Ембрионирано пилешко јајце - биологија
Колку е топло премногу топло за живот длабоко под дното на океанот?
Антибиотици од бактерии
Миграција на клетки: новооткриена функција на познат протеин
Молекуларен компас за порамнување на клетките
Она што ги прави лисјата стареат наесен
Демократијата на птиците за мршојадец
Околина на Екембо: Луѓето исто така живееле во отворени пејзажи
| Генетика | Земјоделство, шумарство и сточарство
Разновидноста на пченицата е создадена со вкрстување на диви треви
Колку е топло премногу топло за живот длабоко под дното на океанот?
Ембрионирано пилешко јајце
Техника на ембрионирано пилешко јајце
Само пилешки јајца од инфективно контролирана популација на пилешко се користат за размножување на вируси, бидејќи ембрионот не смее да биде претходно заразен со природни патогени кои предизвикуваат болести на пилешко. Овие јајца се нарекуваат и наведено без патогени (SPF јајца). Со цел да се добие соодветна големина на ембрионот, оплодените пилешки јајца понатаму се инкубираат во специјални инкубатори 5 до 14 дена на 38 ° C и релативна влажност од 60%, во зависност од техниката на инфекција избрана подоцна. Овие инкубатори имаат и уред за вртење кој редовно ги движи јајцата. Со посебен флуоресцентен екран, развојот на ембрионот може да се забележи откако ќе се отстранат јајцата („чиста“), ќе се решат мртвите или не-оплодените јајца.
Инокулација на органите на додатокот
Обично, не е самиот ембрион, туку неговите органи на додаток се инокулираат. Во зависност од видот на вирусот или прашањето (репродукција или откривање на вирус), ова се жолчката, амнион, алантоис или хорионска алантоична мембрана (CAM). Бидејќи овие покажуваат оптимална големина за инокулација и подложност на вируси во различно време за време на развојот на ембрионот, должината на времето на инкубација за употребените јајца е исто така различна. Најдобро време за инфекции на жолчката ќеса е 5-7 дена по оплодувањето, за амнион и алантоис 10 дена, за CAM 11 до 12 дена. Ако инокулацијата се случи прерано, органот на слепото црево не е доволно голем, ако се одржи предоцна, сè повеќе инхибиторни влијанија на имунолошката одбрана (вклучително и формирање на имуноглобулин Y) или намалувањето на чувствителноста на органите може да спречи успешна инфекција.
Инокулацијата се изведува под стерилни услови за да се избегне контаминација на бактериите. По дезинфекција, лушпата од јајцето се отвора со мал удар. Кога CAM се инокулира, ова се одвива на страната на јајцето на кое ембрионот лежи одвнатре; во сите други органи на додатокот се отвора тапиот пол. Околу 0,1 до 0,2 ml течност што содржи вирус (инокулум) се инјектира во соодветната структура со употреба на канила. Потоа садот е затворен со лепило или восок. По еден ден натамошна инкубација, јајцата се проверуваат со лесен уред и мртвите ембриони се подредуваат како оштетување на инокулацијата. После дополнителни 1-6 дена, реплицираните вируси може да се добијат од алантоична или амнионска течност (белка од јајце) или мембрана од CAM и жолчка. Пред ова, јајцето се чува преку ноќ на 4 ° C, така што ембрионот умира и крвните садови се собираат. Обично, следат понатамошни чекори на прочистување, како што се филтрација или ултрацентрифугација, со цел да се добијат препарати од вирус што е можно почисти.
Проценка на развојот на ембрионот
Инокулираните јајца редовно се рентген, обично дневно, и се проценува статусот на развој на ембрионот. Ако се исклучи оштетување на бактериска контаминација и инокулација, смртта на ембрионот може да укаже на репликација на вирусот, ова може да се забележи, на пример, откако ќе се инокулира жолчката со вируси на херпес симплекс. Други макроскопски видливи знаци на репликација на вирусот се зголемени васкуларни ознаки во ембрионот, знаци на воспаление, петехијално крварење или малформации. Кога се вакцинираат со вируси на вариола сипаници, вируси на херпес симплекс и вирусот Рус сарком, се појавуваат темни, размачкани промени на CAM, т.н. „Pипки“. Овие се толку карактеристични што можат да се користат за да се постави дијагноза кога ќе се открие вирус. Во повеќето случаи, следат разни понатамошни испитувања за да се идентификува патогенот, на пример, електронски микроскопски преглед, тест за хемаглутинација или директно откривање на компонентите на вирусот (антигени и нуклеинска киселина) за прецизно пишување.
Важноста во дијагностиката на вируси
Важноста на ембрионираната јајце-кокошка за изолација на вирусот и дијагностицирање на вирусот е ограничена, во случај на хумани вируси, сега е ограничена на изолација и пишување на вируси на грип. Во изолација на непознати, нови патогени, покрај молекуларните методи, клеточна култура и електронска микроскопија, се користат и ембрионирани јајца на кокошка. Во ветеринарната медицина, голем број на патогени микроорганизми се одгледуваат во културата на јајца, вклучително и претставници на вируси на сипаници, ортомиксовируси, херпес вируси, тогавируси и разни птичји вируси. Следната табела дава преглед на најважните патогени микроорганизми и нивното однесување во ембрионираните јајца на кокошка. Некои вируси можат да се размножуваат успешно и со прифатлив принос во пилешкото јајце ако дивиот тип е прилагоден на пилешкото јајце преку неколку пасажи (слепи пасуси).
Производство на вакцини во ембрионирано пилешко јајце
Големата предност на репликацијата на вирусот кај ембрионираните јајца на кокошка е високиот принос на вирусот. Ова се користеше во производството на разни вакцини уште во 1960-тите, на пример за да се добие доволно суровина за мртви вакцини (сплит вакцини) против вирусот на сипаници и разни вируси на грип. Особено со второто, репродукцијата во клеточните култури сè уште не достигнала доволно висока концентрација на вируси, така што ембрионираното јајце-кокошка сè уште го одредува индустриското производство на вакцини против грип до ден-денес Проблемот со овој метод е сепак одземаат многу време чистење на материјалот од јајца, кое секогаш остава траги од протеини од јајца и затоа не може да се администрира ако има алергија на пилешки протеини.