Chlamydia pneumoniae ДНК; Централна воена универзитетска болница д-р
ДНК од кламидија пневмонија
Генерални информации
Кламидија е мал интрацелуларен врзан прокариотски паразит (0,2-1 μm), кој ги има и бактериските карактеристики (синтетизира РНК и ДНК, има wallид и клеточна мембрана слични на Грам-негативни бактерии, чувствителна е на антибиотици од типот на циклин) и вирус (се размножува само во живи еукариотски клетки, не може да синтетизира АТП, што е обезбедено од клетки домаќини).
Сепак, тој се разликува од сите микроорганизми со посебниот циклус на раст, кој се карактеризира со 2 различни форми:
• елементарниот корпускул (EC), прилагоден на вонклеточното постоење;
• мрежести корпускули (CR), прилагодени на интрацелуларната средина (интрацитоплазматски).
Елементарните корпускули се многу заразни и откако ќе влезат во телото, тие се прицврстуваат на клеточната мембрана и се ендоцитираат. Интрацелуларно ендозомот не се спојува со лизозомите, како што обично се случува со секој интернализиран материјал, со тоа што Кламидија останува во фагоцитираната везикула во текот на целиот животен циклус. Набргу по влегувањето во ќелијата, ЕЦ се трансформира во ЦР, што е поголемо, не може да зарази други клетки и ги дели бинарните внатре во вакуолите („интрацитоплазматски хламидијални подмножества“). По околу 36 часа CR се реорганизира во СЕ, така што по 48-72 часа целата цитоплазма на клетката може да се замени со подмножества што содржат стотици/илјадници СЕ. Иако цитоплазмата на клетката е окупирана скоро целосно од ЕЦ, функцијата на клетките е минимално погодена. Ослободувањето на елементарните корпускули може да се случи со егзоцитоза на подмножества или со лизирање на клетките домаќини. EC се во можност да заразат нови клетки, или во рамките на истиот организам или во нов домаќин. Така, животниот циклус на C. pneumoniae е поделен помеѓу елементарните трупови, кои можат да заразат нови домаќини, но не можат да се репродуцираат, и мрежестите трупови кои се размножуваат, но не се во можност да предизвикаат нова инфекција.
Неодамнешните класификации ја делат Кламидија во 4 семејства, од кои најважен во човечката патологија е фам. Chlamydiaceae, која содржи два рода:
• род Chlamydia - најважниот претставник е C. trachomatis;
• род Chlamydophila - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus итн.
Пневмонија и бронхитис се најчестите болести поврзани со C. pneumoniae. Во серија клинички испитувања, 10% од случаите на пневмонија и приближно 5% од случаите на бронхитис и синузитис кај возрасни биле припишани на микроорганизмот.
Симптомите на инфекција со C. pneumoniae не се разликуваат од другите причини за пневмонија и тука спаѓаат назална конгестија, кашлица, треска и диспнеа. Повеќето случаи на пневмонија се релативно благи и не бараат хоспитализација. Сепак, дури и во благи случаи, целосното закрепнување е бавно, и покрај соодветната антибиотска терапија, и кашлицата и малаксаноста може да траат неколку недели по почетокот на болеста.
Неколку хронични заболувања исто така се поврзани со инфекција со C. pneumoniae. Пациентите со историја на респираторни инфекции со C. pneumoniae имаат поголема веројатност да развијат астматичен бронхитис, што укажува на тоа дека овие микроорганизми може да бидат важен фактор во развојот на астма или егзацербации на астма.
Културните техники за изолација на микроорганизмот се макотрпни и одземаат многу време; Молекуларното тестирање е брз начин за откривање на ДНК за C. pneumoniae во разни респираторни секрети, со што се олеснува раното воспоставување соодветна антибиотска терапија. Во една неодамнешна студија кај деца со респираторни инфекции, чувствителноста и специфичноста на ПЦР-тестот за дијагноза на акутна инфекција беа 63,6% и 100%, соодветно.
Препораки за одредување на кламидија - ДНК - откривање на белодробни инфекции.
Обука на пациентот - не е потребно.
Примерок собрани - а) ексудат на фаринксот или назофаринксот; б) течност добиена со бронхијална лаважа или бронхо-алвеоларна лаважа, трахеална или бронхијална аспирација, спутум.
Контејнер за берба - а) сув пуфер (без медиум за транспорт); б) стерилен контејнер.
Количината собрана - б) минимум 2 mL.
Потребна е обработка по бербата - не е потребно.
Причини за одбивање на доказите - недоволна количина за анализа; контаминација на примерокот; примероци премногу стари.
Стабилност на тестот - примероците се стабилни 48 часа на 2-4 ° C пред екстракција на нуклеински киселини.
Метод и толкување на резултатите
Метод - PCR Light-Cycler во реално време: реакција на полимеризација со синџири со откривање на акумулираниот PCR производ во реално време, со мерење на емитираната флуоресценција (квалитативен тест).
Референтни вредности - Кламидија - неоткриена ДНК.
Граница за откривање - 200 деца/мл.
Интерпретација на резултатите
Откривање на кламидија - ДНК во респираторните секрети сугерира клиничка дијагноза на инфекција со кламидија пневмонија.
Граници и пречки
Иако PCR е метод што обезбедува брза и сигурна дијагноза, лажни негативни резултати може да се појават кај примероците кои содржат многу малку микроорганизми.