Тилман Граулич

Стереол. Истрага г. Белите дробови и душникот Б. г. тумор-кач. Глушец VVB VVB LAUFERSWEILER VERLAG STAUFENBERGRING 15 D-35396 GIESSEN Тел: 0641-5599888 Факс: -5599890 [email protected] www.doktorverlag.de ISBN: 978-3-8359-6616-1 9 7 Gra 3ul 3il Едиција наука VVB LAUFERSWEILER VERLAG Тилман Граулич Стереолошки прегледи на регионот на размена на гасови на белите дробови и инервација на душникот во туморскиот кахектички глушец Инаугуративна дисертација за добивање на доктор на медицина во медицинскиот оддел на Универзитетот „Јустус Либиг“ Гисен 9 6 6 1 6 1 издание научен VVB VVB LAUFERSWEILER VERLAG

LAUFERSWEILER VERLAG

Делото е заштитено со авторски права во сите негови делови. Правната одговорност за целата содржина на оваа книга е исклучиво на авторот на ова дело. Секоја употреба не е дозволена без писмено одобрение од авторот или издавачот. Ова се однесува особено на репродукции, преводи, микрофилмирање и складирање и обработка од електронски системи. 1-то издание 2017 Сите права се задржани. Ниту еден дел од оваа публикација не смее да се репродуцира, чува во систем за пребарување или да се пренесува, во каква било форма или на кој било начин, електронско, механичко, фотокопирање, снимање или на друг начин, без претходно писмено одобрение од авторот или издавачите. 1st Edition 2017 2017 by VVB LAUFERSWEILER VERLAG, Giessen Печатено во Германија édition linguistique VVB LAUFERSWEILER VERLAG STAUFENBERGRING 15, D-35396 GIESSEN Тел: 0641-5599888 Факс: 0641-5599890 е-пошта: Redaktion@dokver

Стереолошки испитувања на регионот на размена на гасови на белите дробови и инервација на душникот во туморскиот кахектички глушец ИНАВГУРАЛНА ДИСЕРСТАЦИЈА за добивање на доктор на медицина на Медицинскиот факултет на Универзитетот „Јустус Либиг“ во Гисен презентиран од Тилман Граулич од Бохум Хановер 2017

Од Институтот за анатомија и клеточна биологија на Медицинскиот факултет при Универзитетот Јустус Либиг во Гисен Извршен директор: проф. Евелин Баумгарт-Вогт 1-ви рецензент: проф. Милфелд 2-ри рецензент: проф. Д-р. Ден на дискусијата на Вајшман: 04.09.2017 година II

Содржина Страна 1. Список на кратенки VI 2. Список на слики VIII 3. Список на табели IX I. Вовед 1 I.1. Анатомија на долниот респираторен тракт 1 I.1.1. Функција и метаболизам на сурфактант 4 I.2. Инервација на респираторниот тракт 6 I.3. Белите дробови при неухранетост и анорексија 7 I.4. Туморска кахексија 9 I.5. Кахексија на тумор и Долна Ервејс 10 I.6. Цел на работата 11 II.Материјал и методи 12 II.1. Експеримент врз животни 12 II.2. Подготовка и земање примероци 12 II.2.1. Земање примероци за микроскопија 12 II.2.2. Бронхоалвеоларна лаважа (BAL) 13 II.3. Подготовка на примероците 13 II.3.1. Земање примероци од примероци за микроскопија 13 II.3.1.1. Подготовка на примероците за светлосна микроскопија 14 II.3.1.2. Подготовка на примероци за имунохистохемија 15 II.3.1.3. Подготовка на примероци за електронска микроскопија (ЕМ) 17 II.3.1.3.1. Подготовка на примероците за конвенционална електронска микроскопија (ТЕМ) 17 II.3.1.3.2. Подготовка на примероците за имуноелектронска микроскопија (пред-постелување) 18 II.3.1.3.3. Подготовка на примероците за електронска микроскопија за скенирање (СЕМ) 19 II.3.2. Стереологија 19 III

II.3.2.1. Тома 21 II.3.2.2. Површини 23 II.3.2.3. Должини 24 II.3.3. Подготовка на примероци за диференцијална центрифугација 26 II.4. Статистика 26 III. Резултати 27 III.1. Тежина на телото и волумен на белите дробови 27 III.2. Микроскопија 27 III.2.1. Квалитативна микроскопија 27 III.2.1.1. Светлосна микроскопија 27 III.2.1.2. Имунофлуоресцентна микроскопија 30 III.2.1.3. Трахеален епител во 33 електронска микроскопија за скенирање (СЕМ) III.2.1.4. Квалитативна електронска микроскопија за пренос (ТЕМ) 34 III.2.2. Квантитативна микроскопија или стереологија 35 III.2.2.1. Белите дробови 35 III.2.2.1.1. Волумен на регионот на размена на гасови/паренхим 35 III. 2.2.1.2. Алвеоларна површина 36 III. 2.2.1.3. Алвеоларни епителни клетки тип II 36 III. 2.2.1.4. Однос на ЛБ со алвеоларниот епител 37 III. 2.2.2. Трахеа 38 III. 2.2.2.1. Инервација 38 III. 2.2.2.2. Состав на трахеалниот wallид 39 III.3. Диференцијална центрифугација за определување на сурфактант 41 IV. Дискусија 42 IV.1. Користена методологија 42 IV.1.1 Поставување експеримент, земање примероци, фиксација 42 IV.1.2. Стереологија 46 IV.1.2.1. Земање примероци 46 IV

