Хистолошки техники на боење како инструменти за анализа на храна Можности и граници
1 работилница за хистологија на храна/56-та работилница за хигиена на храна ГАП Хистолошки техники за боење како инструменти за инспекција на храна Можности и граници Лице за контакт: Александра Бартоломоä Совет и проценка Тел: +49 (2151) Факс: +49 (2151) Канцеларија за хемиски и ветеринарни истражувања Рајн-Рур-Вупер АöР, Страна 1 Дојчеровиот ринг 100, Интернет Крефелд:
2 Рутински процедури за анализа на хистолошка храна Официјална колекција на процедури за испитување (ASU) според 35 LMBG L (декември 1989 година) Определување на составот на ткивото на месо, месни производи и производи од колбаси Рутинска постапка за квалитативно и квантитативно хистолошко испитување Термин: Под суштински состав на ткиво на производи од месо ја разбра збирот на обработените делови на заклани или убиени топлокрвни животни. Идентификуваните клетки од растително потекло, исто така, можат да бидат вклучени во наодите за значителната природа. Страница 2
3 методи на боење според ASU L страница 3
4 Понатамошни методи на боење страница 4
5 Принцип на боење на Калеха: со пикроиндиго кармин како боење во плазма, различните ткивни компоненти се обоени на различен начин; боењето на јадрото се прави со нуклеарно црвено-проценка: Клеточни јадра: црвеникаво-кафеава (интензивно нуклеарно боење тешко достапно) Мускули загреани: светло зелена, не загреана: силно зелена до темно зелена голема паренхима, други ткива: (светло) зелено колагенско сврзно ткиво загреано: бледо сино, не загреано: сино еластично сврзно ткиво: жолта 'рскавица, коски: сина страна 5
6 Боење на Калеја-Лугол = комбинација на боење на Калеја и набоење на Лугол Употреба во производи што содржат јаглени хидрати (на пр. Ќофтиња) Употреба во примероци кои имаат макроскопски позитивни принципи за Лугол: покрај тоа, јаглехидратите (особено природниот скроб) се откриваат во Лугол Јодот содржан во растворот се депонира во спиралите спирали на јаглени хидрати и ги прикажува во сина и црна боја за да направи разлика помеѓу скроб и слично структурирани јаглехидрати со -1,4-врска од други јаглени хидрати, третман на амилаза може да се изврши на паралелни сечења пред боење (0, 5% раствор на амилаза во фосфатниот пуфер во тек на 2 часа) (историски: примерок од плунка) третманот со амилаза служи за проверка на јачината на паралелните делови третирани со амилаза кои содржат скроб, структурите претходно покриени со сино-црната дебелина може да се проценат на страница 6
7 Боење со Калеха (Лугол) Евалуација: органите и ткивото се прикажани како во боењето на Калеха, покрај тоа, јаглехидратите со - хелиите се обоени во кафеава до црна Резултат по третманот со амилаза: Скроб и слично структурирани јаглехидрати со -1.4 соединение не се забележуваат или не се прикажани на страница 7
8 опции за боење на Калеха (Лугол): преглед и диференцијално боење! квантитативна проценка преку дополнителен преглед за многу ткива/органи (не црн дроб!) можна идентификација и (полу) квантитативно одредување на количината на: скелетни, срцеви и јазични мускули (вклучително и степен на смалување) сврзно ткиво (колагено/еластично сврзно ткиво) коскеното ткиво, рскавично ткиво, садови, Gлебно ткиво, лимфно ткиво, нервно ткиво, кожна мукозна мембрана црн дроб, бубрег, бели дробови и други остатоци преработени колбаси месо со и без обвивка (можни лажни негативни резултати) растителни компоненти (на пр. Зачини, тартуфи) заштита на гроздовите на растителните клетки со поларизиран микроскоп)
9 Боење со Калеја (Лугол) Можности: Индикација за присуство на адитиви без месо Диференцијација на суров и загреан материјал Откривање на скроб и аналогни јаглехидрати со врска 1,4- (само боење на Калеја-Лугол) Индикација за присуство на јаглехидрати во боењето на Калеха-Лугол ако структурите останат обоени по третманот со амилаза страница 9
