PDF истраги за метаболизмот на гликоза - бесплатно преземање на PDF
Краток опис
1 55 ИСТРАУВАА НА МЕТАБОЛИЗАМОТ НА ГЛУКОЗА А. Биохемиски основи кај здрави луѓе, нивото на гликоза во крвта е.
Опис
ИСПИТУВАА ЗА МЕТАБОЛИЗАМ ГЛУКОЗА А.
Хронични заболувања на црниот дроб се јавуваат или се предизвикани од доминација на контра-инсулински хормони (на пример, во акромегалија, Кушингова болест, феохромоцитом). Примарните форми на дијабетес се поделени во две главни групи, имено дијабетес тип I, т.н. малолетнички дијабетес, чија причина сега се претпоставува дека се имунолошки фактори кои доведуваат до уништување на Б клетките, а со тоа и до недостаток на инсулин, од друга страна тип II дијабетес (дијабетес кај возрасни), за кој се одлучувачки други, делумно засега непознати механизми. Како по правило, ова не резултира во недостаток на инсулин, туку во намален инсулински ефект, на пример, поради недостаток на рецептори за инсулин. Особено со дијабетес тип II, кој може да напредува бавно во подолг временски период и на тој начин да остане неоткриен, прогресијата на болеста може да се спречи ако се третираат дебелината на факторите на ризик, нарушувањата на метаболизмот на липидите, физичката неактивност и доминацијата на антиинсулински хормони. Тестот за толеранција на глукоза извршен во стажирање игра важна улога во откривањето.
Кај дијабетес тип I, имунолошките скрининг тестови (за антитела против делови на островските клетки) ќе играат поголема улога во иднина, бидејќи тие се појавуваат долго пред почетокот на болеста, што обично е ненадејно за пациентот. Во овој момент, сепак, 80% од островските клетки обично се веќе уништени. Е
Одржување на константно ниво на гликоза во крвта преку строга контрола на метаболизмот (инсулин, диета, вежбање) со цел да се одложат секундарните болести како што се артериосклероза, слепило, оштетување на бубрезите, гангрена и невропатии. Одредувањето на гликолизиран хемоглобин спроведено во практикантската работа е важна помош за ова. Пациентите кои страдаат од неконтролиран дијабетес често имаат високи концентрации на гликоза во крвта во плазмата. Ова доведува до зголемена концентрација на глициран хемоглобин во еритроцитите. Еритроцитите од здрави лица со нормално ниво на гликоза во крвта содржат 4-7% од нивниот вкупен хемоглобин во гликолизирана форма. Кај слабо или слабо контролирани дијабетичари, оваа вредност може да достигне 18-20%. Одредувањето на гликолизиран хемоглобин овозможува долгорочно набудување на нивото на гликоза во крвта. Откако ќе се измени, хемоглобинот останува во крвотокот сè додека еритроцитот е жив (приближно 120 дена). Зголемено ниво на глициран хемоглобин не започнува да паѓа дури 5-6 недели по прилагодувањето на нивото на гликоза и достигнува нормален опсег по приближно 20 недели.
Укажува на концентрацијата на гликоза во крвта, концентрацијата на глициран хемоглобин претставува еден вид интеграл над нивото на гликоза во крвта за неколку недели.
Тест за толеранција на гликоза Во тестот за толеранција на глукоза, нивото на гликоза во крвта се мери над 1,5 часа по изложеност на глукоза во усната шуплина и се одвива текот на истиот со неговиот стандарден колектив. Покрај овој индиректен тест за функционалноста на Б-клетките на островчињата Лангерханс, временскиот тек на концентрацијата на инсулин во серумот исто така може да се одреди директно со употреба на комплексни имунолошки техники. Зголемувањето и намалувањето на концентрацијата на глукоза во крвта забележано со тестот за толеранција на глукоза кај здрави лица (нормален колектив) или кај дијабетичари е прикажано во Табела I. Асимптоматски дијабетес мелитус е осомничен ако се надмине максималната вредност од 11,1 mmol/l што се очекува по 30-60 минути. Вредноста од 2 часа е дијагностички повредна; ако е над 7,8 mmol/l, станува збор за дијабетес мелитус. Спротивно на тоа, максималните вредности под 8,9 mmol/l и двочасовните вредности под
6,7 mmol/l нормалниот опсег. Вредностите во средниот опсег се сомнителни и бараат проверка. За да не се загрози евентуално дијабетичен пациент со провокативен тест, манифестираниот дијабетес е исклучен претходно со помош на „дневен профил на гликоза во крвта“.
