Поткожна инфузија на ангиотензин II со помош на осмотски пумпи предизвикува аневризми на аортата кај протоколот на глувците

Резиме

Поткожна имплантација на осмотски пумпи нуди удобен пристап за подолго и поконзистентно испорака на врска. Овој пристап е широко користен за проучување на аневризми на абдоминална и торакална аорта кај глувци.

Вовед

Аневризмите на аортата покажуваат трајно зголемување на луменот на аортата, што сугерира руптура и обично доведува до смрт. Оваа болест се јавува и во абдоминалните и торакалните аортни региони кои се нарекуваат аневризми на абдоминална аорта (ААА) и аневризми на торакална аорта (ТАА), соодветно. Поради нецелосно разбирање на молекуларните механизми и патофизиолошките процеси, не постои докажана медицинска терапија што може да спречи експанзија или прекин на кој било вид на аневризма на аортата. Бидејќи е тешко да се добијат примероци на пациенти и да се спроведат експерименти врз луѓе директно, истражувањата насочени кон дефинирање на механизмите на АААС честопати се екстраполираат од животинските модели. Најчесто користен животински модел е поткожна инфузија на ангиотензин II (AngII) во глувци. Во споредба со другите хируршки пристапи за индукција на ААА кај глувци, како што се интра-аортна еластаза перфузија или пери-аортна апликација на калциум хлорид, за кои е потребна лапаротомија 1,2, овој метод не бара влез во телесната празнина и бара минимална хируршка вештина 3,4.

AngII инфузијата кај глувците резултира во длабоко проширување на регионот на торакална аорта, која претежно е ограничена на асцендентната аорта, која е најчестиот регион за ТАА кај луѓето 19,22-26. Слично на Агенциите предизвикани од АнгИг, ТАА индуцираните за време на инфузијата на АнгИИ, исто така, рекапитулираат многу функции на човечки ТАА 25. Сепак, за разлика од Ангелите ААА, предизвикани од АнгиДи, ТАА-индуцираните од АнгИИ не се поврзани со хиперхолестеролемија и немаат пола.

Општата цел на поткожното AngII инфузија кај глувците е да се проучат патолошките карактеристики и молекуларните механизми на AAAS и TAA.

Протокол

Изјава за етика: Студиите за глувци се спроведуваат со дозвола од Комитетот за институционална грижа и употреба на животни на Универзитетот во Кентаки (број на протокол IACUC: 2006-0009). По положувањето, глувците се предозираат со кетамин коктел (

1. Пресметување на количината на AngII

Забелешка: Овој протокол се заснова на примерот на инфузија AngII (1.000 ng/kg/min) хранат со заситена диета збогатена со масни киселини 4 недели во 4 машки LDL рецептори -/- глувци.

  1. Измерете ги глувците за проучување пред да ја пресметате количината на AngII потребна за инфузија.
  2. Користете го шаблонот (Табела 1) да се пресмета AngII масата потребна за експериментот. Користете „Средна брзина на пумпа“ во упатството за употреба на пумпите како „Стапка на пумпа“ прикажана на чекор 4 од образецот. Во шаблонот запишете ги чекорите 1-5 рачно, а чекорите 6-10 се пресметуваат автоматски.
    1. Како поднесување, глувците ќе добијат 1 g телесна тежина за време на инфузија од 1000 ng AngII/kg/min за 4 недели.
      ЗАБЕЛЕШКА: Секој глушец има многу различно зголемување на телесната тежина што зависи од многу варијабли, како што се оптоварување на глувци и диета. Ние рутински користиме „0“ или „1 g“ врз основа на сопственото искуство од претходните студии.
    2. Пресметајте 300 μl вкупен волумен на раствор AngII за секое глувче, бидејќи за секоја пумпа потребни се приближно 250 μl.