10 Ограничувања за боење на Калеха (Лугол): во зависност од степенот на загревање, клеточните јадра понекогаш не се прикажуваат оптимално. Јаглехидратите не се обележани во боењето на Калеха. Со боењето на Калеја-Лугол, откривањето на KH е поврзано со одредена структура на KH молекулата Страница 10
11 Calleja (Лугол) колбас за боја на јазик 25x страница 11
12 Calleja (Лугол) боен јазик колбас 100x страница 12
13 Боење на Калеха (Лугол) со варен колбас 25x страница 13
14 Калеха (Лугол) боење варен колбас 100x страница 14
15 Calleja (Лугол) боење на зовриена колбас 25x страница 15
16 Calleja (Лугол) боење на зовриена колбас 100x страница 16
17 Боење на суров колбас од Calleja (Лугол) 25x страница 17
18 Калеха (Лугол) боен суров колбас 100x страница 18
19 Боење на варен салам од Калеха (Лугол) 100x страница 19
20 Калеха (Лугол) боење варен салам 100x страница 20
21 Боење на Калеха (Лугол) со црвена колбас 25x страница 21
22 Calleja (Лугол) боење на зовриена колбас 100x страна 22
23 Калеја (Лугол) боење на варена колбас 100x страница 23
24 Калежа (Лугол) колбас за месо од живина 100x страница 24
25 Калеја (Лугол) боење на колбас од црн дроб 25x страница 25
26 Calleja (Лугол) боење на зовриена колбас 25x страница 26
27 Калеја (Лугол) боење на зовриена колбас 100x страница 27
28 Калеја (Лугол) боење на варена колбас (Винер) 100x страница 28
29 Калеја (Лугол) боење на варена колбас (Винер) 100x страница 29
30 Боење со хематоксилин-еозин (HE) Преглед на боење честопати се нарекува боење со хемалум-еозин Принцип: Структурите на органите можат да се разликуваат со боење на клеточните јадра со хематоксилин и цитоплазмата со еозин Евалуација: Клеточни јадра: сино-виолетова цитоплазма: розова страна 30
31 Можност за боење со хематоксилин-еозин (ХЕ): Сомнителни откритија направени со дамката Калеха (на пример, доказ за срце, црн дроб, бубрези, бели дробови, кожна мукозна мембрана, кожа на живина, кора) може да се потврдат бидејќи контрастот на клеточните јадра и цитоплазмата. Граници: во споредба За боење на Калеха, сврзното ткиво и мускулите е потешко да се разликуваат и квантифицираат поради недостаток на контрасти во боја Јаглехидратите не се обележани Рутинската употреба паралелно со боењето на Калеха не е потребна страница 31
32 Боење на хематоксилин-еозин (ХЕ) на колбаси од црн дроб 100x страница 32
Импрегнација со сребрен нитрат според диференцијалното боење на Коса за откривање на коскеното ткиво Принцип: врзаниот калциум во карбонатите и фосфатите се разменува за јони на сребро со додавање на пирогалол и калиум перманганат, соединението на среброто се сведува на метално сребро, значителни концентрации на калциум се врзуваат само во коските, и други Растворливите јони на калциум се мијат за време на претходната обработка на секциите Евалуација: Коскени честички: црна цитоплазма: црвено-кафеави Клеточни јадра: црвена страница 33
34 Импрегнација со сребрен нитрат според зовриена колбас од Коса 100x страница 34
35 Боење со трихром според Фајфер, Велхаузер и Гера - Ализарин С боење Диференцијално боење за квалитативно и квантитативно откривање на минерализирани честички на коските Принцип: Минерализирана коска е коскен материјал кој содржи калциум (хидроксиапатит) со pH 4,3-4,5 калциум на коските (и, исто така, други двовалентни катјони (Mg, Al)) и ализарин S заштитно светло жолто-црвено хелатно соединение (обоен лак) (не е опишано во ASU): дополнително обојување на делот претходно декалцифициран со 5% азотна киселина од истиот материјал Во декалцифицираниот дел, со зачувана морфологија, коскените честички добиваат сина боја на остатокот од ткивото бидејќи калциумот е растворен. Броење на коски на честички (не е опишано во ASU): 10 делови или приближно 40 cm² се испитуваат за квантитативно сметање (Bijker et al., 1984 ) Страна 35