Евалуација на оралната изложеност на гликоза во крвта по администрација на глукоза Концентрација на гликоза во крвта во капиларна крв во mmol/l 0 '
Тестот за толеранција на глукоза исто така може да се користи за откривање (и активирање) на патолошка хипогликемија од различни причини (функционален хиперинсулинизам; аденом на островските клетки), при што максималните вредности по орална администрација на гликоза остануваат под нормалните. Примарниот дијабетес мелитус може да се подели во четири фази: 1.
Потенцијален дијабетес: нема дијабетичен метаболизам, тестови за скрининг на дијабетес се нормални, но семејни товари приближно 25% од нашето население
Латентен дијабетес: под стрес, бременост или прекумерна тежина, тестот за толеранција на глукоза исто така може да биде позитивен.
Асимптоматски ("субклинички" или "хемиски") дијабетес: позитивен тест за толеранција на глукоза; околу 8% од населението.
Клинички дијабетес: манифестиран дијабетес; околу 3% од населението. Хипергликемија и евентуално глукозурија. Тестови за скрининг на дијабетес не се потребни. Во овој случај, тестовите можат да го загрозат пациентот!
Глициран хемоглобин Глицираниот хемоглобин се произведува со неензимско додавање на глукоза во амино-групи на лизин во пептидниот ланец или на N-терминалниот крај на и под-единиците. Транспортер на гликоза во еритроцитната мембрана обезбедува брза размена на глукоза така што истата концентрација на глукоза е присутна во еритроцитите како и во плазмата. Алдозите реагираат со слободни амино групи и формираат база на Шиф. Гликозилниот остаток е неповратно ковалентно фиксиран во вториот чекор со преуредување на Амадори (Слика 1).
Специфичното одредување на глициран хемоглобин (HbA1) во хемолизатот е можно по претходно одвојување на фракциите на хемоглобин со помош на јонска хроматографија. Овој процес на раздвојување се заснова на електростатската интеракција на јони во примерокот што треба да се испита со јонски разменувач кој содржи групи на спротивен полнеж, кои се ковалентно фиксирани на нерастворлив носач материјал (матрица). Контраоните во интеракција со јонскиот разменувач можат да се разменуваат за други јони со исто полнење. Во зависност од полнењето на јонскиот разменувач, јонските разменувачи),
Јонски разменувачи) со негативен полнеж. Како и скоро сите протеини, и хемоглобинот носи електричен полнеж во воден раствор, што е предизвикано од кисели или основни групи на странични ланци на аминокиселини, како и од терминални „амино“ и „а-карбоксилни групи“. Нето полнежот на молекулата произлегува од збирот на позитивни и негативни индивидуални полнежи и зависи од pH вредноста на протеинскиот раствор. PH вредност на бројот на позитивни полнежи на оние на
негативна и на која молекулата се појавува без полнење однадвор, се нарекува изоелектрична точка. Под изоелектричната точка (IP) полнежот на молекулата е позитивен (катјонски) и затоа може да биде врзан за катјонски разменувач, додека над IP има нето негативен полнеж (анјон), што му овозможува на протеинот да се поврзе со анјонски изменувач. Електростатскиот ефект помеѓу протеинот и јонскиот разменувач може да се ослаби или дури и целосно да се раствори со промена на pH вредноста или со зголемување на концентрацијата на сол (конкурентни јони). Во овој експеримент, слабо кисел разменувач на катјони се користи за раздвојување на различните под-фракции на хемоглобинот. Дел од хемоглобинот се меша со суспензија на јонска размена. Под избраните услови (pH = 7,0) е врзан само нормалниот хемоглобин, додека гликолизиран хемоглобин (HbA1) останува во супернатантот. Различното однесување на адсорпција кај двајцата
гликолизиран и нормален хемоглобин, кој се создава со неповратно врзување на глукозата со амино група на протеини, со непроменета pH вредност, префрлувајќи го вкупниот полнеж кон негативниот опсег и со тоа ги намалува силите на врзување помеѓу гликолизиран хемоглобин и јонскиот изменувач.
Општи прашања метаболизам на гликоза; Регулирање на нивото на гликоза во крвта; Ефект на инсулин и антагонисти на инсулин; Хемија на наведените хормони; Метаболни промени во дијабетес мелитус; Хемоглобин (структура, функција, крива на врзување на кислород, ефект на Бор, ефект на пуфер, патолошки промени: квантитативни и квалитативни хемоглобинопатии, српеста клетка хемоглобин); Миоглобин.
ЦЕЛ НА ИСКУСТВОТО
Тест за толеранција на гликоза Откако лицето што тестирало зеде дефинирана количина гликоза орално, концентрацијата на гликоза во крвта брзо се зголемува откако гликозата се ресорбира од луменот на цревата. Концентрацијата на гликоза во крвта се враќа во нормала во одредено време по почетокот на вежбањето. Овој процес треба да се следи со утврдување на концентрацијата на глукоза во капиларната крв. Забележаното зголемување и намалување на концентрацијата на гликоза во крвта треба да биде прикажано графички, а потоа да се толкува.
Гликиран хемоглобин умре
комерцијално достапен сет на реагенси што содржи готова за употреба суспензија на слабо кисел разменувач на катјони. Целта е да се утврди количината на гликолизиран хемоглобин во сопствената крв, како и во примерок со зголемена вредност (дијабетична крв).
ПРОЦЕДУРА НА ИСПИТУВАЕ И ПРОТОКОЛ НА ИСПИТУВАЕ
Донесе список: смок, калкулатор
Подгответе пет цевки Епендорф со 0,5 ml хлороводородна киселина (0,35 mol/l). По 30, 60 и 90 минути, 0,05 мл капиларна крв се отстранува од прстот со помош на капиларна пипета и капиларот се става во цевките на Епендорф со хлороводородна киселина и се тресе добро (депротеинизација!). По преземањето на 0,05 ml капиларна крв за да се утврди вредноста на гликозата во крвта на гладно (примерок 1), лицето што тестира пие раствор од 75 g гликоза во 300 ml сок. Времето е најавено. 10 минути откако е земен последниот примерок и депротеинизиран со хлороводородна киселина, тој се центрифугира 4 минути со максимална брзина. Супердетантите внимателно се преточуваат, се пренесуваат во нови цевки на Епендорф и повторно се центрифугираат 4 минути. Супернантите се користат за одредување на гликоза во крвта (Дел C.3.). Ве молиме обележете ги пловните објекти со бројот на групата, како и бројот на примерокот и остатокот од примероците предадете ги на асистентот по тестот!
Реагенс за глукоза: Гликоза оксидаза (ГОД) оксидира глукоза во глуконска киселина со формирање на H2O2. Водород пероксид го оксидира донаторот на водород (фенол и 4-аминофеназон) во боја Д во реакција катализирана од пероксидаза (POD):
ГОСПОД гликоза + H2O + O2 глуконска киселина + H2O2
Количината на формирана боја Д е мерка за количината на конвертирана гликоза. Бидејќи коефициентот на моларно изумирање на D зависи од условите на тестот, измереното истребување (бранова должина 500 nm) е поврзано со истребување на стандардна вредност на глукоза.