IV.1.2.2. Референтни томови 47 IV.1.2.3. Тест системи во стереологија 48 IV.1.2.4. Ориентација на ткивото 50 IV.1.3. Имунохистохемија 51 IV.2. Дискусија за резултатите 52 IV.2.1. Алвеоларна површина 52 IV.2.2. Метаболизам на сурфактант 58 IV.2.3. Анализа на крв 60 IV.2.4. Инервација на трахеата 61 IV.2.5. Морфологија на трахеата 63 IV.2.5.1. 'Рскавица 63 IV.2.5.2. Епител 63 V. Резиме 65 VI. Резиме 67 VII. Користена литература 69 VIII. Преглед на материјал 82 VIII.1 Бафери и решенија 82 IX. CV 85 X. Благодарници 86 XI. Декларација 87 XII. Сопствени публикации 88 В.

1. Список на скратеници: Слика Слика ABCA3 касета за врзување АТП клетки AE1 клетки алвеоларна епителна клетка I AE2 клетки алвеоларна епителија клетка тип 2 AK Тип на антитела Артерија BAL бронхиоалвеоларна лаважа BGW сврзно ткиво BMP коска морфогено протеин бронхиус CGRP хондрол калцитонин Микроскопија со ласерско скенирање ДМЕМ Дулбеко Променет орел среден FBS фетален говедски серум FEV принуден експираторен волумен FGF фактор за раст на фибробласт FITC флуоресцеин изотиоцијанат ХРП рен Пероксидаза фон Engl. Horsradishperoxidase KG Контролна група KGF Фактор за раст на кератиноцити LA големи агрегати LB Ламеларни тела од ингл. Ламеларните тела ДОО Луис Карцином на белите дробови ЛМ Светлосна микроскопија KGF Фактор за раст на кератиноцити Мито Митохондрија NANC не-адренергични не-холинергични јадра и нецилирани клетки PBS фосфат пуфер солен раствор PDGF фактор на раст тромбоцит

PFA PPAR-γ Ref RF SA SD SMC SP SP-A SP-B SP-C SP-D SURS Tab TEM TF TG TGF-β TK TNF-α UA + O UD VEGF и VIP ZP zz Параформалдехид пероксизом рецептор активиран со пролифератор- γ референца Ричардсон боење Мали агрегати полу-тенки мазни мускулни клетки од ингл. Сурфактант на протеини на мазни мускулни клетки протеин сурфактант А сурфактант протеин Б сурфактант протеин Ц сурфактант протеин Д систематско униформа Табела за трансмисија на електронска микроскопија Тест полиња Туморска група трансформација на фактор за раст β Туморкачексија тумор некрозоктално фактор фактолос

2. Список на слики: Слика I: Структура на белите дробови користејќи го примерот на глувчето 4 Слика II: Земање примероци од примероците на белите дробови за микроскопија 14 Слика III: Тежини на телата на животните на почетокот (А) и на крајот (Б) од експериментите 27 Слика IV: Компаративна микроскопија на светлина Претставување на белодробниот паренхим со алвеоли и капилари 29 Слика V: Имунофлуоресцентна микроскопска претстава на инервацијата на душникот 30 Слика VI: Имунофлуоресцентна микроскопска претстава на душникот со 3Д површинска реконструкција 32 Слика VII: Имунофлуоресцентна микроскопска претстава на нервните влакна на темата 33 на нервните влакна Скенирање на слики со електронски микроскоп на трахеален епител 34 Слика IX: Електронски микроскопски слики на трансхеалниот wallид 35 Слика X: Преглед на стереолошките податоци за системот на сурфактант по 21 ден 38 Слика XI: Должина на аксон на нервните влакна содржани во душникот по 21 ден 39 Слика XII: Споредба на системите за стереолошко земање примероци 47 Слика XIII: Дијаграм на измерените фактори на раст и нивните можни ефекти 57 VIII

3. Список на табели: Табела I: Користени антитела (АК) 16 Табела II: Антитела (АК) за претходно вградување 19 Табела III: Број на животни по група по испитана стереолошка вредност 20 Табела IV: Преглед на утврдените волуменски густини и волумени 22 Табела V: Преглед на методот на мерење за одредување на густината на волуменот 22f. Табела VI: Преглед на утврдените густини на површините и површините 24 Табела VII: Преглед на методот на мерење за одредување на густината на површината 24 Табела VIII: Волумен на регионот на размена на бели дробови и гасови (паренхим) 36 Табела IX: Површина на алвеолите 36 Табела X: Стереолошки податоци за алвеоларните епителни клетки тип II 37 Табела XI: Стереолошки податоци за инервација на душникот 39 Табела XII: Стереолошки податоци за wallидот на душникот 40 Табела XIII: Објекти во вселената, нивно претставување во пресекот и стереолошки тест системи 49 Табела XIV: Квантитативна PCR на некои фактори на раст кај примероците на белите дробови 56 Табела XV: Анализа на крвта во ТГ и KG 61 IX