36 Боење на трихром според Фајфер, Велхаузер и Гера - Ализарин С боење Евалуација: Коски: црвена 'рскавица: сина Мускули и сврзно ткиво: сина Резултат по третман на азотна киселина: Мускули, сврзно ткиво, деминерализирани коски: сина пештера: Отстранување на честичките на коските при подготовката на препаратите, на пр. Многу големи честички на коските може да се истуркаат од исечокот при сечење, останува празнина во сечењето Деминерализација на честичките на коските (на пр. Преку подолго складирање на формалин) Содржината на коските не може да се прецени, туку да се потцени страница 36
37 Боење со трихром според Фајфер, Велхаузер и Гера - колбас за живина за боење Ализарин С 25x страница 37
38 Боење со трихром според Фајфер, Велхаузер и Гера - колбас за живина за боење Ализарин С 100x страница 38
39 Боење на трихром според диференцијалното боење на Шарват за откривање на преработена попарена колбас Принцип: боењето открива честички од чад (во обвивката и месото од колбаси под него). Бојата ја покажува површината на колбасот променета по пушењето и ткивото директно прицврстено на него. Проценка: Ивици на чадени делови од колбаси: портокалово-црвена Останати делови од препаратот: сиво-зелените честички од преработена колбас обично се побиваат поради двојно загревање и не се целосно интегрирани во месото од колбаси, колку повеќе се пресекува преработениот материјал, толку е потешко да се открие страница 39
40 Боење на трихром според Шарват Можности: Во зависност од интензитетот на пушење, е прикажан широк портокалово-црвен слој μm. Доказ за пушење може да се спроведе и по отстранување на обвивката (лупење на кожата) Ограничувања: не пушена природна кожа (варени колбаси, колбаси од кари) Поради неговата поголема дебелина и постоечките подмножества во обојувањето на Грокот (црна) или во пренесената светлосна поларизација (спектрални бои), рециклираните варени честички од колбаси, исто така, може да се препознаат во бојата Калеха или Калеја-Лугол, заради набиената структура и поинтензивната зелена боја! Страница 40
41 Боење на трихром според варен колбас Шарват 100x страница 41
42 Боење на трихром според варен колбас Шарват 200x страна 42
43 Боење на Калеха-Лугол со варена колбас 25x страна 43
44 Боење со Грокот Диференцијално боење Импрегнацијата со сребро се користи за откривање на јаглехидрати со 1,2 диол групи, на пр. Во згуснувачи, препарати од растителни протеини и природни црева, препаратите од растителни протеини содржат остатоци од компоненти на клеточниот wallид (јаглехидрати), кои се видливи како подмножества во протеинските честички како резултат на бојата на Грокот (1,2-диол групи) овие доаѓаат на пр. во скроб, брашно од гуар, брашно од рогач, агар, алгинат, ксантан и целулозни деривати пред хидроксилните групи се оксидираат до алдехиди со хромна киселина, овие алдехидни групи го намалуваат сребрниот нитрат и се прикажуваат кафеаво-црно, а потоа се тонираат со златен хлорид страница 44
45 Специјални дамки: Боење со Грокот Евалуација: Јаглехидрати (KH): црна Мускули: розова Сврзно ткиво: розово Протеин од зеленчук: розова ако е растителна, откриени се протеини што содржат јаглени хидрати, јаглехидратите во црна боја се чуваат во розовите протеински честички, толку се повеќе прочистени растителните протеини, толку помалку јаглехидрати се присутни и може да се детектираат третман со амилаза за да се разликуваат скроб и аналогно структурирани јаглехидрати со - 1,4-врска на други јаглехидрати, амилаза третман може да се спроведе на паралелни сечења пред боење Резултат по третман со амилаза скроб и аналогно структурирани јаглехидрати со α-1,4 врската не се забележува страница 45