Спроведување на определување на гликоза во крвта
Потребните решенија се на работната маса: I:
Буфер на реагенс фосфат на глукоза, 0,10 mol/l, pH = 7,0; 50 µg хромоген (0,75 mmol/l фенол и 0,25 mmol/l 4-аминофеназон); > 1,5 KU/l POD; > 15 KU/l БОГ; > 2,0 KU/l мутаротаза
Стандард на гликоза (5,55 mmol/l).
Разредете 50 μl од нивото на гликоза во 0,5 ml хлороводородна киселина. Користете ги подготвените примероци (Дел C.1.), Подгответе ги сериите според следнава табела, измешајте темелно и оставете да стои 10 минути на собна температура.
Калибрирајте го фотометарот на 500 nm, утврдете ја апсорпцијата на стандардот и примероците наспроти празната вредност.
Гликиран хемоглобин 1.
Земање крв и подготовка на хемолизат: ставете 200 µl реагенс за хемолиза во сад Епендорф (Eppi) означен со „E“; Соберете крв со капиларна пипета од 50 μl; Веднаш додадете ја исполнетата капилара во Eppi и добро измешајте така што крвта ќе се испушти; Оставете да отстои 5 минути.
Пристап кон HbA1 Приодите се подготвуваат паралелно со хемолизати од стандардна крв (Eppi „S“), автологна крв (Eppi „E“) и дијабетична крв (Eppi „D“). Енергично протресете го хемолизатот пред пипетирање! Пипетајте 100 µl хемолизат во секоја од јонските цевки; Обележете ги цевките („S“, „E“ или „D“) и вметнете сепаратори (оставете околу 1 см над течноста); Инкубирајте 5 мин и енергично протресете се во интервали од една минута; Внимателно исцедете ја течноста со сепараторот и измерете ја апсорпцијата [oПо точка 4 (Е1)].
Тотална серија Hb Серија во три паралелни серии, 20 μl хемолизат "S", "E" или "D" се ставаат во епрувета со 5 ml дестилирана вода. мешани (Не заборавајте на буквите)! Оставете да отстои 5 мин и потоа измерете ја апсорпцијата [o Точка 4 (ЕГ)]
Мерење на истребување примероци од крв на = 405 nm (фотометарот е прилагоден на вода).
Тест за толеранција на глукоза (спроведување на експериментот) Кратка верзија Веднаш извршете ги предметите 1-4, а потоа прочитајте ! Експеримент 1 1) 2) 3) 4)
Додадете 500 µl хлороводородна киселина на 4 Eppis (етикетирани 0,30, 60,90 мин.) И извлечете крв. Користете капилар за ова. (Капиларот мора да биде полн, нема воздушен меур) Фрлете го капиларот во садот со времето „0 мин“ и веднаш добро протресете го. Пијте кола, запишете го времето.
Експеримент 2: Може да се изврши во кое било време (соодветно е времето 30 или 60 минути од експериментот 1).
Дел Б) 21) Пополнете три пробни цевки со по 5 ml вода (етикетирани како „E“, „S“, „D“) 22) Од Eppis („E“, „S“, „D“) 20 µl хемолизат секоја во епруветите исполнети со вода
даваат 23) Добро измешајте и оставете да отстои 5 минути. 24) Повторно измерете ја апсорпцијата наспроти вода на 405 nm.
По чистењето, не фрлајте ги стандардите за гликоза, реагенс за гликоза и реагенси за хемолиза. Сите други примероци садови се отстрануваат во дадените крвни садови за отпад.
ОЦЕНУВАЕ И ДИСКУСИЈА ЗА ГРЕШКА
Тест за толеранција на глукоза Внесете ја измерената апсорпција и резултатите од определувањето на глукозата во следната табела и нацртајте ја кривата. Како ги толкувате резултатите?
5E500 концентрација на гликоза во крвта (mmol/l)
Концентрацијата на гликоза во крвта се пресметува на следниов начин:
Гликолизиран хемоглобин Внесете ја измерената апсорпција во следната табела, утврдете го факторот F и пресметајте го процентот на фракцијата HbA1 во вкупниот хемоглобин на автологна и дијабетична крв. Пропорцијата на HbA1 во стандардната крв е 6,8%.