2. Распуштање на AngII

  1. Чувајте ги лиофилизираните ампули со AngII на -20 ° C. Израмни ги ампулите со AngII на собна температура пред да ги отворите.
  2. Измерете ја пресметаната маса на AngII (7,3 mg, како кај Табела 1 прикажана) во стерилна пластична цевка.
    ЗАБЕЛЕШКА: Според индексот на Мерк, не користете стаклени цевки за растворање бидејќи воден раствор на AngII има силен афинитет за врзување со стаклото.
  3. Додадете го пресметаниот волумен на стерилен солен раствор (1.200 μl) на пластичната цевка која содржи лиофилизиран AngII, капаче и се меша со инверзија додека растворот не стане чист.
  4. Означете ги броевите на глувчето # 1, # 2, # 3 и # 4 на индивидуални стерилни пластични цевки со капаци (0,5-1,5 ml). Подгответе раствор на AngII под ламинарна хауба за секое глувче врз основа на телесната тежина, како во чекор 1.2 и Пресметана табела 1.
    1. На пример, пипета 3,6 μl стерилен солен раствор во цевка # 1, потоа 296,4 μl раствор на AngII и се меша со нежно пипетирање нагоре и надолу.
  5. Означете ги броевите на глувчето на пластични цевки со капачиња (4 ml, стерилни). Овие ќе се користат за инкубирање на пумпи, како што е опишано во чекор 3.13.

3. полнење на осмотската пумпа

7. Сликање на лице на аорта

  1. Исечете ја аортата надолжно преку надворешната и внатрешната искривување на аортниот лак и исечете ги отворените главни гранки вклучувајќи ја неродната, левата каротидна артерија и левата клавикуларна артерија. Игла на аортата рамно со надворешно адвентичко поставување покрај црниот восок.
  2. Стекнете слика на лице од аортата на интимната површина со исто зголемување. Вклучете линијар во секоја слика за калибрација, како што е прикажано во 4-ти.

Резултати од репрезентацијата

4-те машки LDL рецептори -/- глувци опишани во протоколот беа еутаназирани по 4 недели од инфузии на AngII. Аортите беа собрани, исчистени и сликани за да се визуелизираат дилатации на аортата. Како во Слика 3 е прикажано, аортите имаат различни својства, вклучително и проширување на надбубрежниот регион (ААА); 3А), продолжување на областа за искачување (ТАА); 3Б) или проширување на обете области (присуство и на ААА и ТАА, Сл 3C), додека морфологијата кај глувчето беше приближно нормална (3Д). Проширувањето на абдоминалната аорта се квантифицира со мерење на ex vivo максималната ширина на надбубрежниот регион, како што е наведено со црвената линија во 3А е прикажано. За да се измери асцендентната дилатација на аортата, аортите беа исечени и забележани, како кај Слика 4 е прикажано. Интималната површина беше измерена црвени линии во асцендентната област на аортата (област опкружена со та во 4А) за квантифицирање на ТАА. Во секоја слика е вклучен владетел за стандардизирање на мерењата оттогаш во две фигури Прикажани се 3 и 4.

поткожна
. Слика 1. Репрезентативна слика на исполнета осмотска пумпа Секоја пумпа содржи два дела: главно тело и модератор на проток. По полнењето на телото на пумпата со AngII, се воведува модераторот на проток за да се запечати пумпата.

инфузија
Слика 2. Процес на хирургија на импланти на пумпа (А) Глувчето се става во ламинарна хауба со носен конус кој континуирано ослободува изофлуран и кислород собрани заедно. (Б) Прав хемостат е вметнат во засекот за да се формира поткожен тунел; (C) Пумпата е нежна преку вметнатиот засек на кожата; (Г) Засекот на кожата е захефтан по вметнувањето на пумпата.