46 Обојување со Грокот Можности: Откривање на богати протеини, брашно од зеленчук и протеински препарати Препарати од растителни протеини: соја, памучно семе, лупини, семе од репка, сончоглед, пченица, пченка, леќа, грав Морфолошки критериуми: Брашно: Палисада и часовник стакло клетки од соја брашно Претеински протеини: на пр. TVP - сунѓереста структура на пченичен глутен, вид на навит од соја протеини Ограничувања: хидролизатите што не се детектираат не може да се утврди типот на растителен протеин, морфологијата дава индиции за потеклото страна 46
47 варена колбас во боја Грокот (Винер) 200x страна 47
48 Бауер-Калеха-Ф./Брод со периодична киселина Reganz-F. (ПАС) Диференцијално боење Двете дамки служат за откривање на јаглехидрати со 1,2 диолни групи во препаратите на растителни протеини ТВП содржат остатоци од компоненти на клеточниот wallид (јаглехидрати) кои се видливи како подмножества во протеинските честички. Боењето на Бауер-Калеја се изведува според АСУ со оксидација од хромна киселина: бојата се врзува за 2 соседни слободни алдехидни групи, алтернативно, помалку агресивната периодична киселина може да се користи за оксидација (= PAS боење) Принцип: откриени се полисахариди во кои има две хидроксилни групи на непосредно соседните атоми на јаглерод (1,2 диолни групи) дојди на пр. во скроб, брашно од гуар, брашно од рогач, агар, алгинат, ксантан и целулозни деривати пред хидроксилните групи се оксидираат до алдехиди со хромна киселина (дамка од Бауер-Калеха) или периодична киселина (PAS) страница 48
49 Бауер-Калеха-Ф./Брод со периодична киселина Reganz-F. (PAS) Евалуација: Јаглехидрати: црвено-виолетови мускули: зелено еластично сврзно ткиво: жолт колаген. Сврзно ткиво, 'рскавица, коски: бледо син растителен протеин: зелен третман со амилаза за разликување на скроб и аналогно структурирани јаглехидрати со - 1,4-врска од други јаглехидрати, третман со амилаза може да се спроведе на паралелни делови пред боење Резултат по третман на амилаза скроб и аналогно структурирани јаглени хидрати со α -1,4-врската се неоткриени Можности и ограничувања: како кај бојата на Грокот, страница 49
50 Брод на периодична киселина Reganz-F. (PAS) зовриена колбас (полски виенски) 200x страна 50
51 Заклучоци утврдувањето на ткивниот состав на месните производи и колбасните производи повторно доби значење во последниве години, не може да се замени со современи аналитички методи како метод на директно откривање во многу прашања, тој е неопходен за одредување на компоненти што се однесуваат на квалитетот, за намалување на квалитетот и забранетата овозможува диференцијација, идентификација и квантификација на употребените состојки и обезбедува информации за технологијата на производство. Отстапувања од општата перцепција може да резултираат од употреба на необични ткива, зголемен степен на разгорување или количина на ослободени мускулни протеини или додавање на преработено месо на страница 51
52 Заклучоци Додатоци на немесни состојки како што се препарати од растителни протеини, згуснувачи, високомолекуларни хидролизати на сврзното ткиво или растителни влакна, за кои е потребна декларација или не се дозволени во зависност од производот, се откриваат со употреба на специјални бои. Како по правило, микроскопската проценка на препаратите во боја на Calleja или Calleja-Lugol се користи за проценка на обоените препарати Доволно е продажба! Страница 52
53 Ви благодариме за вниманието! Лице за контакт: Александра Бартоломä Совет и евалуација Тел: +49 (2151) Факс: +49 (2151) Кабинет за хемиски и ветеринарни истраги Рајн-Рур-Вупер АöР, страница 53 Дојчеро-прстен 100, Крефелд Интернет: