Локализација, идентификација и ексцизија на протоколот на масни масни магацини (превод на германски)
Резиме
Поради драстичната и негативна врска помеѓу дебелината и другите коморбидитети, оправдано е истражување за улогата на масното ткиво во болеста и целокупното здравје. Ние претставуваме протокол за изолација и отстранување на депоа на масно ткиво што овозможува проучување на масното ткиво со употреба на in situ и in vitro методи.
Вовед
Дебелите се појавија забележителни во центарот на вниманието на медиумите, поради драматичното зголемување на дебелината во последните децении на 20 век. Дебелината во моментов влијае на повеќе од една третина од возрасните и 17% од децата и адолесцентите во Соединетите Држави (САД) 1. Низ сите етникуми, статистичките истражувања околу епидемијата на дебелина покажаа дека нехиспанското црнци имаат највисока стапка на дебелина прилагодена за возраста (49,5%) во споредба со мексиканско-американските (40,4%) од сите Хиспанци (39,1%) и нехиспанското белци (34,3%) 2. Економското влијание на дебелината е исто така зголемен интерес за здравствениот систем. Во 2012 година беше проценето дека годишните медицински трошоци за нега на дебелината во САД во 2005 година беа 190,2 милијарди долари, што е скоро 21% од вкупниот буџет за медицински трошоци. За жал, се проценува дека детската дебелина е одговорна за 14 милијарди долари само во директни медицински трошоци. Статистички, утврдено е дека просечната медицинска цена на лицата со прекумерна тежина е 2.741 УСД годишно поголема од оние без овој морбидитет од 3-5.
Дебелината е важен фактор на ризик за различни болести како што се: дијабетес тип 2, нарушувања на метаболизмот на липидите, кардиоваскуларни заболувања, карцином, мускулно-скелетни нарушувања и хронично воспаление. Дебелината е длабоко поврзана со патогенезата на метаболички синдром и други хронични болести 6-8. Со вакви драстични и негативни врски помеѓу дебелината и другите коморбидитети, научното истражување го насочи вниманието кон тековната епидемија и разновидната и клучна улога на масното ткиво за подобро разбирање.
Историски гледано, масното ткиво се сметало за незначително и се сметало за едноставно ткиво за полнење. Во моментов се покажа дека масното ткиво игра многу важни улоги во функцијата на организмот: метаболизам, хормонален баланс, воспаление, заштита и изолација 9. Масното ткиво првенствено се состои од адипоцити, но содржи и перицити, ендотелијални клетки, моноцити, макрофаги и плурипотентни матични клетки. дистрибуирани низ телото во различни депоа. Главните наслаги може да се најдат субдермално, субкутано, интрамускулно и висцерално. 10. Се покажа дека масните наслаги имаат депо специфични профили на супстанции кои покажале депо специфична подложност на дебелина и сродни нарушувања 8.
Традиционално, масното ткиво е класифицирано во два главни типа: бело масно ткиво (WAT) и кафено масно ткиво (BAT); иако неодамнешната литература покажува присуство на трета група крстено нежно или бежо масно ткиво 11. Се покажа дека масното ткиво има различни бои поврзани со морфологии, метаболички функции, биохемиски својства и модели на генетско изразување 10. Адипоцити во WAT единствена, голема капка маснотии и променливи количини на митохондрии. WATdominant се наоѓа во поткожните и висцералните локалитети на телото. WAT делува првенствено како место за складирање на енергија и заштита на органи. Адипоцитите во ДДВ имаат мултилокуларна морфологија и изобилство митохондрии. НДТ се наоѓа првенствено во вратот и големите крвни садови на градниот кош, како и во 12-те лопати на рамото. НДТ првенствено функционира во однесувања што трошат енергија што ја регулираат термогенезата 7. Се покажа дека британското или бежовото масно ткиво ја дели аналогната морфологија и израз на БАТ, но откриено е дека потекнува од бели масни клетки 11.
Целта на протоколот е да обезбеди точен метод за идентификување и изолација на различни видови масни наслаги од повеќе анатомски места.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Протокол
ЗАБЕЛЕШКА: Целото тестирање на животни беше спроведено со одобрение на Институционалниот комитет за грижа и употреба на животни (IACUC) на Универзитетот во Синсинати и во согласност со Националниот упатство за здравствена заштита и употреба на лабораториски животни од страна на Националниот институт за здравство (публикација NIH 85-23), Ревидиран 1996 година).
1. Еутанизирајте го и стерилизирајте го глувчето
- Ставете го глувчето во капка за готвење направено од супратерапевтска доза на изофлуран и оставете го ефектот да вдише. Откако глувчето е убиено, извадете го од полето.
- Менување на грлото на матката како второ средство за евтаназија.
- Стерилизирајте ја надворешната површина на глувчето со чистење на животното со 70% етанол.
2. Идентификација и изолација на три различни депоа на масно ткиво
3. Изолација на периваскуларно масно ткиво (PVAt)
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.
