Спречување на отпорност на лептин со блокирање на рецепторите за ангиотензин II (AT 1) во рамката
1 Од Институтот за експериментална и клиничка фармакологија и токсикологија на Универзитетот во Либек Директор: проф. медицински Маркус Шванингер Превенција на резистенција на лептин со блокирање на рецепторите за ангиотензин II (AT 1) во контекст на диета предизвикана од дебелина кај стаорци Инаугуративна дисертација за да се добие докторат од Универзитетот во Либек - од делот Медицина - презентирана од Маргот Лау, новороденче Терман од Либек Либек 2012 година
2 Прв известувач: проф. Д-р. рер. нат Валтер Рааш 2-ри известувач: проф. Д-р. медицински Д. Лудвиг 3. Известувач: проф. медицински П.Голке Ден на усно испитување: Одобрено за печатење: Либек, докторски комитет на медицински оддел
3 - За моите драги родители-
4 Содржина Содржина Содржина Содржина Вовед Дебелина на инсулин отпорност - Ренин-ангиотензин-алдостерон-систем (РААС) Материјал и методи Тест-протоколи Тест-животни Испитување на чувствителноста на лептин под телмисартан Испитување на толеранција на глукоза при долготрајно хранење со диета од кафетерија Подготовка на раствори Инсулин раствор Раствор на лептин или раствор на лек Супстанции Интраперитонеална апликација Орална апликација Поткожна апликација Екстракција на материјал Антикоагуланси и стабилизатори Собирање крв од опашката Убивање и отстранување на органи Тестови на функцијата Плетизмографско мерење на крвниот притисок Мерење на активност Тест на отпорност на лептин Тест на толеранција на толеранција на глукоза (OGTT)
5 Содржина Тест за толеранција на инсулин (ИТТ) Биохемиска анализа Радиоимуноанализа (РИА) Подготовка на хипоталами Екстракција на квантификација на мдрна мрна за синтеза на ЦДНА Квантитативна пресметка на PCR Western blot и статистички методи за резултати ) Влијание на телмисартан врз чувствителноста на лептин Влијание на третманот со телмисартан врз телесната тежина и внесувањето на енергија Влијание на третманот со телмисартан врз плазмалептин Влијанието на третманот со телмисартан врз потрошувачката на енергија под Телмисартан Истражување на толеранцијата на гликоза при долгорочно хранење со диета во кафетерија Влијание на диетата во кафетерија врз телесната тежина Потрошувачка на храна и вода под диета во кафетерија Влијание на диетата во кафетеријата врз телесната тежина Физичка активност Влијание на диетата во кафетеријата врз хемодинамиката Влијание на исхраната во кафетеријата врз базалните метаболички параметри Тест за толеранција на орална глукоза (OGTT) Тест за толеранција на инсулин (ITT) Влијание на диетата во кафетеријата врз преживувањето
6 содржини 4 Дискусија Влијание на блокадата на АТ 1 со телмисартан врз чувствителноста на лептин Внесување и потрошувачка на енергија под ЦД Влијание на ЦД врз развој на инсулинска резистенција Влијание на ЦД врз смртноста од SHR Outlook Резиме библиографија Додаток Листа на фигури Список на табели Супстанции и купени раствори Рецепти на решенија Стекнати Тест-комплети РИА-комплети Комплети за одредување на изразување на гени Потрошни материјали Уреди Список на кратенки Благодарници Биографија публикации Публикации објавувачи Награди и награди
22 Материјал и методи наследство, 8 mg/kg/d) или вода (H 2 O) третирана како контрола. Сите стаорци можеа да изберат помеѓу диетата во кафетеријата и стандардната диета. По десетдневна фаза на аклиматизација, стаорците беа рандомизирани во четири групи (n = 10): ТЕЛ/Третман на леп СД (n = 10) ТЕЛ третиран СД (n = 26) ТЕЛ/СД третиран СД (n = 10) ТЕЛ -третирана СД (n = 6): крвен притисок СД третиран СД (n = 20) Н 2 О/СД третиран со леп (n = 10) С 2 третиран СД (н = 10) Сл. 3: Режим на лекување за да се утврди чувствителноста на лептин под телмисартан (ТЕЛ) или контрола (H 2 O) со истовремено хранење со диета во кафетерија. На последниот тест на отпорност на лептин, стаорците Спраге-Доули (СД) добиле или лептин (леп) или физиолошки солен раствор (NaCl) инјектиран поткожно. Поради сложениот тест на отпорност на лептин на крајот од студијата, животните беа испорачани поместени за една недела, така што само 20 животни беа рандомизирани во четирите групи (n = 5) и протоколот за тестирање можеше да се спроведе аналогно префрлен за една недела (слика 4)
25 Материјал и методи 2.2 Подготовка на раствори Инсулински раствор Хуман инсулин (Insuman Rapid) во доза од 40 IU/ml се разредува 1:80 со 0,9% NaCl, така што 0,5 IU/ml е 0,5 IU/kg телесна тежина интраперитонеално Лептинскиот раствор (R&D Systems, рекомбинантен стаорец лептин, чистота> 97%) се раствори во 20 mm TRIS (трис (хидроксиметил) аминометан) пуфер, pH 8 и се разредува до концентрација од 100 или 200 µg/ml. За таа цел првично се користеше Tris тампон. Соодветната количина на Трис се мери и се дестилира во вода. растворен, пуфериран во саканата pH вредност со 5N NaOH и прилагоден на потребниот волумен со дестилирана вода. исполнет. Готовиот раствор беше стерилизиран филтриран Раствор на Телмисартан Растворот на Телмисартан (Boehringer, Ingelheim) беше составен во концентрација од 8 mg/ml. Информациите се однесуваат на раствор од 10 ml. Правот телмисартан е измерен во соодветна количина и целосно растворен во 2 ml раствор од 0,1 N NaOH. 6 ml дестилирана вода. беа додадени со пипета и се титрираа со 0,1 N HCl во рН опсег помеѓу 8,8 и 9,2. Конечно, со аква дест. направен до 10 ml
26 Материјал и методи 2.3 Примена на лекови или супстанции Интраперитонеална апликација Инсулинот се администрираше интраперитонеално (канила 0,4 x 13 mm, микролансирање на BD) во доза од 0,5 IU/kg. Орална апликација Оралната апликација на течности се одржа преку фаринксот, кој бил вметнат во хранопроводот откако животните биле абитутирани. 50% гликоза и телмисартан во доза од 8 mg/kg се администрира орално. Поткожна апликација Лептинот се инјектираше во доза од 100 и 200 µg/kg во медијалниот поткожното масно ткиво до скапулата во преклопот на кожата наместен за оваа намена (канила 0,4 x 13 mm, Микролансирање БД). 2.4 Екстракција на материјал Антикоагуланси и стабилизатори Параметрите лептин, инсулин, Ц-пептид, глукагон, адипонектин и кортикостерон се утврдени од плазмата во микроветти обложени со К-ЕДТА (Сарстед). На крвта на колење е додаден раствор на Na-EDTA во крајна концентрација од 12,1 mm за да се испита лептин во плазмата