ангиотензин
Слика 3 Аортни слики (ex vivo) на глувци внесени со AngII AngII 1.000 ng/kg/min беше внесена кај машкиот LDL рецептор -./- глувци 28 дена. (А) ААА придружени со тромбоза; Црвената линија (2,05 мм) го покажува мерењето на максималната ширина на аортата во надбубрежниот регион. (Б) асцендентна дилатација на аортата (ТАА) со приближно нормална абдоминална аорта; (C) Длабоки дилатации и во асцендентните и надбубрежните аортни региони (ТАА и ААА); (Г) грубо нормална аорта без очигледно зголемување на асцендентната или надбубрежната област на аортата.

4.jpg "/>Слика 4. Слики на лице од торакална аортна област од глувци заразени со AngII AngII 1.000 ng/kg/min беше внесена во машки LDL рецептори кисна. -/- глувци 28 дена. Областа нацртана со црвена линија претставува асцендентен аортен регион вклучувајќи дел од аортниот лак.

1 Потребна е доза 1000 ng/kg/мин
2 Започнете ја телесната тежина (најголем глушец) 24,8 Г.
3 Проценето вкупно зголемување на телесната тежина 1 Г.
4-ти Стапка на пумпање 0,25 ул/час
5 Број на глувци 4-ти
6-ти Доза на час за животното 1518 година нг
7-ми Потребен заклучок 6072 година ng/ul
8-ми За 300 μl раствор 1,82 mg/300 μ
ПОТРЕБНО РЕШЕНИЕ
9 Вкупно AngII (mg) 7.3 мг
10 Растворен во солен раствор и # 160; 1.200 ул
глушец телесна тежина Фактор на разредување Волумен (ул) Тежина на пумпата (g) Пополнет сооднос
# (G) AngII Солена Празно Пополнети (%)
1 24.5 1,0 296,4 3.6 1.1443 1.3877 99
2 23.0 0,9 278.2 21,8 1.1677 1.4145 100
3 24,8 1,0 300.0 0,0 1.1438 1.3904 100
4-ти 21,8 0,9 263,7 36.3 1.1438 1.3904 100
Фактор на разредување = телесна тежина на глувчето/најголема телесна тежина на глувчето
глушец телесна тежина Фактор на разредување Волумен (ул) Тежина на пумпата (g) Пополнет сооднос
# (G) AngII Солена Празно Пополнети (%)
1 24.5 1,0 296,4 3.6 1.1443 1.3877 99
2 23.0 0,9 278.2 21,8 1.1677 1.4145 100
3 24,8 1,0 300.0 0,0 1.1438 1.3904 100
4-ти 21,8 0,9 263,7 36.3 1.1438 1.3904 100

Табела 1: Пресметка за 28-дневната инфузија преку осмотски пумпи.

Дискусија

Осмотските пумпи кои го испорачуваат AngII субкутано е рутински пристап кон индукција на аневризми на аортата кај глувци. Врз основа на податоци од многу лаборатории, постојаните резултати покажаа дека ова е сигурен и репродуктивен метод за испитување на ААА 3,4 и ТАА 22-26 кај глувци. Оттука, овој модел на глушец се користи како модел што рекапитулира неколку функции на аневризми на човечка аорта и обезбедува механистички увид во овие разорни болести.

Додека стареењето е фактор на ризик за ААА кај луѓето, тоа не е систематски проучено за АГА-предизвикани од AngII кај глувци. Сепак, се чини дека фреквенцијата и сериозноста на ААА-предизвиканите од AngII се слични кај глувците на возраст од 8-48 недели 4,5,7. Во моментов има само неколку студии за ТГА индуцирани од AngII кај глувци на возраст од 8 до 24 недели од 22 до 26 години, кои не покажаа очигледни разлики поврзани со возраста на формирањето на ТАА.

Сумирајќи, AngII инфузијата се постигнува со поткожна имплантација со осмотски пумпи за да се предизвикаат аневризми на аортата кај глувци. Овој метод обезбедува AngII континуирано со дефинирана стапка за одредени временски периоди што се користат за проучување и на AAA и на TAA.

Откривање

Објавувањето на овој напис е спонзорирано од Алзет.