели | 22 * | 8-ми |
| Стапка на успех на моделот | 73% | 63% |
| Време од вакцинација до експеримент | 29 дена (24-31) | 45 дена (36-51) |
| Успешна доза на инјектирање | 1 x 10 7 | 40 х 10 6 |
| (5x10 6 по рог на матка) | (20 x 10 6 по рог на матка) | |
| Вкупна стапка на успех | 75% | |
| Севкупна стапка на успех пред шиењето на матката | 57% | |
| Севкупна стапка на успех по шиење на матката | 81% | |
Табела 1: Податоци за моделот, вклучувајќи експериментални услови, број на користени животни и стапка на успех. Два зајаци првично користени за култивирани клеточни тумори кои не успеаја да растат, подоцна беа искористени за модели in vivo тумори
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Дискусија
Тука пријавивме стандардизиран хируршки метод за воспоставување на VX2 модел на рак на ендометриумот и ја пријавивме првата употреба на култивирани VX2 клетки за создавање на овој модел. Стапката на навлегување на тумор од 75% е пониска од 100% процентот претходно пријавен во литературата 35, 37, 53, 56; сепак, стапката на патолошки потврдени метастази во лимфните јазли е 90% во согласност со претходните студии на овој модел 35, 53 .
Генерално, објавивме едноставен, стандардизиран метод за моделирање на ендометријален карцином со ретроперитонеална лимфаденопатија кај зајаци. Со овој протокол, ние се осврнавме на значајната варијабилност во VX2 литературата во однос на дозата на клетките, хируршката техника и следењето на постоперативниот модел. Признаваме дека друго ограничување на студијата е дека кога користиме клеточна линија VX2 наместо ксенографт кај луѓето, не ја имитираме биологијата на туморот и микросредината на човечки карцином. Сепак, се надеваме дека другите групи ќе ги користат култивираните VX2 клетки за да ги изградат своите модели, бидејќи веруваме дека овој тип на клетки може посигурно да го моделира ракот на ендометриумот кај човекот, заради неговиот побавен раст и намалена склоност кон метастатско-метастатско заболување. Ние ги охрабруваме другите групи да го користат овој брз и едноставен модел на ретроперитонеална метастаза на лимфните јазли, добиен од матката, за да истражат нови терапии со слики за да им помогнат на пациентите со метастатски карцином на ендометриумот.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Откривање
Авторите немаат што да откријат.
Признанија
Оваа студија беше финансирана од Институтот за истражување Тери Фокс (PPG-1075), Канадскиот институт за здравствено истражување (Грант за фондација # 154326), Институт за истражување на канадско друштво за рак (704718), Совет за истражување на природни науки и инженерство од Канада, Фондација за иновации и Фондација за рак на принцезата Маргарет.
Сакам д-р Би сакале да и се заблагодариме на Маргерита Акенс за обезбедувањето на првите VX2 клетки за воспоставување на оригиналниот модел VX2 и замрзнатите блокови на тумори VX2. Би сакал да му се заблагодарам на Марко ДиГрапа за поддршката во спроведувањето на првите експерименти со културата во клетките VX2 и на Лили Динг за поддршката со културата на клетките VX2.