Резултати од репрезентацијата
Идентификација и локализација на ингвиналното поткожно масно ткиво, интеркапуларното кафеаво масно ткиво, епидидимисот на висцералното масно ткиво (Илустрација 1) како и аортниот лак, периваскуларното масно ткиво, торакалното аортно масно ткиво, соседното аортно масно ткиво и инфрареналното масно ткиво (Слика 2) беше успешно постигната со употреба на опишаниот хируршки метод. Хистолошки преглед и диференцијација помеѓу примероците БАТ и ВАТ беа позитивни со боење на хематоксилин и еозин (H&E) (Слика 3) оценето. Анализата на РНК адипонектин (ADIPOQ), рецепторот-активиран со пероксизом размножувач (PPAR-γ), ефекторот a (CIDEA) предизвикан од клеточна смрт се измерени за сите горенаведени изолирани и отсечени складишта (податоци не се прикажани).
Примарните клеточни линии од поткожните масни клетки и периваскуларните адипоцити беа култивирани и диференцирани од преадипоцити до адипоцити успешно за анализа на микроелементи. Културните предидицити се претворија во адипоцити со О-обојување со црвено масло (Слика 4) одобрен. Успешна изолација, култура и диференцијација на масните клетки беше постигната за употреба во ин витро студии и успешно се мери протеинската активност. Ензимската активност на матрицата металопротеаза-2 (ММП-2) беше измерена во група на третман во споредба со контролната. Активноста на ММП-2 беше одредена in situ во примарна периваскуларна адипоцитна линија преку зимографија (Слика 5) мери.
Дискусија
Дебелината може да доведе до широк спектар на истовремени болести и целосно разбирање на улогата што ја игра дебелината не е целосно разбрана; оттука, потребно е понатамошно истражување во областа на дебелите. Modelsивотински модели, особено модели на глувци, се идеални за прелиминарно истражување на прогресијата на болеста и тестирање на потенцијалните фармацевтски третмани. Кога се користат овие модели, точното раздвојување и отстранување на наслагите на масното ткиво е исклучително важна и неопходна алатка за проучување на патологијата на масното ткиво што влијае на болести.
Во сегашната литература за дебели наслаги, има значителна количина литература за метаболичко однесување и разлики помеѓу дебели наслаги и нивните анатомски локации. Сепак, ретки се тие што нудат темелен метод за тоа како специфично да се лоцираат, идентификуваат и изолираат овие депоа. Врз основа на прегледот на тековните постапки за изолација од масното ткиво, постои мала подгрупа на протоколи tcap за да се обезбеди методологија за тоа како да се изолира едно или две депоа истовремено. Сепак, прецизна техника што овозможува изолација на повеќе складишта со минимална количина на подготовка и контаминација, како и адреси на различни методи за испитување на собраните примероци, е овој Протокол 13-14.
Во рамките на овој метод има неколку чекори кои се клучни за изолацијата и чистотата на примерокот. Алатки за чистење, ракавици и површини често за отстранување на влакна и остатоци е императив чекор за да се избегне контамо загадување. Кога ја сечете кожата преку периметарот на глувчето, за да го изложите перитонеумот за одlубување, важно е да не дозволите ништо да оди премногу длабоко. Сечењето на перитонеумот ќе го олесни слабеењето и ќе го зголеми потенцијалот за контаминација на примерокот. При сечење на складиштето на масно ткиво SQ важно е да се идентификуваат триаголните граници на депото пред да се исече било кое масно ткиво. Исто така, посекотините треба внимателно да се направат за да се избегнат мускулите и соседните садови, жлезди и масно ткиво. Ова ќе спречи контаминација на примерокот од алтернативно масно ткиво, ткиво на жлезда, мускули или крв.
Главното ограничување на изолацијата и ексцизијата на депоата на масното ткиво, во оваа постапка и другите споредливи процедури, може да се најде во дефинирањето на границите на одредени депоа. Поради лошо дефинираните граници во складиштата, на пример, поткожните складишта, изолацијата на мала количина на нечистотии од соседните маснотии може да биде тешка. Друго ограничување може да се најде во обезбедувањето доволно ткиво да се собере на складиштата поврзани со васкуларните органи за дополнителни обиди. Ова ограничување понекогаш бара здружување на примероци, иако зависи од локацијата на изолација и диетата поврзана со животното.
Откако ќе се изолираат депоата на масното ткиво, тие можат да се користат за различни анализи. Масното ткиво може да се користи за молекуларни студии како што се експресија на протеини, ензимска активност и анализа на генска експресија. Покрај тоа, примарната клеточна линија на адипоцитите може да се користи за изолирање на ин витро студии. Бесмртни клеточни линии, исто така, можат да се користат за ин витро студии, сепак бесмртните клетки не се толку кредибилни како примарно одделните клеточни линии. Конечно, масното ткиво може да биде цврсто или замрзнато во ОКТ за хистолошки преглед за да се идентификува инфилтрација на леукоцити, локализација на протеини и карактеризација на морфологијата на масните клетки.
Потребна е претплата. Ве молиме, препорачајте JoАВО на вашиот библиотекар.